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抗人T淋巴细胞CD4人-鼠嵌合抗体的真核表达

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中国生物制品学杂志 2009年第10期22卷 945-948,952页

作者：张雪张爱华闭兰赵亚杰孙可芳方志正武汉生物制品研究所免疫学研究室武汉430060

目的在小鼠骨髓瘤细胞SP2/0中表达抗人T淋巴细胞CD4人-鼠嵌合抗体。方法真核表达质粒PAG4622+CD4VL和PAH4604+CD4VH经酶切和序列测定后,采用电穿孔转染技术将二者共转染SP2/0细胞,经组胺醇和霉酚酸联合筛选阳性克隆,通过ELISA、流式细... 详细信息

目的在小鼠骨髓瘤细胞SP2/0中表达抗人T淋巴细胞CD4人-鼠嵌合抗体。方法真核表达质粒PAG4622+CD4VL和PAH4604+CD4VH经酶切和序列测定后,采用电穿孔转染技术将二者共转染SP2/0细胞,经组胺醇和霉酚酸联合筛选阳性克隆,通过ELISA、流式细胞术、RT-PCR和DNA测序的方法进行初步鉴定。结果真核表达质粒经酶切和测序鉴定证明构建正确。获得2株分泌抗人T淋巴细胞CD4人-鼠嵌合抗体的阳性SP2/0细胞克隆0925CASP2/0和1107CASP2/0,嵌合抗体表达量为0.5～2ng/ml。结论已成功地在SP2/0细胞中表达了抗人T淋巴细胞CD4人-鼠嵌合抗体,为该抗体在其他真核细胞中的高效表达及临床应用奠定了基础。

关键词： CD4 嵌合抗体电穿孔 SP2/0细胞真核表达

治疗用鼠抗人单克隆抗体WuTac功能及药效作用

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中国生物制品学杂志 2004年第5期17卷 294-296页

作者：孙可芳王志友贾卫陈善华武汉生物制品研究所武汉430060 第四军医大学免疫教研室西安710032

目的　研究鼠源性抗人白细胞介素 2受体单克隆抗体WuTac的功能和药效作用。方法　采用间接免疫荧光法检测WuTac对白细胞介素 2的阻断作用 ;采用同位素法检测WuTac对活化的T细胞增殖的影响 ,并且通过移植物抗宿主的反应 (GVHR)对WuTac体... 详细信息

目的　研究鼠源性抗人白细胞介素 2受体单克隆抗体WuTac的功能和药效作用。方法　采用间接免疫荧光法检测WuTac对白细胞介素 2的阻断作用 ;采用同位素法检测WuTac对活化的T细胞增殖的影响 ,并且通过移植物抗宿主的反应 (GVHR)对WuTac体内的药效作用进行评价。结果　WuTac可以明显地抑制人白细胞介素 2的作用 ,并且可以明显地抑制移植物抗宿主的反应。结论　WuTac可以作为一种较为理想的免疫抑制剂。

关键词：单克隆抗体白细胞介素2 T细胞药效学受体

注射用鼠抗人T淋巴细胞CD25抗原单克隆抗体在肾移植患者体内的药动学与药效学

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中国临床药理学杂志 2011年第10期27卷 777-780页

作者：葛苗苗方凯黎维勇王振迪张爱华张囡孙可芳华中科技大学同济医学院附属协和医院药剂科武汉430022 武汉生物制品研究所武汉430060

目的研究注射用鼠抗人T淋巴细胞CD25抗原单克隆抗体(WuTac)在肾移植患者体内的药动学和药效学。方法 16名肾移植患者随机分配到低、高(0.2,0.1 ***-1)2个剂量组,用酶联免疫吸附法检测受试者血清中WuTac和人抗鼠抗体(HAMA)的浓度,评估该... 详细信息

目的研究注射用鼠抗人T淋巴细胞CD25抗原单克隆抗体(WuTac)在肾移植患者体内的药动学和药效学。方法 16名肾移植患者随机分配到低、高(0.2,0.1 ***-1)2个剂量组,用酶联免疫吸附法检测受试者血清中WuTac和人抗鼠抗体(HAMA)的浓度,评估该药物的药动学行为特征;通过流式细胞仪,检测全血中T细胞表面CD25结合情况,评判其药效学。结果低、高2个剂量组的主要药动学参数:T1/2分别为(51.41±16.24)(,59.53±24.96)h;AUCss分别为(2.28±0.35)(,5.13±1.53)mg.d.L-1;AUC0-t分别为(8.63±1.87)(,19.16±9.01)mg.d.L-1;AUC0-∞分别为(9.11±2.28)(,21.03±10.88)mg.d.L-1;Cmax分别为(3.27±0.53)(,8.36±1.92)mg.L-1;Tmax分别为(2.50±0.76)(,2.47±1.06)h。2组多次恒速滴注停药后,均能饱和T细胞白介2受体(IL-2R)相应结合位点。结论本品在中国肾移植患者起效迅速,疗效持久。多次给药耐受性良好,WuTac在0.1～0.2 ***-1内基本呈线性药动学特征。

关键词：鼠抗人T淋巴细胞CD25抗原单克隆抗体白介2受体酶联免疫吸附药动学药效学

WuT3无血清培养上清中单克隆抗体纯化工艺的建立

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中国生物制品学杂志 2007年第8期20卷 593-595,599页

作者：詹骞邹昌勇杜厚明冷武军雷继军杨明端义坤孙可芳侯胜桐齐建新王志友董之昌武汉生物制品研究所免疫学研究室武汉430060

目的对WuT3杂交瘤细胞生物反应器无血清培养上清中单克隆抗体进行分离纯化,建立中试分离纯化工艺。方法采用两步离子交换层析法结合硫酸铵盐析法分离纯化WuT3单抗。在通过小量试验优化纯化参数后,进行中量试验和中试放大。结果建立的纯... 详细信息

目的对WuT3杂交瘤细胞生物反应器无血清培养上清中单克隆抗体进行分离纯化,建立中试分离纯化工艺。方法采用两步离子交换层析法结合硫酸铵盐析法分离纯化WuT3单抗。在通过小量试验优化纯化参数后,进行中量试验和中试放大。结果建立的纯化方法可以放大到中试规模,每批投料30000ml培养上清,可收获单抗达1.5g,单抗总回收率大于60%。经分离纯化后,单抗IgG纯度大于95%,采用免疫荧光法检测抗体活性合格。结论建立了一条生物反应器无血清培养杂交瘤细胞大规模分离纯化单抗的工艺路线。

关键词：无血清培养杂交瘤细胞单克隆抗体纯化工艺

治疗用鼠抗人单克隆抗体WuTac功能及药效学的研究

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治疗用鼠抗人单克隆抗体WuTac功能及药效学的研究

抗人CD4嵌合抗体基因真核表达质粒的构建及其瞬时表达

湖北省暨武汉市免疫学会第八届学术会议

作者：孙可芳王志友贾卫陈善华武汉生物制品研究所免疫学研究室第四军医大学免疫教研室

目的:研究鼠源性抗人白细胞介素2受体单克隆抗体WuTac的功能和药效学方法:利用间接免疫荧光法研究WuTac对白细胞介素2的阻断作用;利用同位素法研究WuTac对活化的T细胞的增殖影响,并且通过移植物抗宿主的反应(GVHR)对WuTac的体内药效学...

目的:研究鼠源性抗人白细胞介素2受体单克隆抗体WuTac的功能和药效学方法:利用间接免疫荧光法研究WuTac对白细胞介素2的阻断作用;利用同位素法研究WuTac对活化的T细胞的增殖影响,并且通过移植物抗宿主的反应(GVHR)对WuTac的体内药效学进行初步研究结果:WuTac可以明显地抑制人白细胞介素2的作用,并且可以明显地抑制移植物抗宿主的反应结论:WuTac可以作为一种较为理想的免疫抑制剂,用于预防和治疗骨髓移植中GVHR及器官移植的急性排斥反应。

关键词：

来源： cnki会议评论

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中国生物制品学杂志 2011年第9期24卷 997-1002页

作者：胡迪超张爱华潘勇兵端义坤孙可芳张银川杨晓明武汉生物制品研究所 430060

目的构建抗人CD4嵌合抗体基因真核表达质粒,并在哺乳动物细胞中进行瞬时表达。方法采用RLM-RACE法克隆WuT4抗体可变区和信号肽序列,并采用基因拼接法构建嵌合抗体基因真核表达质粒。采用脂质体法瞬时转染HEK293T、CHO-DHFR-和COS-7 3种... 详细信息

目的构建抗人CD4嵌合抗体基因真核表达质粒,并在哺乳动物细胞中进行瞬时表达。方法采用RLM-RACE法克隆WuT4抗体可变区和信号肽序列,并采用基因拼接法构建嵌合抗体基因真核表达质粒。采用脂质体法瞬时转染HEK293T、CHO-DHFR-和COS-7 3种哺乳动物细胞,ELISA法检测转染细胞上清中嵌合抗体的浓度,流式细胞术、Western blot和Dotblot分析嵌合抗体的抗原结合活性,并对表达的嵌合抗体进行免疫荧光分析。结果成功克隆了WuT4抗体可变区和信号肽序列;抗人CD4嵌合抗体共表达质粒pOptiVEC-T4H和pcDNA3.3-T4L构建正确;表达的嵌合抗体保留了亲本抗体的抗原结合力,并能特异性识别人CD4分子;免疫荧光分析表明,表达的嵌合抗体含人抗体的重、轻链恒定区。结论已成功构建了抗人CD4嵌合抗体基因真核表达质粒,并能在哺乳动物细胞中瞬时表达,为其进一步研究奠定了基础。

关键词：抗原,CD4 RLM-RACE 基因拼接嵌合抗体瞬时表达

单克隆抗体(抗单)的荧光标记及其在竞争抑制试验中的应用

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细胞与分子免疫学杂志 1988年第2期 67-72页

作者：王中德史良如穆海燕孙可芳陈善华卫生部武汉生物制品研究所免疫学研究室

本文报告了一种用于直接免疫荧光试验、改进的单克隆抗体（单抗）荧光标记条件与方法及其在单抗之间的竞争抑制试验中的应用,该法在标记条件上与用于间接免疫荧光的多克隆抗体（第二抗体）的标记有较大不同。最主要的是要求较高的F/P... 详细信息

本文报告了一种用于直接免疫荧光试验、改进的单克隆抗体（单抗）荧光标记条件与方法及其在单抗之间的竞争抑制试验中的应用,该法在标记条件上与用于间接免疫荧光的多克隆抗体（第二抗体）的标记有较大不同。最主要的是要求较高的F/P值。作者按此法标记了六种单克隆抗体Wu T3,Wu T4,Wu T6,WuT8,Wu T10和Wu T（11）。并且将它们与已知的单抗进行了竞争抑制试验。结果表期:Wu T3与OKT3,Wu T4与OKT4,Wu T8与OKT8,Wu T6与H1T6-1,H1T（6-2）以及Wu T11与抗CCT3具有相互抑制结合抗原的再用。证明它们均能相应识别CD3,CD4,CD8,CD1a和CD2靶抗原分子。此法对检定、比较抗细胞性抗原的单抗,具有很大价值。

关键词：单克隆抗体单抗 CD 抑制试验 FITC

人源抗狂犬病毒G蛋白单链抗体的生物学鉴定及其小鼠体内中和活性测定

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中国人兽共患病杂志 2005年第5期21卷 397-399页

作者：闭兰朱蓉张爱华孙可芳赵亚杰王志友余模松武汉生物制品研究所武汉430060

目的对从噬菌体抗体库中筛选的人源抗狂犬病毒单链抗体A12进行生物学活性鉴定及小鼠体内中和活性检测。方法用免疫荧光法检测其结合感染狂犬病毒CVS的鼠脑组织的能力,用小鼠中和实验测定A12表达产物的体内中和活性。结果免疫荧光试验显... 详细信息

目的对从噬菌体抗体库中筛选的人源抗狂犬病毒单链抗体A12进行生物学活性鉴定及小鼠体内中和活性检测。方法用免疫荧光法检测其结合感染狂犬病毒CVS的鼠脑组织的能力,用小鼠中和实验测定A12表达产物的体内中和活性。结果免疫荧光试验显示A12表达产物与感染CVS的鼠脑细胞有强的荧光反应。小鼠中和试验结果表明,A12ScFv样品组小鼠有9只存活,而对照组小鼠全部死亡。A12在729倍稀释时能100%保护小鼠抵抗致死量狂犬病毒的脑内攻击。结论A12对狂犬病毒具有一定的中和活性,有可能被用于暴露后狂犬病的预防。

关键词：单链抗体狂犬病毒G蛋白免疫荧光反应小鼠体内中和实验

定性检测人血清中抗鼠抗体间接ELISA法的建立及临床应用

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定性检测人血清中抗鼠抗体间接ELISA法的建立及临床应用