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双歧杆菌四联活菌片联合富马酸替诺福韦治疗乙肝肝纤维化的效果及对肠黏膜屏障功能的影响

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河南医学研究 2022年第23期31卷 4362-4366页

作者：韩蕊蕊孙会卿郑州大学第五附属医院感染性疾病科河南郑州450015

目的研究双歧杆菌四联活菌片联合富马酸替诺福韦应用于乙肝肝纤维化(LF)的效果,并分析对肠黏膜屏障功能的影响。方法选取2019年1月至2022年1月郑州大学第五附属医院收治的91例乙肝LF患者,以随机数字表法分为对照组(46例)和观察组(45例)... 详细信息

目的研究双歧杆菌四联活菌片联合富马酸替诺福韦应用于乙肝肝纤维化(LF)的效果,并分析对肠黏膜屏障功能的影响。方法选取2019年1月至2022年1月郑州大学第五附属医院收治的91例乙肝LF患者,以随机数字表法分为对照组(46例)和观察组(45例)。对照组接受富马酸替诺福韦,观察组接受双歧杆菌四联活菌片联合富马酸替诺福韦。比较两组临床疗效、治疗前、治疗24周后肝功能[白蛋白(ALB)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、谷丙转氨酶(ALT)]、LF生化指标[Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、测定透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、层粘连蛋白(LN)]、肠黏膜屏障功能[D-乳酸、内毒素、二胺氧化酶(DAO)]及炎症因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、降钙素原(PCT)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-22]水平。结果观察组临床总有效率(97.78%)高于对照组(82.61%)(P<0.05);治疗24周后观察组血清AST、ALT、TBIL、Ⅳ-C、HA、PCⅢ、LN水平均低于对照组,ALB水平高于对照组(P<0.05);治疗24周后观察组血清D-乳酸、内毒素、DAO、TNF-α、PCT、IL-6、IL-22水平均低于对照组(P<0.05);两组不良反应发生率对比,差异无统计学意义(χ^(2)=0.203,P=0.653)。结论双歧杆菌四联活菌片联合富马酸替诺福韦应用于乙肝LF患者疗效确切,可减轻炎症反应,提高肝功能、肠黏膜屏障功能,缓解纤维化,促进病情转归,且未提高明显不良反应发生率。

关键词：乙肝肝纤维化双歧杆菌四联活菌片富马酸替诺福韦肠黏膜屏障功能

RNA干扰HBx基因对肝癌细胞化疗效果的影响

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中南大学学报（医学版） 2009年第5期34卷 395-400页

作者：何艳贺兴鄂孙会卿王文龙雷建华中南大学湘雅二医院肝病研究所长沙410011

目的:探讨RNA干扰技术和传统的化疗方法联合应用对肝癌细胞生长抑制作用的影响,并选择高效的治疗组合,研究其凋亡机制。方法:鉴定3组肝癌细胞——MHCC97-H(原肝癌细胞株),HK3细胞(转染空质粒的MHCC97-H细胞)和21543细胞(转染含HBx-shRN... 详细信息

目的:探讨RNA干扰技术和传统的化疗方法联合应用对肝癌细胞生长抑制作用的影响,并选择高效的治疗组合,研究其凋亡机制。方法:鉴定3组肝癌细胞——MHCC97-H(原肝癌细胞株),HK3细胞(转染空质粒的MHCC97-H细胞)和21543细胞(转染含HBx-shRNA质粒的MHCC97-H细胞);RT-PCR检测RNA干扰对HBx mRNA沉寂作用,CCK8和TUNEL分别检测RNA干扰HBx后化疗药物对MHCC97-H肿瘤细胞生长的抑制及诱导细胞凋亡情况。结果:RT-PCR结果显示,与MHCC97-H细胞组比较,21543细胞的HBx mRNA水平下降约91%,HK3细胞HBx mRNA水平下降不明显;RNA靶向干扰HBx基因后的肝癌细胞(21543细胞)较原肝癌细胞(MHCC97-H细胞)和HK3细胞增殖明显减慢,而后两种细胞差别无统计学意义;3种不同细胞加用3种不同浓度的氟尿嘧啶(0～120mg/L)、顺铂(0～32mg/L)后细胞生长明显减慢并呈浓度依赖性,以RNA靶向干扰HBx基因后的21543细胞生长抑制最明显;相同浓度的氟尿嘧啶对3组不同肝癌细胞均可引起细胞凋亡,以21543细胞凋亡最明显。结论:RNA干扰HBx可明显抑制肝癌细胞的增殖,并增加肝癌细胞对化疗药物的敏感性;RNA干扰HBx基因和化疗药物联合应用使肝癌细胞凋亡更明显,细胞增殖速度明显减慢。

关键词：肝癌细胞 RNA干扰 HBx基因凋亡细胞周期化疗

RNA干扰HBx稳定表达肝癌细胞株细胞增殖及化疗增敏作用的研究

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RNA干扰HBx稳定表达肝癌细胞株细胞增殖及化疗增敏作用的研究

作者：孙会卿中南大学

学位级别：硕士

背景及目的:目前大量实验研究证实HBx片断可在多数并发乙肝病毒感染的肝癌组织中检测到,它是肝细胞发生恶性转化的主要因素之一,并可提高肝癌细胞的增殖活性,促进肝癌细胞快速增长。因此,高效特异的基因治疗新技术RNA干扰靶向沉默HBx基... 详细信息

背景及目的:目前大量实验研究证实HBx片断可在多数并发乙肝病毒感染的肝癌组织中检测到,它是肝细胞发生恶性转化的主要因素之一,并可提高肝癌细胞的增殖活性,促进肝癌细胞快速增长。因此,高效特异的基因治疗新技术RNA干扰靶向沉默HBx基因的应用是肝癌治疗的一种新方法。另一方面,化疗仍是目前肝癌治疗重要手段之一,但多种化疗药物耐药性是肝癌治疗失败的主要原因。而相关研究表明,HBx片断可通过特异MAPK途径上调多药耐药基因的表达,并使抗凋亡信号占主导地位,抑制化疗药物诱导的肝癌细胞凋亡。因此我们拟采用针对HBx的RNA干扰技术与常用的肝癌化疗药物或抗肿瘤药协同应用,探讨RNA干扰技术和传统的治疗方法联合应用对肝癌细胞的生长抑制作用的影响,并选择高效的治疗组合,研究其凋亡机制。方法:1.鉴定转染无关的对照序列(HK3细胞)和针对X基因shRNA(21543细胞)的稳定肝癌细胞株:复苏三种肝癌细胞(MHCC97-H,HK3,21543细胞),在含有一定浓度G418的高糖培养基中培养一段时间后,倒置荧光显微镜观察GFP的表达,初步估计转染效率并拍照。2.RT-PCR检测RNA干扰对HBx基因mRNA沉寂的程度:收集细胞提取总RNA,加用两对不同引物参照说明进行RT-PCR,根据凝胶电泳中内源基因片段条带的强弱,来判定模板的量,进而判断HBX基因的mRNA被siRNA沉寂的程度。3.观察RNA干扰后对细胞生长的影响:利用CCK8(Cell countingkit-8)测定光密度值,绘制三种不同细胞6天的不同增殖曲线。4.流式细胞仪检测细胞周期的变化。5.绘制加用三种不同浓度的5-氟脲嘧啶,顺铂,α-干扰素的肝癌细胞的生长曲线,选择最佳组合。6.TUNEL细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡。结果:1.复苏后细胞形态和GFP表达强度差别不大。2.RT-PCR结果显示相对于MHCC-97H细胞,21543细胞的HBxmRNA水平的下调显著,HK3细胞的HBx mRNA水平的下调不明显。3.靶向HBX的RNA干扰后的肝癌细胞(21543细胞)较原肝癌细胞(MHCC97-H细胞)和转染无关对照序列的肝癌细胞(HK3细胞)增殖明显减慢,后两种细胞差别不显著。4.21543细胞的细胞周期显示RNA干扰后的肝癌细胞延缓进入S期,增殖活性明显降低。5.三种不同细胞加用三种不同浓度的5-氟脲嘧啶,顺铂后细胞生长明显减慢,并呈浓度依赖性,以RNA干扰HBx后的肝癌细胞(21543细胞)生长抑制最明显,加用干扰素后细胞抑制不明显。6.相同浓度的化疗药物5-氟脲嘧啶作用上述三种不同肝癌细胞均可引起细胞凋亡,以RNA干扰后的肝癌细胞(21543细胞)最为明显。结论:1.RNA干扰HBx可明显抑制肝癌细胞的增长,细胞周期发生改变。2.RNA干扰HBx后的肝癌细胞可明显增强化疗敏感性。3.RNA干扰HBx和化疗药物二者联合应用肝癌细胞凋亡更为明显,细胞增殖明显减慢。

关键词：肝癌细胞 RNA干扰 HBx 化疗增敏凋亡细胞周期

基于PI3K/AKT/mTOR信号通路研究双氢青蒿素对人肝癌SMMC-7721细胞自噬的影响

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中医学报 2022年第4期37卷 830-836页

作者：朱海洋孙会卿张淑凤吴贺文郑州大学第五附属医院河南郑州450052 河南省人民医院河南郑州450003

目的:研究双氢青蒿素(dihydroartemisinin, DHA)对人肝癌SMMC-7721细胞自噬的影响,并初步探讨其作用机制。方法:采用不同浓度(0μmol·L^(-1)、6.25μmol·L^(-1)、12.5μmol·L^(-1)、25μmol·L^(-1)、50μmol·L^(-1)、100μmol·L^(-1))DHA分别作用于SMMC-7721细胞24 h、48 h、72 h后,MTT法检测DHA对细胞增殖的影响,计算DHA对SMMC-7721细胞的半抑制浓度(inhibitory concentration 50,IC50),并于显微镜下观察细胞形态变化;SMMC-7721细胞随机分为对照组、DHA组、抑制剂组、激动剂组,DHA组以IC50剂量的DHA干预细胞,抑制剂组采用5 mmol·L^(-1)3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine, 3-MA)与IC50剂量的DHA干预细胞,激动剂组采用100μg·L^(-1)激动剂胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factors-1,IGF-1)与IC50剂量的DHA干预细胞,对照组采用常规培养基干预细胞,培养48 h后,采用透射电镜及MDC染色观察细胞自噬情况;Western Blot检测细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositide 3-kinase, PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)信号通路相关蛋白及自噬相关蛋白的表达水平。结果:不同浓度DHA干预SMMC-7721细胞24 h、48 h、72 h后,细胞增殖抑制率显著升高(P<0.05),细胞形态发生改变,且呈剂量和时间依赖性;与对照组比较,DHA组和抑制剂组可诱导SMMC-7721细胞自噬,PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白相对表达量显著降低(P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-I和Beclin1蛋白相对表达量显著升高(P<0.05);与DHA组、抑制剂组比较,激动剂组SMMC-7721细胞自噬减弱,PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白相对表达量显著升高(P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-I和Beclin1蛋白相对表达量显著降低(P<0.05)。结论:DHA可抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖,促进SMMC-7721细胞自噬,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。

关键词：肝癌双氢青蒿素细胞自噬 PI3K/AKT/mTOR信号通路

食管静脉套扎联合生长抑素治疗肝硬化并发食管静脉曲张破裂出血的临床效果分析

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医药论坛杂志 2022年第8期43卷 59-62页

作者：朱海洋高红伟孙会卿郑州大学第五附属医院消化内科郑州450052

目的分析肝硬化并发食管静脉曲张破裂出血患者联合使用食管静脉套扎与生长抑素的作用。方法选取2020年1月—2021年12月郑州大学第五附属医院消化内科接受治疗的肝硬化并发食管静脉曲张破裂出血患者64例,按治疗方法不同,将常规支持联... 详细信息

目的分析肝硬化并发食管静脉曲张破裂出血患者联合使用食管静脉套扎与生长抑素的作用。方法选取2020年1月—2021年12月郑州大学第五附属医院消化内科接受治疗的肝硬化并发食管静脉曲张破裂出血患者64例,按治疗方法不同,将常规支持联合生长抑素治疗的32例作为常规组,将常规组基础上加用食管静脉套扎治疗的32例作为观察组,比较两组患者治疗效果、临床指标、肝静脉压力梯度(HVPG)水平、不良反应发生率、再出血发生率。结果观察组治疗总有效率100.00%,高于常规组(90.6%),组间差异对比有统计学意义(P0.05);治疗后观察组HVPG水平低于常规组,RBC和Hb水平高于常规组,差异有统计学意义(P0.05);术后随访12个月,观察组再出血总发生率为15.6%,明显低于对照组(71.9%)(P<0.05)。结论食管静脉套扎联合生长抑素治疗肝硬化并发食管静脉破裂出血有显著效果,可以考虑积极推广。

关键词：食管静脉套扎生长抑素联合治疗肝硬化食管静脉曲张破裂出血

靶向HBx基因shRNA载体稳定表达人肝癌细胞的建立

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中华肝脏病杂志 2009年第4期17卷 310-312页

作者：贺兴鄂孙会卿杨旭雷建华童明王文龙中南大学湘雅二医院肝病研究所长沙410011

本研究采用整合有HBV DNA而HBsAg表达阴性的人肝癌细胞株MHCC97-H，应用免疫荧光法初步研究HBx表达，并从基因组中克隆HBx基因，采用RNA干扰（RNAi）技术，构建靶向该HBx基因的短发夹RNA（shRNA）真核表达载体，通过转染和筛选，研究sh... 详细信息

本研究采用整合有HBV DNA而HBsAg表达阴性的人肝癌细胞株MHCC97-H，应用免疫荧光法初步研究HBx表达，并从基因组中克隆HBx基因，采用RNA干扰（RNAi）技术，构建靶向该HBx基因的短发夹RNA（shRNA）真核表达载体，通过转染和筛选，研究shRNA载体在MHCC97-H细胞中稳定表达对HBx基因表达的影响，最终构建稳定表达靶向整合HBx基因的shRNA载体的人肝痛细胞模型，为进一步研究构建平台。

关键词：癌肝细胞肝炎病毒乙型基因疗法 RNA干扰

靶向整合于MHCC97-H细胞的HBx基因shRNA表达载体的构建和鉴定

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中国医科大学学报 2008年第4期37卷 445-447,451页

作者：王文龙孙会卿杨旭贺兴鄂雷建华童明中南大学湘雅二医院肝病研究所长沙410011

目的构建靶向整合于人肝癌MHCC97-H细胞乙型肝炎病毒x基因(HBxgene)基因的shRNA真核载体。方法依据从人肝癌细胞株MHCC97-H中克隆的HBx基因序列,设计合成X169、X220及MOCK(无关对照)3对寡核酸,经退火成互补双链并克隆至pGenesil-Ⅰ载体... 详细信息

目的构建靶向整合于人肝癌MHCC97-H细胞乙型肝炎病毒x基因(HBxgene)基因的shRNA真核载体。方法依据从人肝癌细胞株MHCC97-H中克隆的HBx基因序列,设计合成X169、X220及MOCK(无关对照)3对寡核酸,经退火成互补双链并克隆至pGenesil-Ⅰ载体;经酶切、PCR和测序鉴定;将鉴定的shRNA质粒脂质体转染MHCC97-H细胞,流式细胞分析转染效率。结果酶切、PCR及测序证实pshRNA-X169/X220/MOCK质粒构建符合设计,转染48h后MHCC97-H细胞可激发绿色荧光,pshRNA-X220转染效率最低。结论成功构建靶向整合于人肝癌细胞HBVx基因特异性shRNA表达载体,并成功转染人肝癌细胞株MHCC97-H细胞,为沉默HBx基因实验性肝癌基因治疗奠定基础。

关键词： RNA干扰短发夹RNA 乙型肝炎病毒x基因 MHCC97-H细胞整合

雷贝拉唑为基础四联疗法治疗Hp阳性十二指肠溃疡的临床效果

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现代诊断与治疗 2019年第21期30卷 3725-3727页

作者：孙会卿朱海洋郑州大学第五附属医院消化内三科

目的探究以雷贝拉唑为基础四联疗法治疗Hp阳性十二指肠溃疡的临床效果。方法选取2018年7月至2019年5月我院收治的Hp阳性十二指肠溃疡患者96例,按随机数字表法分为观察组和对照组各48例。对照组予克拉霉素、阿莫西林和雷贝拉唑三联治疗,... 详细信息

目的探究以雷贝拉唑为基础四联疗法治疗Hp阳性十二指肠溃疡的临床效果。方法选取2018年7月至2019年5月我院收治的Hp阳性十二指肠溃疡患者96例,按随机数字表法分为观察组和对照组各48例。对照组予克拉霉素、阿莫西林和雷贝拉唑三联治疗,观察组在此基础上予加用果胶铋的四联疗法治疗。比较两组Hp根除率,治疗前后血清指标水平变化(HMGB1、TNF-α和NF-κB)和临床症状积分变化(嗳气、反酸、烧心和腹痛)。结果治疗后,观察组Hp根除率为95.83%显著高于对照组的79.17%,差异有统计学意义(P0.05),治疗后,两组嗳气、反酸、烧心和腹痛临床症状积分较治疗前均有所降低,且观察组均显著低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05),治疗后,两组HMGB1、TNF-α和NF-κB等血清指标水平较治疗前均有所降低,且观察组均显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论给予Hp阳性十二指肠溃疡以雷贝拉唑为基础的四联疗法,可显著提升患者Hp根除率,进而使临床症状好转显著,使HMGB1、TNF-α和NF-κB水平明显降低,值得推广。

关键词：雷贝拉唑克拉霉素阿莫西林果胶铋

艾瑞昔布联合5-氟尿嘧啶对裸鼠结肠癌移植瘤侵袭和转移的影响

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现代药物与临床 2021年第3期36卷 435-440页

作者：孙会卿张淑凤王长武韩蕊蕊郑州大学第五附属医院消化内科河南郑州450052

目的探讨艾瑞昔布联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)对结肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤侵袭和转移的影响以及与环氧化酶-2(COX-2)、血管内皮生长因子-C(VEGF-C)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的关系。方法 40只裸鼠构建人结肠癌HT-29细胞裸鼠皮下移植瘤模型,... 详细信息

目的探讨艾瑞昔布联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)对结肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤侵袭和转移的影响以及与环氧化酶-2(COX-2)、血管内皮生长因子-C(VEGF-C)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的关系。方法 40只裸鼠构建人结肠癌HT-29细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为4组,每组10只,对照组(0.9%NaCl);艾瑞昔布组[100 mg/(kg·d)];5-Fu组(20 mg/kg);联合用药组[艾瑞昔布100 mg/(kg·d),5-FU 20 mg/kg],艾瑞昔布ig给药,1次/d,5-Fu ip给药,每3天1次,连续给药14 d。实验结束时测量各组裸鼠瘤体大小,并计算抑瘤率;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测COX-2、VEGF-C、MMP-9血清浓度,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测COX-2、VEGF-C、MMP-9的m RNA表达,免疫组化法检测瘤体微血管密度(MVD),Westernblotting法检测COX-2、VEGF-C、MMP-9蛋白表达。结果艾瑞昔布组、5-Fu组、联合用药组与对照组比较,抑瘤效果显著,其中以联合用药组抑瘤效果最佳(P<0.05)。艾瑞昔布组、5-Fu组、联合用药组较对照组裸鼠血清COX-2、VEGF-C、MMP-9浓度、瘤体COX-2、VEGF-C、MMP-9的m RNA和其蛋白表达、瘤体MVD均显著降低(P<0.05),其中以联合用药组降低最显著(P<0.05)。结论艾瑞昔布联合5-Fu可协同抑制结肠癌裸鼠移植瘤侵袭和转移,增强5-Fu的抗肿瘤效果,其作用机制可能与下调COX-2、VEGF-C、MMP-9表达有关。

关键词：艾瑞昔布 5-氟尿嘧啶结肠癌环氧化酶-2 血管内皮生长因子-C 基质金属蛋白酶-9