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人胃癌微小癌巢体外模型筛选高效抗肿瘤免疫细胞的实验研究

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人胃癌微小癌巢体外模型筛选高效抗肿瘤免疫细胞的实验研究

作者：孙培鸣中国人民解放军军医进修学院

学位级别：硕士

研究背景：体外模型是胃癌研究必不可少的手段,与动物体内实验相比具有便捷、可重复性强等优点。目前,胃癌细胞生物学及抗肿瘤方法的体外研究多基于肿瘤细胞的平面培养模型,但体内肿瘤细胞间及肿瘤组织周围有细胞外基质围绕,并呈三维立... 详细信息

研究背景：体外模型是胃癌研究必不可少的手段,与动物体内实验相比具有便捷、可重复性强等优点。目前,胃癌细胞生物学及抗肿瘤方法的体外研究多基于肿瘤细胞的平面培养模型,但体内肿瘤细胞间及肿瘤组织周围有细胞外基质围绕,并呈三维立体模式生长,故平面培养模型不能全面反应体内肿瘤生长状态。免疫细胞抗肿瘤能力实验中,平面培养模型表现为免疫细胞与肿瘤细胞的直接接触,不符合体内实际情况。故有必要建立能较好模拟体内肿瘤生长状态的体外肿瘤模型,且利用该模型能便捷的选取高效抗肿瘤免疫细胞。研究目的：建立可模拟体内肿瘤三维立体生长模式和所处微环境的体外模型,并评价该模型在比较不同免疫细胞抗肿瘤能力中的应用。方法：1)以胶原为支架材料,人胃低分化腺癌BGC-823细胞为种子细胞,构建胶原包埋人胃癌微小癌巢体外模型(癌巢模型);倒置显微镜观察模型中肿瘤细胞的生长状态;MTT法测定生长曲线;HE染色组织学观察,并与平面培养模型、胶原铺板培养模型比较差异。2)不同肿瘤培养模型构建24h后,加入CIK细胞。倒置显微镜观察CIK细胞的抗肿瘤作用;PKH26红色荧光标记CIK细胞,Xfext绿色荧光转染BGC-823细胞,荧光显微镜观察CIK细胞的抗肿瘤作用;LDH(乳酸脱氢酶)释放法检测细胞毒作用;HE染色切片进行组织学观察。3)构建癌巢模型24h后,分别加入CIK细胞、CTL细胞、CIK-CEA/CD3-bscAb细胞、PMNs细胞。分别采用倒置显微镜、LDH释放法及HE染色切片比较不同免疫细胞抗肿瘤能力的差异。结果：1)构建的癌巢模型中肿瘤细胞呈立体生长,彼此聚集成球状,形成多个微小癌巢;细胞增殖实验示癌巢中的肿瘤细胞能较长时间维持细胞活性;组织切片证实胶原基质中有较多微小癌巢形成。2)不同培养模型中CIK细胞抗肿瘤作用表现不同。平面培养和胶原铺板培养肿瘤模型中,加入CIK细胞可见其与肿瘤细胞直接接触,第6h即可聚集杀伤肿瘤细胞。而癌巢模型中,CIK细胞杀伤肿瘤细胞分为迁徙和杀伤两个阶段：第12h迁徙入胶原基质,然后杀伤肿瘤细胞;荧光显微镜观察,平面培养和胶原铺板培养肿瘤模型中第12h形成明显花环样结构。癌巢模型中CIK细胞第12h迁徙入胶原基质,然后环绕癌巢杀伤肿瘤细胞;细胞毒实验分别在不同时间点检测,平面培养和胶原铺板培养肿瘤模型中CIK细胞实验初期即可获得较高的杀伤率。癌巢模型中CIK细胞的杀伤率初期较低,随时间推移逐渐上升,其中第12h、24h显著低于其他培养模型(P<0.05),其余时间点无统计学差异;HE染色切片证实CIK细胞迁徙进入癌巢模型胶原基质中,然后杀伤吞噬微小癌巢。3)癌巢模型不同免疫细胞抗肿瘤能力比较实验中,CIK细胞、CTL细胞、CIK-CEA/CD3-bscAb细胞均可大量迁徙入癌巢模型的胶原基质杀伤肿瘤细胞,PMNs细胞迁徙入基质较少;细胞毒实验中,CTL细胞在第12h、24h及36h表现出比其他免疫细胞更高的杀伤率,其中第24h差异有统计学意义(P<0.05);HE染色证实四种不同免疫细胞均可迁徙入胶原基质中,杀伤吞噬微小癌巢。结论：1)癌巢模型能较好地模拟体内肿瘤生长状态及所处微环境。2)癌巢模型能够较好体现体内免疫细胞与肿瘤细胞的相互作用,可用于免疫细胞抗肿瘤能力研究。3)利用癌巢模型可比较不同免疫细胞的抗肿瘤能力,筛选高效抗肿瘤免疫细胞。

关键词：微小癌巢胶原包埋肿瘤模型免疫细胞胃癌

神舟十四号载人飞船搜救回收医疗保障任务特点及应对策略

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中华急诊医学杂志 2023年第7期32卷 903-907页

作者：孙培鸣王涛毛帅高晓佩刘晓明高俊峰杨建武杨鹤鸣李科战略支援部队特色医学中心北京100101

目的总结分析神舟十四号载人飞船搜救回收医疗保障任务特点和应对策略。方法分析神舟十四号载人飞船搜救回收医疗保障任务特点,探讨应对策略和总结经验。结果(1)神舟十四号载人飞船搜救回收医疗保障任务特点:长期在轨驻留时间和高强度... 详细信息

目的总结分析神舟十四号载人飞船搜救回收医疗保障任务特点和应对策略。方法分析神舟十四号载人飞船搜救回收医疗保障任务特点,探讨应对策略和总结经验。结果(1)神舟十四号载人飞船搜救回收医疗保障任务特点:长期在轨驻留时间和高强度航天任务;短时间高密度航天医疗保障任务;严寒夜间的特殊环境因素;复杂的着陆场地形;年轻化的医疗保障队伍。(2)神舟十四号载人飞船搜救回收医疗保障任务主要应对策略:加强组织领导,改进培养模型;巩固救治预案学习,强化救治技能培训;优化携行装备,增加保温照明措施;改进救治流程,完善应急预案;强调任务与科研并重;加强体能与耐寒锻炼。结论通过总结神舟十四号载人飞船搜救回收医疗保障任务特点和应对策略,为我国航天任务医疗保障积累了宝贵经验并为载人航天事业提供支持。

关键词：空间站载人飞行着陆场医疗保障神舟十四号

神舟十三号飞船医疗保障任务中特殊环境对外周静脉的影响与应对策略

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中华急诊医学杂志 2022年第7期31卷 876-881页

作者：高明杰赵敏孙培鸣杨建武李连勇程玉霞杨鹤鸣中国人民解放军战略支援部队特色医学中心北京100101

目的研究神舟十三号飞船发射段医疗保障任务环境特点,评估特殊环境对外周静脉的影响并探讨应对策略。方法结合神舟十三号飞船发射段航天医疗救护实践,分析实战训练环境特点,评估特殊环境对外周血管充盈度、血管弹性及血管可视性的影响... 详细信息

目的研究神舟十三号飞船发射段医疗保障任务环境特点,评估特殊环境对外周静脉的影响并探讨应对策略。方法结合神舟十三号飞船发射段航天医疗救护实践,分析实战训练环境特点,评估特殊环境对外周血管充盈度、血管弹性及血管可视性的影响。选取航天特殊环境寒冷、微光两个主要因素,查阅文献,探讨外周静脉穿刺、中心静脉置管和骨髓腔穿刺三种输液通路建立的可行性和优缺点。总结航天医疗保障任务经验,为后续任务培训提供应对策略。结果神舟十三号飞船发射段医疗保障任务具有寒冷、微光、风沙及地形复杂等环境特点。特殊环境下外周静脉血管充盈度、血管弹性及血管可视性具有不同程度的下降,其中血管可视性受影响最大。文献分析提示骨髓腔穿刺为寒冷微光环境下适宜的输液通路建立方法。结论航天发射任务特殊环境对外周静脉有较大影响,后续航天医疗任务培训中应巩固基本操作技能培养,强化特殊环境下救治能力培训,配备先进的临床辅助设备,确保完成载人航天医疗保障任务。

关键词：外周静脉特殊环境医疗保障神舟十三号

情景模拟结合模块化实训在载人航天医疗救援护理人员培训中的应用

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中华急诊医学杂志 2023年第5期32卷 632-636页

作者：高晓佩孙培鸣李静丁丽萍李连勇高俊峰刘晓明毛帅程玉霞战略支援部队特色医学中心北京100101

目的研究情景模拟结合模块化实训在载人航天医疗救援护理人员教学培训中的应用。方法选取战略支援部队特色医学中心载人航天医疗救援队中的20名护理人员作为研究对象,随机分为情景模拟结合模块化实训组(实训组,n=10)和传统教学组(对照组... 详细信息

目的研究情景模拟结合模块化实训在载人航天医疗救援护理人员教学培训中的应用。方法选取战略支援部队特色医学中心载人航天医疗救援队中的20名护理人员作为研究对象,随机分为情景模拟结合模块化实训组(实训组,n=10)和传统教学组(对照组,n=10)。分别采用情景模拟结合模块化实训和传统教学方法对护理人员进行培训,培训后组织理论考核、操作考核和满意度调查。结果情景模拟结合模块化实训组在理论考核、操作考核和参训护理人员满意度调查中均显著优于传统教学组(均P<0.05)。结论情景模拟结合模块化实训教学效果显著,能够整体提升护理人员的救治能力素养,有助于高效完成载人航天医疗救援任务。

关键词：情景模拟模块化实训载人航天护理教学

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门静脉海绵样变性的临床诊疗进展

世界华人消化杂志 2021年第12期29卷 662-669页

作者：李昊孙培鸣孙宏伟崔彦战略支援部队特色医学中心普通外科北京市100101

门静脉海绵样变性(cavernous transformation of portal vein,CTPV)是指门静脉主干或其分支受阻后,机体为维持肝脏血流灌注,在肝门区代偿性形成的大量海绵样侧支血管丛.该病较罕见,临床实践中缺乏对其病因及诊疗原则的认识.对于出现门... 详细信息

门静脉海绵样变性(cavernous transformation of portal vein,CTPV)是指门静脉主干或其分支受阻后,机体为维持肝脏血流灌注,在肝门区代偿性形成的大量海绵样侧支血管丛.该病较罕见,临床实践中缺乏对其病因及诊疗原则的认识.对于出现门静脉高压相关症状的患者需要采取积极治疗措施.治疗的主要目的是防治门静脉高压引起的上消化道出血和脾功能亢进,以及恢复肝脏门静脉血流灌注.需要在充分了解患者病情及每种治疗方式最佳适应症的基础上,采用个体化综合治疗策略.本文就CTPV的病因、诊断、分型、治疗方面的最新进展作一综述.

关键词：门静脉海绵样变性病因诊断治疗

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原发性腹膜后平滑肌肉瘤局部复发和预后分析

中华外科杂志 2014年第2期52卷 105-108页

作者：陈贵兵晏阳肖春红孙培鸣薛虎臣李荣解放军总医院普通外科陈贵兵现在南开大学医学院北京100853

【摘要】目的分析原发性腹膜后平滑肌肉瘤患者的临床病理资料，探讨影响其术后局部复发和患者预后的因素。方法收集2006年8月至2012年4月收治的46例原发性腹膜后平滑肌肉瘤完整切除术后患者的临床病理和随访资料，男性9例，女性37例，年... 详细信息

【摘要】目的分析原发性腹膜后平滑肌肉瘤患者的临床病理资料，探讨影响其术后局部复发和患者预后的因素。方法收集2006年8月至2012年4月收治的46例原发性腹膜后平滑肌肉瘤完整切除术后患者的临床病理和随访资料，男性9例，女性37例，年龄30-79岁（中位年龄49岁）。采用Kaplan-Meier法分析肿瘤局部控制率和疾病特异生存率，单因素和多因素分析采用Cox回归法。结果46例患者肿瘤最大径5～36cm，其中〉10em者29例（63．1％）。完整切除术后3、5年局部控制率分别为47％和30％。多因素分析结果表明，法国联邦国家癌症中心（FNCLCC）分级（RR=3．10，95％CI：1．59～6．04）、性别（RR=5．30，95％CI：1．64～17．13）和失血量（RR=3．12，95％口：1．28～7．60）是影响局部复发的独立危险因素（P〈0．05）。完整切除术后5年无病生存率为26％，5年疾病特异生存率为48％。多因素分析表明FNCLCC分级是影响疾病特异生存的独立危险因素（RR=2．01，95％CI：1．16-3．49，P=0．013）。结论性别、FNCLCC分级和失血量是影响原发性腹膜后平滑肌肉瘤局部复发的独立危险因素：FNCLCC分级可预测疾病特异生存情况。

关键词：平滑肌肉瘤腹膜后肿瘤预后因素分析统计学

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提高对胆石性肠梗阻的认识

世界华人消化杂志 2020年第20期28卷 1004-1008页

作者：孙宏伟闫洪锋孙培鸣崔彦战略支援部队特色医学中心普通外科北京市100101

胆石性肠梗阻是一种少见的肠梗阻,也是胆石病的一种严重并发症.该症的发病率上升与结石病发病率不断攀升、社会老龄化以及诊断技术水平提高等因素有关.该病缺乏典型的临床表现,多数情况下病情复杂,容易延误诊疗.本文复习相关文献,重点... 详细信息

胆石性肠梗阻是一种少见的肠梗阻,也是胆石病的一种严重并发症.该症的发病率上升与结石病发病率不断攀升、社会老龄化以及诊断技术水平提高等因素有关.该病缺乏典型的临床表现,多数情况下病情复杂,容易延误诊疗.本文复习相关文献,重点阐述了胆石性肠梗阻的发病机制、延误因素和临床诊治策略,强调在临床上应充分认识胆石性肠梗阻的特殊性和复杂性,并在遵从基本原则的基础上进行合理化个案化诊疗,以改善胆石性肠梗阻的预后.

关键词：肠梗阻胆石性肠梗阻诊断治疗

工程化人胃癌裸鼠原位模型的建立及其活体荧光成像观察

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南方医科大学学报 2012年第12期32卷 1718-1721页

作者：孙培鸣金润森杜晓辉徐迎新孙慧伟李荣解放军总医院普通外科研究所北京100853

目的建立工程化人胃癌裸鼠原位模型,并利用活体荧光成像技术进行观察。方法以胶原为支架材料,表达绿色荧光的人胃癌BGC823-EGFP细胞为种子细胞,建立人胃癌体外模型;倒置显微镜观察肿瘤细胞生长状态;通过注射将体外模型移植到裸鼠体内;... 详细信息

目的建立工程化人胃癌裸鼠原位模型,并利用活体荧光成像技术进行观察。方法以胶原为支架材料,表达绿色荧光的人胃癌BGC823-EGFP细胞为种子细胞,建立人胃癌体外模型;倒置显微镜观察肿瘤细胞生长状态;通过注射将体外模型移植到裸鼠体内;活体荧光成像评估胃癌原位模型的建立;解剖观察原位肿瘤的移植成功率,生长及转移情况;冰冻切片及HE染色进行组织学观察。结果工程化人胃癌体外模型中肿瘤细胞呈立体生长;原位肿瘤成瘤率100%,可见腹腔重要脏器转移;组织学特征呈典型低分化腺癌;活体荧光观察可见原位肿瘤形成,但效果不理想。结论建立了工程化人胃癌裸鼠原位模型;绿色荧光成像效果较差,活体荧光成像观察应选用穿透力较强的荧光。

关键词：胃肿瘤组织工程疾病模型原位移植裸鼠绿色荧光蛋白

术前血小板与淋巴细胞比值对结直肠癌预后的影响

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南方医科大学学报 2013年第1期33卷 70-73页

作者：刘海亮杜晓辉孙培鸣肖春红徐迎新李荣解放军总医院普通外科研究所北京100853

目的探讨术前外周血血小板/淋巴细胞比值(PLR)对结直肠癌患者预后的影响。方法回顾性分析解放军总医院普通外科140例行结直肠癌根治术患者的临床资料,根据患者术前外周血血小板/淋巴细胞比值分为低PLR组(PLR<250)和高PLR组(PLR≥250),... 详细信息

目的探讨术前外周血血小板/淋巴细胞比值(PLR)对结直肠癌患者预后的影响。方法回顾性分析解放军总医院普通外科140例行结直肠癌根治术患者的临床资料,根据患者术前外周血血小板/淋巴细胞比值分为低PLR组(PLR<250)和高PLR组(PLR≥250),采用单因素和COX回归模型分析两组患者的PLR及其它临床病理因素与5年生存率的关系。结果低PLR组的5年生存率明显高于高PLR组(71.4%vs 51.5%;P=0.045);单因素分析显示肿瘤位置,肿瘤浸润深度,淋巴结转移,肿瘤分期,PLR对结直肠癌患者5年生存率有影响;多因素分析显示PLR是影响结直肠癌预后的独立危险因素(RR:2.213;95%CI:1.007-4.863;P=0.0048)。结论术前PLR对结直肠癌预后评估有临床价值。

关键词：结直肠肿瘤血小板淋巴细胞比值预后