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P物质在自发性高血压大鼠脊髓中间带灰质的分布

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神经解剖学杂志 1999年第4期15卷 377-380页

作者：孙成三于恩华山东滨州医学院解剖学教研室滨州256603 北京医科大学解剖学系北京100083

为探讨自发性高血压的发病机理，本实验用免疫细胞化学方法结合体视学分析，研究了自发性高血压大鼠脊髓中间带灰质内Ｐ物质免疫反应阳性纤维和终末的分布。结果如下：（１）Ｐ物质免疫反应产物在自发性高血压大鼠和京都种正常血压大鼠... 详细信息

为探讨自发性高血压的发病机理，本实验用免疫细胞化学方法结合体视学分析，研究了自发性高血压大鼠脊髓中间带灰质内Ｐ物质免疫反应阳性纤维和终末的分布。结果如下：（１）Ｐ物质免疫反应产物在自发性高血压大鼠和京都种正常血压大鼠脊髓中间带灰质分布的模式未见明显差异；（２）在脊髓Ｔ２、Ｔ５、Ｔ８、Ｔ１１、Ｌ１各节段的中间外侧核本部区的平均光密度值，自发性高血压大鼠高于京都种正常血压大鼠（Ｐ＜０．０５）。这一结果提示，在自发性高血压大鼠，脊髓胸腰部中间外侧核本部区Ｐ物质免疫反应阳性产物表达增加。而该区Ｐ物质表达的增加意味着该区交感节前神经元机能状态的某种改变，这种改变可能与自发性高血压大鼠血压的升高和维持有关。

关键词： P物质高血压脊髓中间带灰质大鼠自发性

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一氧化氮与高血压的关系

滨州医学院学报 2000年第3期23卷 305-305页

作者：孙成三于恩华滨州医学院解剖学教研室北京医科大学解剖学系

带6个组氨酸尾的可溶性GDNF第1受体的重组表达和活性分析

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解剖学报 2002年第2期33卷 157-160页

作者：陈立南孙成三陈晴段德义杨慧张进禄徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京100054

目的　用DNA重组方法去除胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)受体 (GFRα 1)基因 3’ 端的与细胞膜糖基化磷脂酰肌醇 (GPI)相连的信号序列 ,使表达的GFRα 1以可溶性形式介导GDNF的作用。　方法　设计一对引物 ,其中下游引物含有 6个组氨... 详细信息

目的　用DNA重组方法去除胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)受体 (GFRα 1)基因 3’ 端的与细胞膜糖基化磷脂酰肌醇 (GPI)相连的信号序列 ,使表达的GFRα 1以可溶性形式介导GDNF的作用。　方法　设计一对引物 ,其中下游引物含有 6个组氨酸密码子序列 ,以人GFRα 1全长cDNA为模板 ,PCR扩增编码可溶性GFRα 1序列并亚克隆于pBK RSV真核表达载体 ,转染COS 7细胞 ,收获培养上清 ,进行SDS PAGE及Western免疫印迹分析 ;使用钴离子金属螯合层析柱进行纯化 ;检测RET酪氨酸磷酸化以鉴定其生物学活性。　结果　Western免疫印迹证实培养上清液中有分子量为 6 0kD的特异阳性条带 ,与糖基化的GFRα 1分子量相符 ;金属螯合层析得到纯度达90 %以上的重组GFRα 1蛋白 ,每mlCOS 7培养上清中含有 0 5 μg。　结论　带 6个组氨酸尾的重组可溶性GFRα 1能够介导GDNF的作用。

关键词：蛋白纯化真核表达受体表位标记胶质细胞源性神经营养因子受体酪氨酸激酶重组表达

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大鼠Fas配体基因的克隆

解剖学报 2000年第2期31卷 177-179页

作者：孙成三段德义于凤山于恩华徐群渊北京医科大学解剖学系北京100083 首都医科大学神经科学研究所北京100054

目的　研究 Fas配体 (Fas ligand,Fas L )在移植免疫方面的作用 ,克隆其编码的全部 c DNA序列 ,并添加 Kozak序列 ,以便在真核细胞高效表达大鼠 Fas L。　方法　从大鼠的睾丸组织中提取总 RNA,设计上、下游引物以 RT- PCR的方法扩增出一... 详细信息

目的　研究 Fas配体 (Fas ligand,Fas L )在移植免疫方面的作用 ,克隆其编码的全部 c DNA序列 ,并添加 Kozak序列 ,以便在真核细胞高效表达大鼠 Fas L。　方法　从大鼠的睾丸组织中提取总 RNA,设计上、下游引物以 RT- PCR的方法扩增出一 931bp的 DNA片段 ,将这一片段重组于 p BK - RSV载体中 ,酶切鉴定插入片段正确后进行全序列分析。　结果　证实该研究所克隆的 c DNA是编码正确的大鼠 Fas L基因 ,与发表于 Gene Bank上的序列相比 ,完全正确。已构建成用于真核表达的重组质粒 p BK- RSV/r Fas L。　结论　克隆到了编码正确的大鼠Fas L的 c DNA全序列 ,对移植免疫和帕金森病基因治疗的基础研究及临床应用具有重要意义。

关键词：基因克隆 DNA fas配体大鼠震颤性麻痹

GDNF在人脑胶质瘤细胞中表达的检测及其cDNA的克隆

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神经解剖学杂志 2001年第1期17卷 6-10页

作者：段德义孙成三杨有文于凤山张进禄徐群渊首都医科大学北京市神经科学研究所北京100054

为研究人脑胶质细胞源性神经营养因子在脑胶质瘤中的表达及其在治疗神经系统疾病中的作用 ,本研究克隆了其前体蛋白及其成熟多肽的 c DNA序列 ,将之用于真核及原核细胞表达。提取我国自建的脑胶质瘤细胞系 BT32 5总 RNA,设计两对引物用... 详细信息

为研究人脑胶质细胞源性神经营养因子在脑胶质瘤中的表达及其在治疗神经系统疾病中的作用 ,本研究克隆了其前体蛋白及其成熟多肽的 c DNA序列 ,将之用于真核及原核细胞表达。提取我国自建的脑胶质瘤细胞系 BT32 5总 RNA,设计两对引物用逆转录 PCR法扩增上述两种长度的 c DNA片段 ,然后重组于 p GEM-T载体 ,酶切鉴定插入片段正确后测序。结果表明 ,脑胶质瘤细胞中只扩增出 5 5 8bp的胶质细胞源性神经营养因子全长 c DNA片段 ,未见 6 36 bp片段 ;且扩增效率较成熟多肽 c DNA甚低。提示 ,该细胞合成的胶质细胞源性神经营养因子可能还存在不含有信号肽而只能在细胞内潴留的成熟多肽形式。作为自泌性生长因子 ,它可能调节瘤细胞生长等生物学行为 ;同时克隆到的胶质细胞源性神经营养因子全长及其成熟多肽的 c DNA片段。

关键词：胶质细胞源性神经营养因子基因克隆 RT-PCR DNA序列分析胶质瘤细胞

一氧化氮合酶阳性神经元在大鼠脊髓中间带的分布

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滨州医学院学报 2000年第6期23卷 521-522页

作者：孙成三季勇高华善于恩华临沭县卫校北京医科大学

目的 :观察一氧化氮合酶阳性神经元在正常大鼠脊髓中间带的分布。方法 :用正常成年 Wistar大鼠脊髓 ,采用冰冻切片 ,以尼可酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸脱氢酶 (NADPH- d)免疫组织化学方法 ,观察一氧化氮合酶阳性神经元在脊髓中间带的分布。... 详细信息

目的 :观察一氧化氮合酶阳性神经元在正常大鼠脊髓中间带的分布。方法 :用正常成年 Wistar大鼠脊髓 ,采用冰冻切片 ,以尼可酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸脱氢酶 (NADPH- d)免疫组织化学方法 ,观察一氧化氮合酶阳性神经元在脊髓中间带的分布。结果 :在正常 Wistar大鼠中 ,一氧化氮合酶阳性神经元主要分布在脊髓的中间外侧核本部区、中介核和中央管周围。结论 :了解一氧化氮合酶阳性神经元在中间带的分布 ,可能对进一步了解自发性高血压等病理情况下的变化有参考价值。

关键词：一氧化氮合酶脊髓分布神经元

人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)cDNA的克隆

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神经解剖学杂志 2000年第2期16卷 131-134页

作者：于凤山段德义孙成三秦丽华徐群渊首都医科大学北京神经科学研究所北京100054

为了研究人碱性成纤维细胞生长因子在治疗神经系统疾病中的作用 ,克隆其 c DN A序列 ,并添加 K ozak序列 ,以用于真核细胞表达。本实验提取我国自建的脑胶质瘤细胞系 BT32 5总 RN A,设计上、下游引物用逆转录 PCR法扩增 c DNA片段 ,然... 详细信息

为了研究人碱性成纤维细胞生长因子在治疗神经系统疾病中的作用 ,克隆其 c DN A序列 ,并添加 K ozak序列 ,以用于真核细胞表达。本实验提取我国自建的脑胶质瘤细胞系 BT32 5总 RN A,设计上、下游引物用逆转录 PCR法扩增 c DNA片段 ,然后重组于 p GEM- 3zf( + )载体 ,酶切鉴定插入片段正确后测序。结果 :RT- PCR扩增到 4 73bp的带有 K ozak序列的 c DN A片段。显示 :克隆到碱性成纤维细胞生长因子 c DN A片段。

关键词： bGFG RT-PCR 序列分析神经系统疾病基因克隆

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一氧化氮合酶在大鼠室旁核各亚核的分布

滨州医学院学报 1997年第6期20卷 532-533页

作者：高华善孙成三刘忠华许鹿希

用ＮＡＤＰＨ－ｄ组织化学方法观察一氧化氮合酶阳性神经元在正常Ｗｉｓｔａｒ大鼠下丘脑室旁核各亚核的分布。结果显示，在正常Ｗｉｓｔａｒ大鼠中，一氧化氮合酶阳性神经元主要分布在室旁核内侧亚核。

关键词：一氧化氮合酶大鼠室旁核解剖学

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室旁核内外侧亚核神经元细胞构筑的比较

滨州医学院学报 1998年第1期21卷 7-8页

作者：高华善刘忠华孙成三韩玉贞马云滨州医学院解剖教研室256603

目的：为下丘脑室旁核内侧亚核和外侧亚核神经元是否存在形态上的差异提供解剖学依据。方法：用计算机图像分析系统，检测两亚核神经元的一些形态学指标。结果：外侧亚核神经元明显大于内侧亚核（Ｐ＞０．０５）。结论：下丘脑室旁核内... 详细信息

目的：为下丘脑室旁核内侧亚核和外侧亚核神经元是否存在形态上的差异提供解剖学依据。方法：用计算机图像分析系统，检测两亚核神经元的一些形态学指标。结果：外侧亚核神经元明显大于内侧亚核（Ｐ＞０．０５）。结论：下丘脑室旁核内、外侧亚核神经元不但功能不同，而且形态也不同。

关键词：内侧亚核外侧亚核形态检测