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p38MAPK／14-3-3γ通路在LPS预处理对抗心肌细胞缺氧／复氧损伤中的作用

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中国药理学通报 2012年第9期28卷 1239-1243页

作者：刘丹尹东廖章萍孙惦许旻何明南昌大学医学院药理学教研室江西南昌330006 西省分子医学重点实验室江西南昌330006

目的研究p38MAPK/14-3-3γ通路在LPS预处理对抗缺氧/复氧(A/R)损伤中的作用。方法采用原代培养乳鼠心肌细胞,建立A/R损伤模型及APC、LPS预处理保护模型。实验结束后测定p38MAPK磷酸化蛋白表达及14-3-3γ蛋白表达,同时检测培养液中乳酸... 详细信息

目的研究p38MAPK/14-3-3γ通路在LPS预处理对抗缺氧/复氧(A/R)损伤中的作用。方法采用原代培养乳鼠心肌细胞,建立A/R损伤模型及APC、LPS预处理保护模型。实验结束后测定p38MAPK磷酸化蛋白表达及14-3-3γ蛋白表达,同时检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、四唑盐(MTT)比色试验测定细胞存活率、TUNEL法检测细胞凋亡、线粒体肿胀实验检测线粒体通透性转换孔(mPTP)开放、流式细胞仪检测线粒体膜电位。结果 LPS预处理对随后心肌A/R损伤有类似APC的保护作用,同时伴随p38MAPK的磷酸化水平升高和14-3-3γ蛋白表达升高;给予SB203850特异性阻断p38MAPK通路,则14-3-3γ蛋白表达明显下调,并且心肌细胞LDH值升高,细胞存活率下降,心肌细胞的凋亡指数升高,mPTP开放加剧,线粒体膜电位降低。结论 LPS预处理对心肌细胞A/R损伤有保护作用,其机制可能是通过激活p38 MAPK,上调14-3-3γ的表达实现。

关键词：缺氧/复氧损伤心肌保护 LPS 凋亡 14-3-3γ p38MAPK通路

Bax在14-3-3γ对抗脂多糖诱导的心肌细胞损伤中的作用

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天津医药 2012年第12期40卷 1222-1225页

作者：刘丹尹东孙惦许旻何明南昌大学医学院 330006 江西省分子医学重点实验室

目的:探讨14-3-3γ对脂多糖(LPS)所致心肌损伤的作用与抑制Bax向线粒体移位的关系。方法:采用原代SD乳鼠心肌细胞,随机分为4组:对照组;LPS组,LPS10mg/L加至培养基中6h;pFLAG+LPS组,空载质粒pFLAG转染至心肌细胞,24h后处理同LPS组;pFLAG-... 详细信息

目的:探讨14-3-3γ对脂多糖(LPS)所致心肌损伤的作用与抑制Bax向线粒体移位的关系。方法:采用原代SD乳鼠心肌细胞,随机分为4组:对照组;LPS组,LPS10mg/L加至培养基中6h;pFLAG+LPS组,空载质粒pFLAG转染至心肌细胞,24h后处理同LPS组;pFLAG-14-3-3γ+LPS组,重组质粒pFLAG-14-3-3γ转染至心肌细胞,24h后处理同LPS组。四唑盐(MTT)比色法检测各组细胞存活率,全自动生化分析仪检测乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸磷酸酶(CPK)值,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blotting检测细胞14-3-3γ蛋白水平、细胞浆及线粒体的Bax蛋白水平。结果:LPS致心肌细胞损伤,与对照组相比,LPS处理使细胞存活率明显下降(P<0.01),LDH、CPK值明显升高(P<0.01),细胞凋亡率增加(P<0.01),促使Bax蛋白从胞浆向线粒体移位,转染重组质粒pFLAG-14-3-3γ使14-3-3γ在心肌细胞内高表达后可明显逆转LPS所致的损伤,上述各指标均有所改善,并抑制Bax蛋白向线粒体的移位。结论:14-3-3γ对抗LPS所致心肌细胞损伤与抑制Bax从胞浆向线粒体移位有关。

关键词：脂多糖类肌细胞心脏创伤和损伤基因,肿瘤抑制 bcl-2相关X蛋白质14-3-3蛋白质类

LPS预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

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第三军医大学学报 2012年第17期34卷 1707-1710页

作者：刘丹尹东汤蕾孙惦许旻何明南昌大学医学院药理教研室南昌330006 南昌大学医学院第二附属医院江西省分子医学重点实验室南昌330006

目的探讨14-3-3γ基因在LPS预处理对抗心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤中的作用。方法构建pSU-PER/14-3-3γRNA干扰重组质粒,转染入心肌细胞,分为5组:对照组、A/R组、LPS+A/R组、pSUPER+LPS+A/R组、pSUPER/14-3-3γ+LPS+A/R组。Western blot检测14-3-3γ蛋白表达,生化自动分析仪测定乳酸脱氢酶(LDH)活性,MTT法测定细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡,线粒体肿胀实验检测线粒体通透性转换孔(mPTP)开放。结果 A/R损伤使细胞存活率下降,LDH升高,细胞凋亡增加,mPTP开放;LPS预处理可使14-3-3γ表达明显增加,通过抑制mPTP开放,对A/R损伤的细胞有保护作用;pSUPER/14-3-3γRNA干扰重组质粒通过抑制14-3-3γ蛋白表达,取消LPS预处理的保护作用。结论 LPS预处理可对抗心肌细胞缺氧/复氧损伤,其机制与上调14-3-3γ,从而抑制mPTP开放有关。

关键词： 14-3-3γ 内毒素耐受缺氧/复氧损伤 RNA干扰

AMPKα2基因shRNA重组质粒的构建以及在氯离子介导的大鼠心肌缺氧/复氧损伤中的作用

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中国病理生理杂志 2012年第12期28卷 2113-2118页

作者：刘丹孙惦许旻周敏吴晓牧何明南昌大学医学院江西省人民医院神经内科江西南昌330006

目的:构建AMP活化的蛋白激酶α2亚基(AMPKα2)基因shRNA重组表达质粒,转染H9c2心肌细胞,探讨其在氯离子(Cl-)介导的心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤中的作用。方法:构建靶向AMPKα2基因的shRNA重组质粒pSuper-AMPKα2 shRNA,转染H9c2细胞;We... 详细信息

目的:构建AMP活化的蛋白激酶α2亚基(AMPKα2)基因shRNA重组表达质粒,转染H9c2心肌细胞,探讨其在氯离子(Cl-)介导的心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤中的作用。方法:构建靶向AMPKα2基因的shRNA重组质粒pSuper-AMPKα2 shRNA,转染H9c2细胞;Western blotting法测定AMPKα2的蛋白表达情况。实验分5组,每组重复6次:(1)Control组;(2)A/R组;(3)Cl--free A/R组;(4)pSuper+Cl--free A/R组;(5)pSu-per-AMPKα2 shRNA+Cl--free A/R组。处理结束后,生化自动分析仪测定LDH活性,MTT法测定细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡和活性氧(ROS)水平,试剂盒检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果:重组表达质粒pSuper-AMPKα2 shRNA经测序证明构建正确;转染心肌细胞后,AMPKα2蛋白表达明显下降;Cl--free A/R组较之A/R组细胞存活率升高,LDH含量下降,细胞凋亡减少,ROS生成减少,SOD和GSH-Px活性增加;转染pSuper-AMPKα2 shRNA质粒后,阻断了Cl--free液的保护作用,且ROS生成增加,SOD和GSH-Px活性也下降。结论:成功构建pSuper-AMPKα2 shRNA重组质粒。AMPKα2基因沉默阻断了Cl--free液对心肌细胞A/R损伤的保护作用。

关键词： AMP活化的蛋白激酶α2亚基氯缺氧复氧损伤细胞凋亡氧化性应激

14-3-3γ对烧伤及LPS诱导所致大鼠心肌损伤的保护作用

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中国病理生理杂志 2012年第7期28卷 1160-1165页

作者：刘丹尹东严广华孙惦许旻何明南昌大学医学院江西南昌330006 南昌大学第二附属医院江西省分子医学重点实验室江西南昌330006

目的:研究14-3-3γ在烧伤及脂多糖(LPS)引起的心肌损伤中的保护作用。方法:体内实验建立大鼠烧伤及LPS损伤模型,检测3、6、12、24 h各时点心功能及心肌细胞14-3-3γ蛋白表达水平的改变;体外实验采用新生大鼠心肌细胞,构建pFLAG-14-3-3... 详细信息

目的:研究14-3-3γ在烧伤及脂多糖(LPS)引起的心肌损伤中的保护作用。方法:体内实验建立大鼠烧伤及LPS损伤模型,检测3、6、12、24 h各时点心功能及心肌细胞14-3-3γ蛋白表达水平的改变;体外实验采用新生大鼠心肌细胞,构建pFLAG-14-3-3γ质粒,于LPS损伤前24 h转染至心肌细胞,实验结束后检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,MTT法测定细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,线粒体肿胀实验检测线粒体通透性转换孔(mPTP)开放。结果:烧伤及LPS损伤模型大鼠心电图ST段均有明显改变,心肌细胞14-3-3γ蛋白表达水平均显著升高。转染了pFLAG-14-3-3γ质粒的心肌细胞能明显对抗随后的LPS损伤,与未转染组比较,14-3-3γ能明显提高细胞存活率,降低LDH活性,减少细胞凋亡,抑制mPTP的开放。结论:14-3-3γ可能通过抑制mPTP的开放对烧伤及LPS所致的心肌损伤起保护作用。

关键词： 14—3—3γ蛋白脂多糖类烧伤心肌线粒体通透性转换孔

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高校辅导员队伍现状分析及对策研究

科海故事博览·科教创新 2011年第4期 110-111页

作者：孙惦刘建光南昌大学江西南昌330031

高校辅导员是高等学校教帅队伍和管理队伍的重要组成部分,是开展大学生思想政治教育的骨千力量.本文以某省三年内的高校辅导员队伍状况调查统计数据和问卷调查数据为研究样本,并结合工作实践,认真剖析高校辅导员队伍建设现状及存在的问... 详细信息

高校辅导员是高等学校教帅队伍和管理队伍的重要组成部分,是开展大学生思想政治教育的骨千力量.本文以某省三年内的高校辅导员队伍状况调查统计数据和问卷调查数据为研究样本,并结合工作实践,认真剖析高校辅导员队伍建设现状及存在的问题,并提出了对策,期望有所稗益.

关键词：高校辅导员现状分析对策研究

来源：博看期刊评论

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新生班级的辅导员工作实践探索

科教导刊 2010年第2期 77-78页

作者：鲍旎曼黄世博孙惦南昌大学江西南昌330031

班级是学校教育和管理的基本单位,班级管理工作在高校管理工作中具有举足轻重的作用,尤其是新生班级管理工作应该提到学校工作的重要日程上来。辅导员是班集体的组织者和教育者,如何管理好新生班级显得尤为重要。本文结合笔者管理新生... 详细信息

班级是学校教育和管理的基本单位,班级管理工作在高校管理工作中具有举足轻重的作用,尤其是新生班级管理工作应该提到学校工作的重要日程上来。辅导员是班集体的组织者和教育者,如何管理好新生班级显得尤为重要。本文结合笔者管理新生班级的实践,对做好新生班级的辅导员工作作了一些积极有益的探索。

关键词：新生班级辅导员工作实践探索

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构建高校辅导员队伍建设长效机制探究

科教导刊 2011年第13期 162-163页

作者：刘建光董加文孙惦南昌大学党委组织部江西南昌330031 南昌大学研究生院江西南昌330031 南昌大学药学系江西南昌330031

面对不断变化新形势、新任务和新要求,"建设一支什么样的辅导员队伍,特别是专职辅导员队伍"、"如何建设辅导员队伍"已成为我们必须认真研究和予以解决的重要课题。笔者结合多年从事学生思想政治教育工作的实践,提出了构建高校辅导员队... 详细信息

面对不断变化新形势、新任务和新要求,"建设一支什么样的辅导员队伍,特别是专职辅导员队伍"、"如何建设辅导员队伍"已成为我们必须认真研究和予以解决的重要课题。笔者结合多年从事学生思想政治教育工作的实践,提出了构建高校辅导员队伍建设长效机制的若干对策,以期对高校辅导员队伍建设和发展起到一定的引领作用。

关键词：高校辅导员队伍建设长效机制制度体系

高校生命教育课程体验式教学的运用——以《生命成长》一章为例

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江西教育 2015年第15期 29-30页

作者：欧阳解秀孙惦石小玉郑月慧李绍波南昌大学医学实验教学中心南昌大学生命科学学院

通过对高校生命教育课程进行体验式教学的探索与实践,对生命成长教学内容的教学效果进行比较分析,发现体验式教学法的教学效果有明显改善。同时,研究结果表明生命教育课程教学以活动体验为主、以课程形式为辅的教学形式更受学生欢迎,高... 详细信息

通过对高校生命教育课程进行体验式教学的探索与实践,对生命成长教学内容的教学效果进行比较分析,发现体验式教学法的教学效果有明显改善。同时,研究结果表明生命教育课程教学以活动体验为主、以课程形式为辅的教学形式更受学生欢迎,高校的生命教育应在保证课程内容的前提下,争取形式的多样化,从而完整实现课程教学目标。

关键词：体验式教学生命教育生命成长课程运用