检索结果-南通市图书馆

WuTac血药浓度双抗体夹心定量ELISA检测方法的建立及其临床应用

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中国生物制品学杂志 2009年第5期22卷 505-507页

作者：张囡李茜郭长福黎维勇孙可芳胡豫张爱华武汉生物制品研究所免疫学研究室武汉430060 华中科技大学同济医学院附属协和医院药剂科武汉430030

目的建立WuTac血药浓度双抗体夹心定量ELISA检测方法,并进行初步临床应用。方法建立双抗体夹心ELISA法,定量检测血清中WuTac浓度,筛选最佳抗体包被浓度和酶标抗体稀释度,绘制标准曲线,并对该方法进行验证;应用该方法对36名健康志愿者单... 详细信息

目的建立WuTac血药浓度双抗体夹心定量ELISA检测方法,并进行初步临床应用。方法建立双抗体夹心ELISA法,定量检测血清中WuTac浓度,筛选最佳抗体包被浓度和酶标抗体稀释度,绘制标准曲线,并对该方法进行验证;应用该方法对36名健康志愿者单次注射不同剂量WuTac(0.05、0.1和0.2mg/kg)前后14个时间点的临床血清标本进行检测。结果最佳抗体包被浓度为0.2μg/ml,最佳酶标抗体稀释度为1∶15000,标准曲线的线性相关系数r≥0.99,线性范围为3.9～125ng/ml。高浓度WuTac标准品的变异系数小于15%;准确性为99.05%±5.00%(92.43%～110.02%);特异性良好。临床血清检测结果表明,WuTac在0.05～0.2mg/kg范围内呈线性药代动力学特征。结论已建立了WuTac血药浓度双抗体夹心定量ELISA检测方法,该方法的灵敏度、精密性和准确性均符合我国生物制品药代动力学研究的要求。

关键词：抗CD25单克隆抗体药代动力学双抗体夹心ELISA

荧光标记CD3/CD4/CD8单克隆抗体的质量控制

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中国生物制品学杂志 2007年第10期20卷 750-753,763页

作者：孙可芳肖建闭兰端义坤赵亚杰张涛张爱华武汉生物制品研究所免疫学研究室武汉430060

目的对荧光素标记的CD3、CD4和CD8单克隆抗体进行质量控制。方法采用多参数的流式细胞分析技术,对单色、多色荧光标记抗体的偶联率及偶联效果进行分析与评价,并进行稳定性试验。结果荧光标记的单克隆抗体特异性保持完好;单色标记的抗体... 详细信息

目的对荧光素标记的CD3、CD4和CD8单克隆抗体进行质量控制。方法采用多参数的流式细胞分析技术,对单色、多色荧光标记抗体的偶联率及偶联效果进行分析与评价,并进行稳定性试验。结果荧光标记的单克隆抗体特异性保持完好;单色标记的抗体荧光强度均比进口对照低一个数量级;FITC-CD3/PE-CD4平均荧光强度与进口对照相差较大,FITC-CD3/PE-CD8和FITC-CD4/PE-CD8平均荧光强度与进口对照相差较小;FITC标记产物的F/P值控制在1～2之间;标记抗体于2～8℃放置18个月,稳定性良好。结论应用FITC、PE标记的CD3、CD4和CD8单克隆抗体可以采用流式细胞仪进行检测。

关键词：流式细胞术荧光素标记单克隆抗体质量控制

人血清中抗鼠抗体间接ELISA检测方法的建立及临床应用

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中国生物制品学杂志 2009年第7期22卷 716-718页

作者：郭长福张囡李茜黎维勇孙可芳胡豫张爱华武汉生物制品研究所免疫学研究室武汉430060 华中科技大学同济医学院附属协和医院武汉430060

目的建立检测人血清中抗鼠抗体(HAMA)的间接ELISA法,并进行临床标本检测。方法采用间接ELISA法,选择最佳实验条件,确定阴阳性血清判定的界值,并进行方法学验证;用该方法检测WuTacⅠ期临床观察的健康志愿者血清抗鼠抗体。结果间接ELISA... 详细信息

目的建立检测人血清中抗鼠抗体(HAMA)的间接ELISA法,并进行临床标本检测。方法采用间接ELISA法,选择最佳实验条件,确定阴阳性血清判定的界值,并进行方法学验证;用该方法检测WuTacⅠ期临床观察的健康志愿者血清抗鼠抗体。结果间接ELISA的最佳试验条件为:抗原包被浓度0.313μg/ml,血清稀释度1∶160,酶标抗体稀释度1∶80 000;阴阳性血清界值为0.210;该方法检测HAMA阳性标本的试验内和试验间变异系数分别为7.46%和5.48%,检测HAMA阴性标本的试验内和试验间变异系数分别为8.03%和14.7%;与马、山羊、兔、猴等动物血清无交叉反应;健康志愿者HAMA约在用药后10～14 d产生。结论已成功建立了检测人血清中抗鼠抗体的间接ELISA法,符合我国生物药品临床试验检测的要求。

关键词：人抗鼠抗体 WuTac 间接ELISA

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人T淋巴细胞CD3ε链的原核表达及纯化

中国生物制品学杂志 2009年第7期22卷 647-650页

作者：金玉玲张爱华闭兰赵亚杰彭祥兵孙可芳武汉生物制品研究所免疫学研究室武汉430060

目的原核表达并纯化人T淋巴细胞CD3ε(hCD3ε)链。方法以健康成人外周血单个核细胞总RNA为模板,采用RT-PCR法扩增人CD3ε链基因,并克隆入pCR-II载体,酶切鉴定及测序分析后,再定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-3中,构建重组表达质粒pGEX-4T... 详细信息

目的原核表达并纯化人T淋巴细胞CD3ε(hCD3ε)链。方法以健康成人外周血单个核细胞总RNA为模板,采用RT-PCR法扩增人CD3ε链基因,并克隆入pCR-II载体,酶切鉴定及测序分析后,再定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-3中,构建重组表达质粒pGEX-4T-3-hCD3ε,转化*** BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经GST亲和层析纯化后,进行Western blot鉴定。结果酶切分析及DNA测序证实,hCD3ε链基因被正确克隆入pGEX-4T-3载体,并能在原核系统中稳定表达。表达产物的相对分子质量为49 500,0.2 mmol/L IPTG 25℃诱导表达4.5 h,目的蛋白的表达量最高,占菌体总蛋白的29.3%,其中可溶性表达占12.8%。纯化的融合蛋白纯度可达86.1%,可分别被兔抗人CD3ε多抗和羊抗GST多抗识别。结论已成功地原核表达并纯化了GST-hCD3ε融合蛋白。

关键词：人T淋巴细胞 CD3ε链原核表达纯化

WuTac与CD25抗原结合的饱和度及其对健康人外周血淋巴细胞亚群的影响

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中国生物制品学杂志 2009年第9期22卷 901-903页

作者：孙可芳杜雯张囡郭长福黎维勇赵亚杰胡豫张爱华武汉生物制品研究所免疫学研究室武汉430060 华中科技大学同济医学院附属协和医院药剂科武汉430060

目的动态监测鼠抗人T淋巴细胞CD25抗原单克隆抗体(WuTac)在健康人中与CD25抗原结合的饱和度及其对外周血淋巴细胞亚群的影响,评价WuTac临床应用的安全性,并预测其有效性。方法静脉恒速滴注WuTac0.05、0.1、0.2mg/kg,在用药前和停药后的1... 详细信息

目的动态监测鼠抗人T淋巴细胞CD25抗原单克隆抗体(WuTac)在健康人中与CD25抗原结合的饱和度及其对外周血淋巴细胞亚群的影响,评价WuTac临床应用的安全性,并预测其有效性。方法静脉恒速滴注WuTac0.05、0.1、0.2mg/kg,在用药前和停药后的1、24和72h经肘静脉采血,通过流式细胞术动态监测T淋巴细胞亚群及与CD25抗原结合的饱和度。结果不同剂量组的T淋巴细胞亚群用药前后差异均无统计学意义;停药后1h开始,CD25+淋巴细胞的比例明显降低,且一直持续至停药后72h,CD25+淋巴细胞的比例均明显低于用药前。不同剂量组的CD25抗原的饱和度均达96%以上。结论WuTac单抗用药后,对健康人T淋巴细胞亚群均无影响,能迅速与CD25高效结合,持续时间72h以上,为其Ⅱ、Ⅲ期临床研究奠定了基础。

关键词： T淋巴细胞亚群 CD25抗原单克隆抗体 IL-2受体饱和度流式细胞术

鼠抗CD71单抗轻链及重链可变区基因的克隆和序列分析

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第一军医大学学报 2002年第5期22卷 409-411页

作者：王志友沈弢张爱华闭兰金玉铃孙可芳余模松史良如武汉生物制品研究所免疫学研究室湖北武汉430060

目的获得鼠抗人CD71分子单抗的轻链及重链可变区基因。方法用一步法提取总RNA,逆转录形成cDNA,设计并合成一套扩增小鼠重、轻链可变区的通用引物,通过PCR扩增基因．分别克隆人pMD18－T载体中,作核苷酸序列分析。结果用重链引物扩增获... 详细信息

目的获得鼠抗人CD71分子单抗的轻链及重链可变区基因。方法用一步法提取总RNA,逆转录形成cDNA,设计并合成一套扩增小鼠重、轻链可变区的通用引物,通过PCR扩增基因．分别克隆人pMD18－T载体中,作核苷酸序列分析。结果用重链引物扩增获得长约350bp的片段,用轻链引物扩增获得长约330bp的片段,序列测定获得它们的DNA序列。结论克隆的重链可变区基因长度为348bp,属于小鼠H链可变区IA亚组;克隆的轻链可变区基因长度为336bp,属于小鼠K轻链可变区Ⅱ亚组。

关键词： CD71 抗体可变区基因单克隆抗体序列分析动物实验

HIV跨膜蛋白gp36和gp41的截短及融合表达

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中国生物制品学杂志 2006年第2期19卷 124-126,138页

作者：肖健朱华松尹娟孙可芳汪超英端义坤余模松武汉生物制品研究所武汉430060

目的将HIV-1的跨膜蛋白gp41和HIV-2跨膜蛋白gp36进行截短,并在大肠杆菌中进行融合表达。方法用PCR将gp41和gp36的编码基因进行截短,回收的PCR产物纯化后克隆到连接载体pGEM-T上,然后用BamHⅠ、EcoRⅠ和SalⅠ切下目的基因,并构建到表达载... 详细信息

目的将HIV-1的跨膜蛋白gp41和HIV-2跨膜蛋白gp36进行截短,并在大肠杆菌中进行融合表达。方法用PCR将gp41和gp36的编码基因进行截短,回收的PCR产物纯化后克隆到连接载体pGEM-T上,然后用BamHⅠ、EcoRⅠ和SalⅠ切下目的基因,并构建到表达载体pGEX-4T-3,导入宿主细胞BL21,用IPTG诱导表达。结果酶切鉴定显示,截短的HIV-1gp41和HIV-2gp36跨膜蛋白基因大小与预期的一致,表达产物经SDS-PAGE分析显示在相对分子质量66000处出现融合表达条带,Westernblot分析显示,与相应抗体出现特异性反应。结论已成功对gp41和gp36跨膜蛋白进行截短,并构建表达载体进行表达,为跨膜蛋白的进一步应用研究奠定基础。

关键词：人类免疫缺陷病毒跨膜蛋白截短融合表达