检索结果-南通市图书馆

作者：孙力超郑州大学

学位级别：硕士

背景和目的星形细胞瘤是脑胶质瘤中最常见的类型,占原发性中枢神经系统肿瘤的60%,每年新发病人数约为5～10人/10万。星形细胞瘤的生长方式呈侵袭性,常侵犯周围脑组织。星形细胞瘤的治疗以开颅手术切除肿瘤为主,辅助以放射治疗和化学治... 详细信息

背景和目的星形细胞瘤是脑胶质瘤中最常见的类型,占原发性中枢神经系统肿瘤的60%,每年新发病人数约为5～10人/10万。星形细胞瘤的生长方式呈侵袭性,常侵犯周围脑组织。星形细胞瘤的治疗以开颅手术切除肿瘤为主,辅助以放射治疗和化学治疗。但切除术后易复发,所以研究星形细胞瘤的侵袭性并防止术后复发便成为肿瘤治疗的重要方面。原代培养,是从供体取得离体细胞后,在体外进行的首次培养。原代培养的细胞,因组织和细胞刚刚离体,生物学性状未发生明显变化,仍具有二倍体遗传的特征,最接近体内细胞的生物学特性。本实验取人脑星形细胞瘤手术组织,经剪切、消化后,培养、传代并鉴定,同时观察细胞的生长活性,建立一种简便、易行、廉价、高效的星形细胞瘤原代细胞的培养方法,为研究星形细胞瘤的发生、发展、生物学行为及治疗提供理论基础。侵袭性是星形细胞瘤的特点之一,也是临床常规治疗难以治愈的关键所在。Boyden chamber小室侵袭实验是一种肿瘤细胞侵袭能力的体外测定方法,即在聚碳酸酯微孔滤膜上加入一定量的细胞,在有/无基底胶存在的两种情况下,分别记录细胞的穿膜个数,以观察不同级别的星形细胞瘤原代培养细胞的趋化和侵袭能力。本实验旨在研究人脑星形细胞瘤原代培养技术,通过对不同级别星形细胞瘤的培养,建立星形细胞瘤体外短期培养的方法;同时观察培养细胞生长特性和侵袭性与肿瘤级别的关系,并为星形细胞瘤的治疗及肿瘤的预后判断提供有力的实验依据。材料和方法 1.取新鲜手术标本并做常规病理检查本实验取星形细胞瘤手术后的新鲜离体标本,一部分送常规病理检查,剩余大小约1cm×1cm×1cm的组织无菌包裹,送入无菌培养间培养。对用常规病理检查(HE及免疫组化)证明为星形细胞瘤的标本继续培养。 2.星形细胞瘤标本的处理应用机械分散法分离细胞。用剪刀将瘤组织剪成碎块,并将组织碎块放在注射器内反复推压后取出,胰蛋白酶消化后制成细胞悬液。镜检细胞计数、接种培养。 3.星形细胞瘤原代培养用上述分离方法得到的细胞,细胞悬液计数1×10/ml后,在PRMI1640培养基(加10%胎牛血清)、37℃、5%CO条件下、培养板中培养,每隔3～4d换培养液1次;细胞长满底部70%～80%后,用0.25%胰蛋白酶消化,细胞计数,传代。继续培养,对细胞进行形态学观察、免疫细胞化学鉴定和Boyden chamber侵袭小室实验。 4.细胞形态学观察用倒置相差显微镜观察活细胞的形态学和生长状态的变化,观察不同级别的星形细胞瘤形态学和生长状态的不同。 5.免疫细胞化学鉴定采用SP法,检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、Ⅳ型胶原(CollagenⅣ)和巢蛋白(nestin)在原代培养细胞中的表达。 *** chamber实验 Boyden小室测定原代培养的Ⅲ级、Ⅳ级星形细胞瘤细胞,在相同的培养时间和培养条件下的趋化性和侵袭能力,观察两种级别的肿瘤细胞趋化性和侵袭力的差别。 7.统计学处理以上结果用SPSS10.0软件进行统计处理,数据结果采用(?)±S表示,两个样本比较用t检验,以a=0.05为显著性水平。结果 1.常规病理检查诊断为星形细胞瘤的手术标本22例,其中Ⅰ级(毛细胞性星形细胞瘤、室管膜下巨细胞星形细胞瘤)3例,Ⅱ级(弥漫性星形细胞瘤,包括纤维性星形细胞瘤、原浆性星形细胞瘤、肥胖细胞性星形细胞瘤)4例,Ⅲ级(间变性星形细胞瘤)7例,Ⅳ级(胶质母细胞瘤)8例;其免疫组化结果显示:胶质纤维酸性蛋白(GFAP)呈阳性。 2.原代培养:应用物理和化学方法,成功地培养出星形细胞瘤原代细胞。肿瘤级别不同,细胞的生长活性不同,其中Ⅰ级星形细胞瘤接种后死亡,Ⅱ级星形细胞瘤接种后成活但不能传代。Ⅲ级、Ⅳ级星形细胞瘤可以成活并可稳定传代4～6代(约28d)。 2.形态学观察:倒置显微镜下,发现细胞形态多样,大小不一;细胞呈星形、三角形、菱形或梭形。肿瘤级别越高,细胞贴壁时间越短,生长越旺盛,并呈交错性生长(细胞失去极性)。 4.免疫细胞化学检查:免疫细胞化学染色法检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、Ⅳ型胶原(CollagenⅣ)、巢蛋白(nestin)在原代培养细胞中的表达。结果显示:原代培养的细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)呈阳性、Ⅳ型胶原(CollagenⅣ)呈阴性,巢蛋白(nestin)阳性(Ⅳ级星形细胞瘤)。为此,结合细胞的形态、生长方式及免疫细胞化学结果,证明所培养的细胞为星形细胞瘤细胞。 ***小室体外趋化和侵袭实验结果:原代培养的Ⅲ级、Ⅳ级星形细胞瘤细胞具有趋化性和侵袭性的特点;在趋化和侵袭实验中,在相同的培养时间和培养条件下,与Ⅲ级星形细胞瘤细胞相比,Ⅳ级星形细胞瘤细胞不同时间的穿膜细胞数均高于Ⅲ级星形细胞瘤细胞,其差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 1.采用物理、化学两

关键词：星形细胞瘤原代培养免疫细胞化学趋化性侵袭性

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促血管生成素（Ang）——一种新的脓毒症血清标志物

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中华急诊医学杂志 2015年第2期24卷 128-132页

作者：孙力超张国强卫计委中日友好医院急诊科北京100029

脓毒症（sepsis）是指由感染引起的全身炎症反应综合征,病情凶险,病死率高.目前,脓毒症的全球病死率高达30％～70％,脓毒症的高发病率与病死率逐渐成为威胁人民健康的全球性问题之一.最新美国国家卫生研究院资料显示,在美国ICU每年大约... 详细信息

脓毒症（sepsis）是指由感染引起的全身炎症反应综合征,病情凶险,病死率高.目前,脓毒症的全球病死率高达30％～70％,脓毒症的高发病率与病死率逐渐成为威胁人民健康的全球性问题之一.最新美国国家卫生研究院资料显示,在美国ICU每年大约有70万至90万脓毒症患者入院,其中大约有20万患者死于脓毒症.目前脓毒症确切的发病机制尚未完全阐明,有大量的研究表明,细菌内毒素、失控的炎症反应、凝血功能紊乱、免疫功能紊乱、细胞凋亡、血管内皮细胞功能障碍、高代谢状态、基因多态性等因素与其发病机制均密切相关.

关键词：脓毒症患者促血管生成素血清标志物全身炎症反应综合征美国国家卫生研究院血管内皮细胞功能障碍凝血功能紊乱免疫功能紊乱

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脓毒症小鼠肝细胞自噬与LC3及P62表达的实验研究

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中华急诊医学杂志 2019年第4期28卷 467-472页

作者：沈美佳孙力超张国强中日友好医院急诊科北京100029

目的探究盲肠结扎穿孔法(cecal ligation and puncture,CLP)建立的脓毒症小鼠模型肝细胞自噬的发生情况及不同时间点自噬相关蛋白的表达规律。方法50只6~8周龄清洁级雄性ICR小鼠按照随机数字表法随机分为5组:CLP 3 h组,CLP 6 h组,CLP 1... 详细信息

目的探究盲肠结扎穿孔法(cecal ligation and puncture,CLP)建立的脓毒症小鼠模型肝细胞自噬的发生情况及不同时间点自噬相关蛋白的表达规律。方法50只6~8周龄清洁级雄性ICR小鼠按照随机数字表法随机分为5组:CLP 3 h组,CLP 6 h组,CLP 12 h组,CLP 24 h组和对照组,于术后相应时间点取材。生化法检测谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST);ELISA法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)的表达量;HE染色观察肝组织炎症情况;电镜观察肝组织自噬体和自噬溶酶体的超微结构;免疫印迹法检测肝组织自噬蛋白LC3(微管相关蛋白轻链3)和P62的表达量;免疫荧光观察自噬体的位置和数量。采用SPSS 21.0进行统计学分析,两组间比较采用两独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果CLP术后ALT和AST明显升高,均在12 h到达高峰,分别为(137.8±11.94)U/L和(475.3±57.34)U/L;IL-6的表达量在6 h到达高峰(2589.63±27.96)pg/ml;TNF-α在3 h到达高峰(320.21±8.9)pg/ml;HE染色观察到肝库普弗细胞活化,单个粒细胞浸润;电镜观察到自噬体,自噬溶酶体形成;与对照组相比,免疫印迹法显示LC3Ⅱ/Ⅰ比值在先升高后降低,6 h达到高峰(t=13.35,P<0.05),P62蛋白含量先降低后升高,在6 h达到最低(t=66.11,P<0.05),与LC3Ⅱ/Ⅰ趋势正好相反;免疫荧光结果显示LC3荧光强度于6 h达到高峰(t=12.52,P=0.05)。结论盲肠结扎穿孔法建立脓毒症小鼠模型肝脏发生了自噬现象,且自噬先增强后减弱,自噬体形成在6 h达高峰。

关键词：脓毒症盲肠结扎穿孔法肝损伤自噬 LC3 P62 炎症因子小鼠

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老年住院患者发生谵妄的研究进展

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中华老年医学杂志 2022年第5期41卷 596-599页

作者：郑晓晓孙力超北京大学人民医院急诊科北京100044 中日友好医院急诊科北京100029

谵妄是老年患者住院期间常见而严重的综合征,对患者、家庭和社会均带来严重的影响。本文就老年住院患者发生谵妄的流行病学、危险因素、发病机制、评估标准以及预防和治疗的新进展进行综述。

关键词：谵妄住院病人诊断治疗

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p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂SB203580对糖皮质激素敏感性的影响机制

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中华医学杂志 2012年第36期92卷 2570-2573页

作者：李雯林江涛孙力超周童亮张岚舒峻中国医学科学院北京协和医学院研究生院 100730 中国医学科学院北京协和医学院研究生院卫生部中日友好医院呼吸内科 100730 中国医学科学院北京协和医学院研究生院急诊科 100730 中国医学科学院北京协和医学院研究生院临床医学研究所中心实验室 100730

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）抑制剂SB203580对糖皮质激素敏感性的影响机制。方法在体内实验中，Wistar大鼠60只随机分为正常对照组、哮喘组、烟雾暴露哮喘组及SB203580干预组各15只。经荧光定量PCR检测大鼠肺组织糖皮质... 详细信息

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）抑制剂SB203580对糖皮质激素敏感性的影响机制。方法在体内实验中，Wistar大鼠60只随机分为正常对照组、哮喘组、烟雾暴露哮喘组及SB203580干预组各15只。经荧光定量PCR检测大鼠肺组织糖皮质激素受体（GR）、热休克蛋白90（HSP90）和p38MAPKmRNA的表达，经Western印迹检测大鼠肺组织GR、HSP90和p38MAPK蛋白的表达。在体外实验中，培养人肺腺癌A549细胞，将其平均分为4组并进行如下处理：A组：空白对照组；B组：加用地塞米松（1μmol／L）；C组：加用地塞米松＋尼古丁（均为1μmol／L）；D组：加用地塞米松＋尼古丁＋SB203580（均为1μmol／L）。采用免疫荧光染色技术分析GR亚细胞定位。结果烟雾暴露哮喘组和SB203580干预组大鼠肺组织GRmRNA表达分别为0．671±0．002和0．595-4-0．061（P=0．065），GR蛋白表达分别为0．700±O．033和0．6284-0．091（P=0．148）。两组大鼠肺组织HSP90mRNA表达分别为0．558±0．009和0．377±0．046（P=0．000），HSP90蛋白表达分别为0．507±0．030和0．402±0．050（P=0．005）；p38MAPKmRNA表达分别为0．9714-0．012和0．278±0．049（P=0．000），p38MAPK蛋白表达分别为0．982±0．038和0．338±0．042（P=0．000）。C组A549细胞GR的核质比（0．077±0．047）明显低于D组（0．592±0．249）（P=0．000）。结论p38MAPK抑制剂SB203580通过促使GR核转位提高糖皮质激素敏感性。

关键词：哮喘糖皮质激素类 p38丝裂原活化蛋白激酶类

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被动抬腿试验联合经胸超声心动图指导脓毒性休克患者早期液体复苏的临床意义

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中华危重病急救医学 2019年第4期31卷 413-417页

作者：李刚魏冯宁张国强孙力超练睿中日友好医院急诊科北京100029

目的探讨被动抬腿试验(PLR)联合经胸超声心动图(TTE)指导脓毒性休克患者早期液体复苏的临床意义。方法采用前瞻性随机对照研究(RCT)方法,选择2017年1月至2018年10月中日友好医院收治的脓毒性休克患者74例,按照随机数字表法将患者分为对... 详细信息

目的探讨被动抬腿试验(PLR)联合经胸超声心动图(TTE)指导脓毒性休克患者早期液体复苏的临床意义。方法采用前瞻性随机对照研究(RCT)方法,选择2017年1月至2018年10月中日友好医院收治的脓毒性休克患者74例,按照随机数字表法将患者分为对照组和试验组,每组37例。两组患者均经验性应用广谱抗菌药物,同时通过锁骨下静脉置管补液治疗。对照组采用传统快速充分补液方案。试验组采用PLR联合TTE评估指导补液方案,用床旁TTE测量PLR前后患者的每搏量(SV),根据每搏量变异度(SVV)判断患者的容量反应,若SVV≥15%,认为患者有容量反应,给予快速充分补液策略;若SVV0.05),其他3项指标均明显优于对照组〔Lac(mmol/L):2.52±1.15比3.89±1.42,PaO2/FiO2(mmHg):338.14±27.47比303.35±22.52,ScvO2:0.70±0.04比0.63±0.05,均P0.05〕。结论与传统单纯快速补液策略比较,PLR联合TTE评估脓毒性休克患者容量反应指导早期补液治疗,可以更好地改善组织器官的血液灌注和氧合水平,避免单纯快速补液造成的肺水肿,缩短了住院时间,但对于住院病死率无明显影响。

关键词：被动抬腿试验经胸超声心动图脓毒性休克早期液体复苏

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降钙素原在血流感染病原学诊断中的价值

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中华急诊医学杂志 2021年第4期30卷 426-431页

作者：闫圣涛何秀燕孙力超张洪波张国强中日友好医院急诊科北京100029 中日友好医院临床试验病房北京100085

目的评价降钙素原(procalcitonin,PCT)血清浓度鉴别诊断血流感染(bloodstream infection,BSI)病原学的准确性。方法收集2015年1月至2020年6月于中日友好医院重症监护室(ICU)诊断为BSI且阳性血培养同时进行PCT检测的患者资料,以血培养当... 详细信息

目的评价降钙素原(procalcitonin,PCT)血清浓度鉴别诊断血流感染(bloodstream infection,BSI)病原学的准确性。方法收集2015年1月至2020年6月于中日友好医院重症监护室(ICU)诊断为BSI且阳性血培养同时进行PCT检测的患者资料,以血培养当天的参数计算序贯器官衰竭评分(sequential organ failure assessment,SOFA),比较不同病原体感染者之间各指标的差异,并用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析生物标志物PCT对单一病原体感染的鉴别诊断价值。结果在1456例BSI患者中,单一细菌或念珠菌感染分别为1261例(86.6%)和80例(5.5%),混合感染115例(7.9%);28 d病死率为24.5%(356/1456),60 d病死率为30.6%(446/1456);无论28 d还是60 d病死率,混合感染组均明显高于细菌菌血症组以及念珠菌血症组。PCT在革兰阴性菌(gram-negative bacteria,GNB)菌血症中显著高于革兰阳性菌(gram-positive bacteria,GPB)菌血症和念珠菌血症{3.4μg/L[95%可信区间(95%CI)0.7~17.0μg/L]比1.3μg/L(95%CI 0.4~7.3μg/L);3.4μg/L(95%CI 0.7~17.0μg/L)比1.1μg/L(95%CI 0.4~3.4μg/L);P0.51μg/L,诊断细菌菌血症的敏感性可达73.3%;②PCT鉴别诊断GNB菌血症与念珠菌血症的最佳截断值为7.32μg/L,特异性为90.0%;AUROC为0.695(95%CI 0.614~0.776);当PCT>0.51μg/L时,诊断GNB菌血症的敏感性为84.9%;③PCT鉴别诊断GNB菌血症与GPB菌血症的最佳截断值为0.52μg/L,敏感性为84.9%,AUROC为0.713(95%CI 0.672~0.755);当PCT>7.36μg/L,诊断GNB菌血症的特异性可达80.1%。结论PCT能够提供BSI患者可能的病原学方面的额外信息,尤其是较高的PCT水平往往提示GNB菌血症可能。

关键词：降钙素原细菌菌血症念珠菌血症血流感染病原学革兰阳性菌革兰阴性菌 SOFA评分

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基于CiteSpace分析2011年-2020年全球肝癌免疫治疗研究领域的热点及趋势

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临床肝胆病杂志 2021年第12期37卷 2843-2848页

作者：张稚淳孙力超孙秋月彭亮田古北京中医药大学东直门医院重点实验室北京100700 国家癌症中心/国家肿瘤临床医学研究中心/中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院分子肿瘤重点实验室北京100021 国家癌症中心/国家肿瘤临床医学研究中心/中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院科研处北京100021 中日友好医院北京市免疫炎性重点实验室中日友好医院临床医学研究所北京100029

目的通过文献计量学方法分析2011年—2020年全球肝癌免疫治疗领域的研究热点和研究趋势。方法选取Web of Science-SCI Expanded数据库,检索策略:#1 TS=(Liver Neoplasms OR Neoplasms,Hepatic OR Neoplasms,Liver OR Liver Neoplasm OR Neoplasm,Liver OR Hepatic Neoplasms OR Hepatic Neoplasm OR Neoplasm,Hepatic OR Cancer of Liver OR Hepatocellular Cancer OR Cancers,Hepatocellular OR Hepatocellular Cancers OR Hepatic Cancer OR Cancer,Hepatic OR Cancers,Hepatic OR Hepatic Cancers OR Liver Cancer OR Cancer,Liver OR Cancers,Liver OR Liver Cancers OR Cancer of the Liver OR Cancer,Hepatocellular)AND#2 TS=(Immunotherapy OR Immunotherapies OR Immunity therapy),时间跨度:2011年—2020年,文献类型:Article,语种:English。通过CiteSpace软件对2011年—2020年肝癌免疫治疗领域发表文献的年度、国家、机构、作者、期刊、基金分布、被引情况以及关键词等进行可视化分析,分析该领域文献关键词词频、中心性和聚类情况。结果共纳入1972篇肝癌免疫治疗文献,分析结果显示,中国是发文量最多的国家,中山大学是发文量最多的机构,Journal for Immunotherapy of Cancer是发文量最多的期刊。肿瘤相关巨噬细胞、溶瘤病毒(如腺病毒)、肿瘤疫苗、过继免疫细胞、免疫检查点抑制剂及免疫联合治疗是当前该领域研究热点。肿瘤疫苗→溶瘤病毒免疫治疗→过继免疫细胞治疗→免疫检查点抑制剂治疗是该领域的研究趋势。结论近10年来,肝癌免疫治疗研究不断发展,随着新的肿瘤疫苗、溶瘤病毒和免疫检查点抑制剂的研发,免疫检查点抑制剂的改进,以免疫治疗为基础的联合治疗有望进一步提高肝癌的临床疗效。

关键词：癌,肝细胞免疫疗法文献计量学 CiteSpace

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降钙素原和危重症评分在腹腔感染脓毒症病原学诊断及预后评估中的价值

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中华危重病急救医学 2021年第7期33卷 792-797页

作者：闫圣涛练睿孙力超金子鸿赵聪玲张国强中日友好医院急诊科北京100029 北京协和医学院研究生院北京100730 中日友好医院国际医疗部北京100029

目的比较多种危重症评分(CIS)及生物标志物降钙素原(PCT)对腹腔感染(IAI)导致血流感染(BSI)脓毒症患者早期和晚期预后的评估价值以及PCT在病原学诊断中的价值。方法收集2014年1月至2019年12月就诊于中日友好医院急诊科最终诊断为IAI且就... 详细信息

目的比较多种危重症评分(CIS)及生物标志物降钙素原(PCT)对腹腔感染(IAI)导致血流感染(BSI)脓毒症患者早期和晚期预后的评估价值以及PCT在病原学诊断中的价值。方法收集2014年1月至2019年12月就诊于中日友好医院急诊科最终诊断为IAI且就诊24 h内至少有1次血培养阳性的脓毒症患者的临床资料。根据患者就诊当天首次实验室检查结果计算序贯器官衰竭评分(SOFA)、急诊脓毒症死亡风险评分(MEDS)、Logistic器官功能障碍评分系统(LODS)评分、急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ(APACHEⅡ)。比较不同革兰染色菌感染者之间以及不同28 d或60 d预后患者之间各指标的差异;用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析PCT对单一细菌IAI导致BSI脓毒症病原学鉴别诊断的价值,以及各种CIS和PCT对IAI导致BSI脓毒症患者28 d和60 d死亡的预测价值。结果共纳入单一细菌IAI导致BSI脓毒症患者221例,28 d病死率为19.9%(44/221),60 d病死率为25.8%(57/221);革兰阳性菌(G+菌)感染患者的病死率明显高于革兰阴性菌(G-菌)感染患者(28 d:34.6%比11.4%,60 d:42.0%比16.4%,均P10.92µg/L时,其诊断G-菌感染的特异度可达81.8%。②在预测IAI导致BSI脓毒症患者28 d和60 d预后方面,APACHEⅡ评分的AUC最大〔28 d:0.791(95%CI为0.680~0.902),60 d:0.748(95%CI为0.645~0.851)〕;当APACHEⅡ评分>14.5分时,预测患者28 d和60 d死亡的阴性预测值分别为94.9%、88.5%。PCT对IAI导致BSI脓毒症患者预后的预测价值较低〔28 d AUC:0.610(95%CI为0.495~0.725),60 d AUC:0.558(95%CI为0.450~0.667)〕。结论PCT在判断IAI导致BSI脓毒症患者病原菌方面较为可靠;但在评估早期和晚期预后方面,APACHEⅡ评分可能更具优势。

关键词：危重症评分腹腔感染降钙素原血流感染预后脓毒症3.0

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杂交瘤单抗15B7靶向抑制ESA阳性肝癌干细胞的体外侵袭能力和顺铂耐药性

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肿瘤 2015年第6期35卷 597-603页

作者：杨婧莫文秀刘辉琦遇珑孙立新杨治华孙力超冉宇靓北京协和医学院/中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室北京100021

目的 :研究一株杂交瘤细胞分泌的识别上皮特异性抗原(epithelial specii c antigen,ESA)阳性肝癌干细胞的单克隆抗体(简称单抗)15B7的体外功能,为靶向肝癌干细胞的肝癌治疗提供候选抗体药物。方法 :采用无血清悬浮培养及PKH26染色法确... 详细信息

目的 :研究一株杂交瘤细胞分泌的识别上皮特异性抗原(epithelial specii c antigen,ESA)阳性肝癌干细胞的单克隆抗体(简称单抗)15B7的体外功能,为靶向肝癌干细胞的肝癌治疗提供候选抗体药物。方法 :采用无血清悬浮培养及PKH26染色法确定肝癌Bel7402-V3细胞球中存在肿瘤干细胞。采用FCM法和双色细胞免疫荧光法检测ESA和单抗15B7识别的抗原蛋白在Bel7402-V3细胞中的表达情况。采用无血清悬浮培养法观察单抗15B7作用对Bel7402-V3细胞球自我更新能力的影响,细胞计数试剂盒-8法检测单抗15B7对Bel7402-V3细胞的顺铂耐药性的影响,Transwell实验检测单抗15B7对Bel7402-V3细胞侵袭能力的影响。结果 :Bel7402-V3细胞经无血清悬浮培养11 d后形成的细胞球体中存在单个PKH26染色阳性的肿瘤干细胞。单抗15B7识别的抗原分子能与ESA一起共定位于Bel7402-V3细胞。单抗15B7能显著抑制Bel7402-V3细胞在无血清培养液中成球(P<0.05),抑制率达32.4%;单抗15B7能够有效降低Bel7402-V3细胞的顺铂耐药性(P<0.05),实验组与未经单抗15B7处理的对照组半数抑制浓度分别为0.14μg/m L和0.27μg/m L;此外,单抗15B7亦能抑制Bel7402-V3细胞的侵袭能力(P<0.05),抑制率达30.7%。结论 :杂交瘤单抗15B7在体外能够显著抑制ESA阳性肝癌干细胞的自我更新、耐药和侵袭能力,推测其可作为肝癌干细胞靶向治疗的有价值的候选抗体药物。

关键词：肝肿瘤肿瘤干细胞抗体,单克隆肿瘤浸润抗药性,肿瘤上皮特异性抗原

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