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巨噬细胞极化在缺氧性肺动脉高压中的作用

中国老年学杂志 2024年第2期44卷 360-363页

作者：孙得胜刘虹延罗志梅欧阳瑶刘先胜遵义医科大学附属医院呼吸与危重症医学科贵州遵义563003 华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸与危重症医学科国家卫健委呼吸疾病重点实验室遵义医科大学附属医院针灸科

目的观察缺氧性肺动脉高压大鼠肺组织中CD68、Arg1、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达变化,探讨缺氧性肺动脉高压与巨噬细胞极化的关系。方法20只清洁级SD大鼠,采用随机数字表法分为对照组和模型组,各10只,模型组在实验动物缺氧装置中给予... 详细信息

目的观察缺氧性肺动脉高压大鼠肺组织中CD68、Arg1、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达变化,探讨缺氧性肺动脉高压与巨噬细胞极化的关系。方法20只清洁级SD大鼠,采用随机数字表法分为对照组和模型组,各10只,模型组在实验动物缺氧装置中给予常压缺氧(10%O 2),每天缺氧8 h,同时给予充足的饮食,持续4 w。对照组不予以低氧刺激。28 d后在生理多导仪监视下,通过右心漂浮导管测定两组右心室收缩压力,判断造模是否成功。测压后以免疫组织化学法观察肺组织和肺血管中CD68、Arg1、iNOS表达和分布。结果与对照组相比,模型组右心室收缩压显著升高(P<0.05),缺氧性肺动脉高压模型建立成功。与对照组比较,模型组巨噬细胞标志物CD68、M2型巨噬细胞标志物Arg1表达明显升高,M1型巨噬细胞标志物iNOS表达明显降低(均P<0.05)。结论巨噬细胞可能参与了缺氧性肺动脉高压的发病,且巨噬细胞向M2方向的极化可能在这一过程中发挥了作用。

关键词：巨噬细胞极化缺氧肺动脉高压

一种肺血管基因敲减动物模型的构建及在肺动脉高压中的运用

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实用医学杂志 2023年第4期39卷 404-409页

作者：罗志梅刘虹延孙得胜遵义医科大学附属医院呼吸与危重症医学科贵州遵义563003 遵义医科大学附属医院中医科贵州遵义563003

目的探讨经大鼠的气道注入1型腺相关病毒(AAV1)携带的KLF4-shRNA能否有效构建肺血管基因敲减动物模型以及其在肺动脉高压中的运用。方法根据大鼠KLF4基因序列,设计针对大鼠特异性的siRNA序列,并以细胞计数和细胞迁移实验加以验证,然... 详细信息

目的探讨经大鼠的气道注入1型腺相关病毒(AAV1)携带的KLF4-shRNA能否有效构建肺血管基因敲减动物模型以及其在肺动脉高压中的运用。方法根据大鼠KLF4基因序列,设计针对大鼠特异性的siRNA序列,并以细胞计数和细胞迁移实验加以验证,然后进一步构建AAV1-KLF4-shRNA腺相关病毒载体。将44只清洁级SD大鼠随机分为4组:健康对照组、盐水模型组、对照病毒载体组、基因敲减组。后3组大鼠分别气管内注入生理盐水(盐水模型组)、AAV1-control vector(对照病毒载体组)、AAV1-KLF4-shRNA(基因敲减组)。1个月后对后3组进行烟熏造模,烟熏4个月后麻醉各组大鼠,分别检测右心室收缩压和平均右心室压,并取肺组织以免疫荧光法观察病毒载体在肺血管中的表达情况,通过PCR方法测定肺动脉中KLF4水平,通过HE染色比较肺小血管中膜厚度评估肺血管肥厚程度。取大鼠心脏计算右心肥厚指数。结果细胞计数和细胞迁移实验证实选用的KLF4-siRNA链有效。免疫荧光实验显示,经大鼠气道注入的1型腺相关病毒载体均沿肺血管分布。荧光定量PCR实验显示,基因敲减(AAV1-KLF4-shRNA)组大鼠肺小动脉中KLF4的mRNA表达量明显低于其他两组。血流动力学检测结果显示,盐水模型组及对照病毒载体组的右心室收缩压和平均右心室压均明显高于健康对照组,而接受肺血管KLF4基因敲减的大鼠的右心室收缩压和平均右心室压均明显低于盐水模型组及对照病毒载体组。HE染色及右心肥厚指数结果显示,盐水模型组及对照病毒载体组的肺小血管重构及心室重构程度明显高于健康对照组,而接受肺血管KLF4基因敲减的大鼠的肺小血管重构及心室重构程度明显低于盐水模型组及对照病毒载体组。结论肺血管特异性KLF4基因敲减模型构建成功并成功地在肺动脉高压中发挥作用,为进一步深入研究肺动脉高压的发病机制提供了平台和实验基础。

关键词：肺动脉高压基因敲减 1型腺相关病毒 KLF4

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中国现代医学杂志 2023年第17期33卷 30-36页

作者：罗志梅刘虹延孙得胜遵义医科大学附属医院呼吸与危重症医学科贵州遵义563003 遵义医科大学附属医院中医科贵州遵义563003

目的构建靶向敲减KLF4基因的重组腺相关病毒载体,并应用于肺血管疾病,为后期研究肺血管KLF4基因敲减在肺动脉高压大鼠中的作用及相关分子机制奠定基础。方法根据大鼠KLF4基因序列,设计针对大鼠特异性的siRNA序列,以pHBAAV-U6-MCS-CMV-E... 详细信息

目的构建靶向敲减KLF4基因的重组腺相关病毒载体,并应用于肺血管疾病,为后期研究肺血管KLF4基因敲减在肺动脉高压大鼠中的作用及相关分子机制奠定基础。方法根据大鼠KLF4基因序列,设计针对大鼠特异性的siRNA序列,以pHBAAV-U6-MCS-CMV-EGFP作为空白载体,通过酶切技术构建带有GFP荧光标记的KLF4干扰腺病毒载体pHBAAV-r-KLF4shRNA-GFP,行测序分析,并进行病毒扩增、纯化及滴度测定。本研究对长时间(3个月)接触香烟烟雾的大鼠进行气道注入AAV1-KLF4-shRNA的干预治疗,观察大鼠右心室收缩压、平均右心室压等血流动力学指标改变。结果经测序检测显示,大鼠AAV1-KLF4-shRNA腺相关病毒载体构建成功。健康对照组、生理盐水模型组、对照病毒模型组、治疗干预组的右心室收缩压和平均右心室压比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论对长时间接触香烟烟雾的肺动脉高压模型大鼠应用AAV1-KLF4-shRNA腺相关病毒载体,能有效改善右心室收缩压和平均右心室压,该载体在相关疾病动物模型中应用有效,为后期顺利开展AAV1-KLF4-shRNA在肺动脉高压中的预防和治疗作用,以及相关分子机制的深入研究提供基础条件。

关键词：肺动脉高压 KLF4 腺相关病毒载体基因敲减

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锌指样转录因子4在肺动脉高压中的研究进展

中国现代医学杂志 2023年第23期33卷 74-77页

作者：王小静孙得胜欧阳瑶遵义医科大学附属医院呼吸与危重症医学科贵州遵义563000

锌指样转录因子4(KLF4)是一种结构上保守的含锌指转录因子,可调控细胞生长、增殖及分化。KLF4是一种炎症反应调节因子,在血管重塑中发挥重要作用。KLF4通过调控平滑肌细胞表型转换、内皮功能障碍、炎症浸润等参与肺血管重塑。KLF4在血... 详细信息

锌指样转录因子4(KLF4)是一种结构上保守的含锌指转录因子,可调控细胞生长、增殖及分化。KLF4是一种炎症反应调节因子,在血管重塑中发挥重要作用。KLF4通过调控平滑肌细胞表型转换、内皮功能障碍、炎症浸润等参与肺血管重塑。KLF4在血管重塑中的具体机制目前尚不明确,该文就KLF4在血管重塑中的作用展开综述。

关键词：锌指样转录因子4 肺动脉高压血管重塑

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审视分期付款买卖中买受人的处分权

社会科学辑刊 2012年第3期 94-99页

作者：孙得胜翟云岭大连海事大学法学院

基于利益平衡的原则,买受人对于合同标的物之处分行为的有效,应当以出卖人主张取回权时买受人之处分行为对于出卖人之利益实现不构成妨碍为前提。在所有权保留之分期付款买卖中,买受人于条件成就前,对于标的物所有权之处分,第三人得否... 详细信息

基于利益平衡的原则,买受人对于合同标的物之处分行为的有效,应当以出卖人主张取回权时买受人之处分行为对于出卖人之利益实现不构成妨碍为前提。在所有权保留之分期付款买卖中,买受人于条件成就前,对于标的物所有权之处分,第三人得否因此而取得标的物之所有权,则应依保留所有权买卖是否登记而分别认定。期待权受让人获得标的物之所有权得源自附条件所有权保留买卖合同中当事人所约定条件之成就。

关键词：处分行为附条件登记期待权

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论所有权保留

法学家 2010年第1期 136-144页

作者：翟云岭孙得胜大连海事大学法学院

所有权保留制度系解决分期付款买卖双方当事人之间权益分配的最佳模式,但《合同法》第134条对所有权保留的规定值得检讨。学者对于所有权保留法律性质的见解颇多,笔者认同所有权保留系担保性所有权的观点,并指出所有权保留应以明示方式... 详细信息

所有权保留制度系解决分期付款买卖双方当事人之间权益分配的最佳模式,但《合同法》第134条对所有权保留的规定值得检讨。学者对于所有权保留法律性质的见解颇多,笔者认同所有权保留系担保性所有权的观点,并指出所有权保留应以明示方式设定,其适用范围不限于动产。所有权保留约款应与买卖合同同时达成或至迟于标的物交付前完成。

关键词：所有权保留分期付款买卖所有权保留的设定

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树突状细胞在慢性阻塞性肺疾病发病中的作用

中国全科医学 2016年第5期19卷 517-520页

作者：孙得胜欧阳瑶遵义医学院附属医院呼吸一科贵州省遵义市563003 华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸与危重症医学科

树突状细胞(DC)是目前已知的功能最强的抗原提呈细胞,被认为是启动机体特异性免疫应答并对其加以调控和维持的中心环节,在肿瘤免疫、免疫排斥和抗感染免疫等方面发挥着极为重要的作用。近年来越来越多的研究显示慢性阻塞性肺疾病有可能... 详细信息

树突状细胞(DC)是目前已知的功能最强的抗原提呈细胞,被认为是启动机体特异性免疫应答并对其加以调控和维持的中心环节,在肿瘤免疫、免疫排斥和抗感染免疫等方面发挥着极为重要的作用。近年来越来越多的研究显示慢性阻塞性肺疾病有可能也是一种"自身免疫性疾病",DC存在于慢性阻塞性肺疾病的病灶中,其数量和功能均发生了改变,相关的趋化因子及趋化因子受体也发生了变化,提示DC与慢性阻塞性肺疾病的发病机制有关。

关键词：树突状细胞肺疾病,慢性阻塞性抗原呈递细胞

阻断CCL20可以减轻树突状细胞对COPD的影响

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阻断CCL20可以减轻树突状细胞对COPD的影响

作者：孙得胜遵义医学院

学位级别：硕士

目的：研究树突状细胞(DC)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型肺部的分布状况以及树突状细胞的趋化因子受体CCR6、CCR7在大鼠外周血和支气管肺泡灌洗液(BALF)中的含量,探讨DC及其趋化因子在COPD发病中的作用,并观测抗CCL20治疗对这一过... 详细信息

目的：研究树突状细胞(DC)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型肺部的分布状况以及树突状细胞的趋化因子受体CCR6、CCR7在大鼠外周血和支气管肺泡灌洗液(BALF)中的含量,探讨DC及其趋化因子在COPD发病中的作用,并观测抗CCL20治疗对这一过程的影响。方法：选用26只健康Wistar大鼠,随机分为正常对照组(6只)、COPD模型组(10只)、CCL20单抗组(10只),后两组采用两次气道内注入细菌内毒素脂多糖(LPS)和连续被动吸烟4周的方法建立COPD大鼠模型。造模第一天注LPS前予单抗组大鼠腹腔注射CCL20单抗(100μg/只)。第28d处死3组大鼠。取大鼠肺脏组织用石蜡包埋HE染色以观察肺组织病理学改变,免疫组化技术(IHC)检测肺部DC的分布及数量,酶联免疫法(ELISA)检测BALF及外周血中CCR6、CCR7的含量。结果：COPD模型组及CCL20单抗组大鼠一般状况较正常对照组大鼠差,体重显著减轻(P0.05)。三组大鼠外周血中CCR6、CCR7含量均无统计学差异(P>0.05)。BALF中CCR6含量在COPD模型组明显多于正常对照组(P0.05)。结论： 1.树突状细胞及其趋化因子受体CCR6在COPD大鼠肺部明显增多,以CCL20单抗阻断CCL20/CCR6可以减轻这一影响。 2.成熟树突状细胞及趋化因子受体CCR7在COPD大鼠肺部减少。

关键词：慢性阻塞性肺疾病树突状细胞 CCL20 CCR6 CCR7

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中国全科医学 2016年第11期19卷 1301-1304页

作者：孙得胜欧阳瑶顾延会遵义医学院附属医院呼吸一科贵州省遵义市563003 华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸与危重症医学科

目的了解树突细胞(DC)及其趋化因子受体CCR6、CCR7在慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺部的表达变化,并探讨其意义。方法选用20只清洁级健康Wistar大鼠,采用随机数字表法分为健康对照组(10只)和COPD组(10只)。COPD组使用香烟烟雾刺激和气道... 详细信息

目的了解树突细胞(DC)及其趋化因子受体CCR6、CCR7在慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺部的表达变化,并探讨其意义。方法选用20只清洁级健康Wistar大鼠,采用随机数字表法分为健康对照组(10只)和COPD组(10只)。COPD组使用香烟烟雾刺激和气道内注入脂多糖(LPS)的方法制备COPD模型。第29天取大鼠肺组织,制作病理切片,行HE染色观察其病理学改变;采用免疫组织化学技术检测肺部OX_(62)^+DC、CD_(83)^+DC的表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中CCR6和CCR7的表达水平。结果 COPD组大鼠肺组织HE染色符合COPD典型病理表现,OX_(62)和CD_(83)的阳性染色均主要表达于细胞的胞质,呈棕黄色。COPD组OX_(62)^+DC表达水平高于健康对照组,CD_(83)^+DC表达水平低于健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。COPD组BALF中CCR6表达水平高于健康对照组,CCR7表达水平低于健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论DC及其趋化因子受体CCR6在COPD大鼠肺部增多,而成熟DC及其趋化因子受体CCR7在COPD大鼠肺部减少。

关键词：肺疾病,慢性阻塞性树突细胞受体,CCR6 受体,CCR7