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葡萄致腐菌灰葡萄孢及其拮抗菌贝莱斯芽孢杆菌的分离鉴定

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江苏农业科学 2024年第15期 144-153页

作者：刘萍牛新湘管力慧杨红梅楚敏包慧芳王宁詹发强林青杨蓉龙宣杞娄恺史应武新疆农业科学院微生物应用研究所新疆大学生命科学与技术学院新疆特殊环境微生物实验室新疆农业科学院土壤肥料与农业节水研究所农业农村部西北绿洲农业环境重点实验室

分离筛选出对葡萄致腐菌灰葡萄孢有较强拮抗作用的拮抗菌，丰富葡萄采后保鲜拮抗菌资源，以期为葡萄灰霉病的生物防治提供理论依据和奠定应用基础。利用组织块分离法在腐烂的葡萄果实中分离得到灰葡萄孢，梯度稀释法从葡萄园土壤中分离... 详细信息

分离筛选出对葡萄致腐菌灰葡萄孢有较强拮抗作用的拮抗菌，丰富葡萄采后保鲜拮抗菌资源，以期为葡萄灰霉病的生物防治提供理论依据和奠定应用基础。利用组织块分离法在腐烂的葡萄果实中分离得到灰葡萄孢，梯度稀释法从葡萄园土壤中分离得到潜力拮抗菌，通过平板对峙及琼脂扩散法筛选出拮抗作用较强的生防菌，并通过形态学观察、生理生化测定、生物学鉴定确定其种属。通过对拮抗菌进行溶血性测定初步探索其是否对人体有溶血作用。分离得到的葡萄致腐菌通过形态学观察，病原菌PH-23菌丝初期呈灰白色，继续培养会逐渐转变为淡淡的青灰褐色，菌丝繁盛，孢子众多。对病原菌PH-23进行ITS、β-tub序列分析，结合形态学特征确定其为灰葡萄孢。致病力测定结果表明，PH-23接种后葡萄症状与葡萄灰霉病症状相符，腐烂严重。筛选得到对葡萄致腐菌PH-23拮抗作用较强的生防菌TP-1,抑菌圈直径为22.49 mm。通过形态学观察，菌体为杆状，芽孢呈椭圆形，大小为0.62μm×2.35μm。TP-1革兰氏染色阳性。生理生化鉴定结果初步认为TP-1为芽孢杆菌。基于16S rDNA基因、rpoB基因、gyrB基因序列分析确定其为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。拮抗菌TP-1的溶血性测定显示其对人体无溶血作用。拮抗菌TP-1对灰葡萄孢有较强的拮抗作用，在葡萄采后贮藏及生物保鲜中具有潜在的应用价值。

关键词：葡萄灰霉病灰葡萄孢生物防治生理生化鉴定拮抗菌

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单一菌与复合菌发酵甘草渣产有机酸能力比较

中国饲料 2024年第11期 167-172页

作者：杨奕凡高雁刘亚男霍向东娄恺关波陈开旭曾军新疆农业大学动物科学学院新疆乌鲁木齐830000 新疆农业科学院微生物应用研究所/新疆特殊环境微生物实验室新疆乌鲁木齐830091 石河子大学食品学院新疆石河子832000

为研究单一菌与复合益生菌对甘草渣发酵饲料品质的影响,试验以甘草渣为基础原料,与麸皮、豆粕、糖蜜复配,在此基础上以单菌(植物乳杆菌、酿酒酵母)和复合菌(植物乳杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌)为发酵剂,借助食品检测中的碱滴定法,测... 详细信息

为研究单一菌与复合益生菌对甘草渣发酵饲料品质的影响,试验以甘草渣为基础原料,与麸皮、豆粕、糖蜜复配,在此基础上以单菌(植物乳杆菌、酿酒酵母)和复合菌(植物乳杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌)为发酵剂,借助食品检测中的碱滴定法,测定发酵饲料中的总酸含量,通过比较发酵饲料总酸含量及pH结合感官评价,衡量发酵饲料的品质。结果表明:(1)单菌在不同碳氮比条件下发酵,碳氮比为30时生成有机酸含量较碳氮比为25提高了2.8倍。(2)单菌发酵第7天时有机酸含量达到最高值,且pH在发酵第7天时达到最低值。(3)复合益生菌发酵组(E组、F组)与单菌酿酒酵母组(B组)比较甘草渣发酵饲料中有机酸生成量分别提高了52%、52.48%。由此可见,复合益生菌(植物乳杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌)有利于促进甘草渣饲料发酵,无论是气味还是有机酸生成量均比单一菌株甘草渣发酵更优,甘草渣有成为发酵饲料的潜在价值。

关键词：甘草渣复合菌有机酸固态发酵

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MTHFR基因C677T位点多态性与PCOS患者胰岛素抵抗的关系

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检验医学 2024年第6期39卷 562-567页

作者：赵莹陆娄恺奕戴斯佳陈艺升上海市徐汇区大华医院检验科上海200237 复旦大学附属妇产科医院检验科上海200011 上海市闵行区莘庄社区卫生服务中心检验科上海201199

目的探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T基因多态性与多囊卵巢综合征(PCOS)患者胰岛素抵抗(IR)的关系。方法选取2022年1月—2023年11月复旦大学附属妇产科医院PCOS患者145例(PCOS组)和健康体检女性87名(对照组)。检测所有研究对象MT... 详细信息

目的探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T基因多态性与多囊卵巢综合征(PCOS)患者胰岛素抵抗(IR)的关系。方法选取2022年1月—2023年11月复旦大学附属妇产科医院PCOS患者145例(PCOS组)和健康体检女性87名(对照组)。检测所有研究对象MTHFR基因C677T位点多态性和空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)水平。另检测PCOS患者同型半胱氨酸(Hcy)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、叶酸、维生素B12(Vit B12)、维生素D(Vit D)水平。对PCOS患者行胰岛素释放试验(IRT)。计算胰岛素敏感指数(ISI)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素曲线下面积(AUCINS)。根据是否发生IR将健康体检女性和PCOS患者分别分为IR组和非IR组。结果健康体检女性中,IR组和非IR组之间MTHFR C677T位点基因型和等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05)。PCOS患者中,IR组CT、TT基因型分布和T等位基因频率均高于非IR组(P0.05)。PCOS患者中,非IR组CT和TT基因型携带者TC水平高于CC基因型携带者(P0.05)。结论MTHFR C677T位点多态性与PCOS患者IR有关。在未发生IR的PCOS患者中,TT基因型患者Hcy和TC水平显著升高。

关键词：亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性同型半胱氨酸三酰甘油胰岛素抵抗多囊卵巢综合征

4种药剂对梨火疫病防病效果及产量品质的影响

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新疆农业科学 2024年第6期61卷 1432-1440页

作者：史应武牛新湘杨红梅楚敏包慧芳王宁詹发强林青杨蓉龙宣杞娄恺新疆农业科学院微生物应用研究所/新疆特殊环境微生物实验室乌鲁木齐830091 农业农村部西北绿洲农业环境重点实验室乌鲁木齐830091 新疆农业科学院土壤肥料与农业节水研究所乌鲁木齐830091

【目的】筛选出对库尔勒香梨(简称香梨)梨火疫病高效的防病药剂,分析不同药剂对库尔勒香梨产量及品质的影响。【方法】选用1000×10^(8)CFU/g贝莱斯芽孢杆菌DP、1.8%辛菌胺醋酸盐水剂、3%噻霉酮微乳剂和6%春雷霉素水剂设置12个处理。【... 详细信息

【目的】筛选出对库尔勒香梨(简称香梨)梨火疫病高效的防病药剂,分析不同药剂对库尔勒香梨产量及品质的影响。【方法】选用1000×10^(8)CFU/g贝莱斯芽孢杆菌DP、1.8%辛菌胺醋酸盐水剂、3%噻霉酮微乳剂和6%春雷霉素水剂设置12个处理。【结果】高、中、低剂量Bacillus velezensis TK2019(以下简称Bacillus velezensis)可湿性菌粉、1.8%辛菌胺醋酸盐、3%噻霉酮微乳剂和6%春雷霉素水剂,分别对大田香梨梨火疫病的防效为71.64%、65.22%和51.30%,66.69%、56.18%和40.30%,66.50%、58.19%和41.89%,72.28%、60.49%和54.22%,其中Bacillus velezensis可湿性菌粉稀释浓度107 CFU/mL、6%春雷霉素水剂500倍液可显著降低梨火疫病的发生。【结论】Bacillus velezensis菌剂和6%春雷霉素水剂对梨火疫病防效显著高于对照和1.8%辛菌胺醋酸盐水剂、3%噻霉酮微乳剂,较好地抑制梨火疫病的发生,控制发病枝条的数量,提高了香梨单果质量、改善果实品质、提升香梨果实防御酶活性,且高浓度生防菌改善作用更佳,施用后对香梨树生长发育安全。

关键词：库尔勒香梨贝莱斯芽孢杆菌梨火疫病辛菌胺醋酸盐噻霉酮微乳剂春雷霉素解淀粉欧文氏菌防治效果

基于非靶向代谢组学分析两种酵母培养物的成分差异

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新疆农业科学 2024年第5期61卷 1218-1226页

作者：林青时红玲秦新政李月王子涵高雁曾军王浩中娄恺霍向东新疆农业科学院微生物应用研究所/新疆特殊环境微生物实验室乌鲁木齐830091 新疆大学生命科学与技术学院乌鲁木齐830046

【目的】比较两种酵母培养物及其代谢成分的差异,为指导酵母培养物的生产及应用提供参考。【方法】材料为1种自研酵母培养物与达农威益康XP酵母培养物,利用非靶标代谢组学UHPLC-QTOF-MS技术,分析比较二者代谢产物成分及差异。【结果】(1... 详细信息

【目的】比较两种酵母培养物及其代谢成分的差异,为指导酵母培养物的生产及应用提供参考。【方法】材料为1种自研酵母培养物与达农威益康XP酵母培养物,利用非靶标代谢组学UHPLC-QTOF-MS技术,分析比较二者代谢产物成分及差异。【结果】(1)在二级类别注释下,正、负离子模式分别注释到614、497个化合物,主要代谢类别为有机酸,核苷、核苷酸及其衍生物,氨基酸及其衍生物,两种酵母培养物均无特有代谢成分,只在含量上有显著(P<0.05)差异。(2)共237个差异代谢物在正离子模式检出,176个显著(P<0.05)上调表达,61个显著(P<0.05)下调表达;136个差异代谢物在负离子模式检出,64个显著(P<0.05)上调表达,72个显著(P<0.05)下调表达。(3)差异代谢物的KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)富集分析主要集中在丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸等代谢通路。【结论】自研酵母培养物与达农威益康XP的代谢产物含量存在显著差异,但其发酵原料及工艺更简便,并含有多种具药理、生理作用的代谢成分,有潜在应用价值。

关键词：酵母培养物非靶标代谢组学差异代谢物酿酒酵母

新疆甜瓜采后致腐菌及拮抗菌的分离、筛选与鉴定

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西南农业学报 2024年第4期37卷 796-804页

作者：管力慧牛新湘刘萍杨红梅楚敏包慧芳王宁詹发强林青杨蓉龙宣杞娄恺史应武新疆农业科学院微生物应用研究所乌鲁木齐830091 新疆大学生命科学与技术学院乌鲁木齐830052 新疆特殊环境微生物实验室乌鲁木齐830091 新疆农业科学院土壤肥料与农业节水研究所乌鲁木齐830091 农业农村部西北绿洲农业环境重点实验室乌鲁木齐830091

[目的]对甜瓜采后主要致腐微生物进行分离鉴定,并筛选出防腐效果最佳的拮抗菌株,丰富甜瓜采后保鲜拮抗菌资源。[方法]利用组织块分离法在腐烂的甜瓜果实中分离致腐菌,采用梯度稀释法从甜瓜种植地土壤分离拮抗菌,通过平板对峙法筛选出拮... 详细信息

[目的]对甜瓜采后主要致腐微生物进行分离鉴定,并筛选出防腐效果最佳的拮抗菌株,丰富甜瓜采后保鲜拮抗菌资源。[方法]利用组织块分离法在腐烂的甜瓜果实中分离致腐菌,采用梯度稀释法从甜瓜种植地土壤分离拮抗菌,通过平板对峙法筛选出拮抗作用较强的生防菌,并通过形态学观察、生理生化测定、生物学鉴定确定其种属,测定拮抗菌对菌丝生长及分生孢子萌发的作用,明确拮抗菌对致腐菌的防治效果。[结果]本研究分离出1株主要病原菌CH-3,通过对ITS、tef和tub基因序列进行BLAST比对及系统发育分析,结合菌落形态特征观察,病原菌CH-3鉴定为尖孢镰刀菌。从甜瓜种植地土壤中分离得到67株细菌,通过拮抗试验得到3株抑菌活性很强的拮抗菌,分别为BG-1、BG-2和BG-3,选取抑菌效果更好的BG-2作为供试菌株,结合生理生化测定、菌落和菌体形态特征观察及16S rDNA、gyrB和rpoB基因序列分析结果,明确拮抗菌BG-2为贝莱斯芽孢杆菌。致病性测定结果表明,致腐菌CH-3对甜瓜有致病性,拮抗菌BG-2对甜瓜致腐菌尖孢镰刀菌CH-3孢子萌发、菌丝生长的相对抑制率分别为90.00%、60.11%。[结论]获得1株拮抗效果最佳的拮抗菌BG-2,鉴定为贝莱斯芽孢杆菌,分离到1株甜瓜主要致腐菌CH-3,鉴定为尖孢镰刀菌。贝莱斯芽孢杆菌BG-2对尖孢镰刀菌CH-3有较强的拮抗作用,致腐菌CH-3对甜瓜有致病性,拮抗菌BG-2能有效抑制甜瓜致腐菌尖孢镰刀菌CH-3孢子萌发和菌丝生长,且拮抗菌浓度越高对孢子萌发的抑制效果越好,在甜瓜采后贮藏及生物保鲜中具有潜在的应用价值。

关键词：甜瓜致腐菌拮抗菌分离鉴定

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重组大肠杆菌生产极端耐热木聚糖酶

过程工程学报 2004年第5期4卷 445-450页

作者：娄恺于安峰邢新会清华大学化工系生物化工研究所北京100084

将含有来自于嗜热网球菌(Dictyoglomusthermophilum)Rt46B.1编码极端耐热木聚糖酶基因xynB的表达载体pET?DBc转化大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21(DE3),获得重组菌***1,目的基因可表达出有活性且耐90oC的木聚糖酶.初步优化的***1发酵培养基的组成为(g/L):葡萄糖50,NH4Cl3,MgSO40.5,CaCl20.6,Na2HPO4?7H2O12.8,KH2PO43.0,NaCl0.5.重组菌***1木聚糖酶的耐热特性有利于木聚糖酶的下游回收和提取.

关键词：极端耐热木聚糖酶大肠杆菌基因工程发酵

高产β-葡聚糖酶里氏木霉的诱变选育、酶学性质及体外模拟消化研究

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食品与发酵工业 2023年第12期49卷 153-159页

作者：王娜林青赵余张敏琴娄恺李莉袁华伟霍向东新疆大学生命科学与技术学院新疆乌鲁木齐830000 新疆农业科学院微生物应用研究所新疆特殊环境微生物实验室新疆乌鲁木齐830091 宜宾学院质量管理与检验检测学部固态发酵资源利用四川省重点实验室四川宜宾644000

β-葡聚糖酶可水解大麦等谷物中的葡聚糖,降低葡聚糖在单胃动物消化道内产生的抗营养作用。为获得高产β-葡聚糖酶菌株,采用常压室温等离子体(atmospheric and room temperature plasma,ARTP)诱变里氏木霉(Trichoderma reesei),经初筛... 详细信息

β-葡聚糖酶可水解大麦等谷物中的葡聚糖,降低葡聚糖在单胃动物消化道内产生的抗营养作用。为获得高产β-葡聚糖酶菌株,采用常压室温等离子体(atmospheric and room temperature plasma,ARTP)诱变里氏木霉(Trichoderma reesei),经初筛、复筛、遗传稳定性及酶学特性表征,突变株ARTP-9较出发菌株β-葡聚糖酶活力提高54.38%,为43.75 U/mL,产酶能力稳定遗传,酶的最适反应温度及pH分别为50℃和6.0,耐受温度为40~80℃,pH 2.5~6.5时酶活力稳定,Fe^(2+)、Mg^(2+)对酶活力有促进作用,Fe^(3+)、Mn^(2+)、Zn^(2+)、Ca^(2+)、Cu^(2+)对酶活力有抑制作用。以β-葡聚糖为底物,该粗酶的K m值和V max值分别为1.59 mg/mL和6.99μmol/(mg·min)。体外模拟消化实验表明,ARTP-9固态发酵酶制剂在胃期4 h黏度最低,为2.23 mPa·s;肠期21 h还原糖为0.70 mg/mL,是空白的3.2倍,差异显著(P<0.05),其大麦粉体外消化率为48.17%,较空白提升9.02%,差异极显著(P<0.01)。研究结果表明ARTP诱变技术能够显著提高里氏木霉β-葡聚糖酶活力,为其工业化生产奠定基础。

关键词：里氏木霉 β-葡聚糖酶常压室温等离子体诱变酶学性质体外模拟消化

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酸奶菌群发酵糖蜜产复合有机酸化剂的研究

微生物学通报 2022年第6期49卷 2100-2110页

作者：李月林青王子涵娄恺祝长青霍向东新疆师范大学生命科学学院新疆乌鲁木齐830054 新疆农业科学院微生物应用研究所新疆特殊环境微生物实验室新疆乌鲁木齐830091 新疆大学生命科学与技术学院新疆乌鲁木齐830052

【背景】开发安全、有效、稳定、适口性好、对环境无危害的无抗饲料添加剂是我国畜牧业的重中之重,酸化剂作为功能性饲料添加剂在众多替抗产品中有较大的优势。【目的】通过酸奶菌群发酵甜菜糖蜜制备低成本乳酸型复合液态酸化剂。【方... 详细信息

【背景】开发安全、有效、稳定、适口性好、对环境无危害的无抗饲料添加剂是我国畜牧业的重中之重,酸化剂作为功能性饲料添加剂在众多替抗产品中有较大的优势。【目的】通过酸奶菌群发酵甜菜糖蜜制备低成本乳酸型复合液态酸化剂。【方法】以11种不同的新疆农牧民传统发酵酸奶菌群为出发菌,经MRS培养基富集乳酸菌群,选择产酸量高的菌群进行甜菜糖蜜发酵试验,并对菌群发酵时间、发酵条件、糖蜜浓度、氮源及中和剂进行优化。【结果】在糖蜜浓度为100 g/L、培养基未灭菌且37℃静置发酵48 h时,B2菌群发酵乳酸产量为34.52 g/L,总酸为83.42 g/L,加入中和剂Na_(2)CO_(3)后其乳酸产量达73.42 g/L,总酸达到169.37 g/L;B5菌群发酵乳酸产量可达61.12 g/L,总酸可达112.50 g/L,加入中和剂Ca(OH)_(2)后其乳酸产量达74.37 g/L,总酸为137.26 g/L。B2菌群发酵原液对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及产气荚膜杆菌均有较强的抑制作用;B5菌群发酵原液则对产气荚膜杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157和大肠杆菌STEC均有较强的抑制作用。【结论】富集新疆农家酸奶菌群,生料发酵甜菜糖蜜可低成本生产乳酸型液态酸化剂。

关键词：微生物菌群发酵甜菜糖蜜酸化剂