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绿色木霉固态发酵产纤维素酶的研究

绿色木霉固态发酵产纤维素酶的研究

作者：姜绪林江南大学

学位级别：硕士

纤维素是植物细胞壁的主要成分,广泛而大量地存在于自然界中,是地球上最为丰富的可再生的生物聚合物之一。从高效和环保的角度出发,纤维素被彻底分解而无污染的一条有效的途径便是利用纤维素酶的水解作用。纤维素酶的来源非常广泛,但除... 详细信息

纤维素是植物细胞壁的主要成分,广泛而大量地存在于自然界中,是地球上最为丰富的可再生的生物聚合物之一。从高效和环保的角度出发,纤维素被彻底分解而无污染的一条有效的途径便是利用纤维素酶的水解作用。纤维素酶的来源非常广泛,但除个别的研究目的外,利用微生物以外的生物生产纤维素酶缺乏现实意义,而采用微生物发酵法是最方便的方法。本论文以提高绿色木霉产纤维素酶的固态发酵水平为主要的研究目的,首先对固态发酵培养物中的丝状真菌生物量的测定方法进行了研究,确定了细胞壁中麦角固醇的提取工艺,建立了麦角固醇含量与菌丝体质量之间的线性关系。目前,有关纤维素酶的研究很多,但是各个单位的酶活测定方法和对酶活单位的定义各有不同,这给酶活大小的相互比较带来了困难。为此,我们在实验初期重新定义了酶活单位,并对纤维素酶的活性测定方法进行了优化,确定了适用于本菌株产生的纤维素酶活性测定的一种较优方案。为了充分的提取发酵结束后固体曲中的纤维素酶,研究了纤维素酶的浸提条件,发现一定质量的酶曲按15mL/g干曲加入蒸馏水,在40℃,80r/min下提取1.0h,其提取效果最好。由此得到的酶液,用饱和度为35%的硫酸铵溶液进行盐析,可以去除部分杂蛋白,并且酶活回收率在90%左右。在此基础上研究了粗酶液中纤维素酶对热和对酸碱度的稳定性,并确定了其最适的作用温度和作用pH值分别为60℃和pH5.0。还对常见的八种无机阳离子对纤维素酶活性的影响进行了研究。最后,通过对发酵工艺的营养条件和培养条件的优化,确立以一套较优的固态发酵工艺:250mL三角瓶,装固体料5.3g(其中已被利用两次的稻草粉5.0、豆饼粉0.3g),水料质量比2.2(其中,无机营养液的成分为:蔗糖2%、硫酸铵3%、乳糖0.6%、硫酸镁0.25%、吐温802%、自然pH),接种浓度为3×10个/mL的孢子悬浮液1mL,发酵温度前期控制为32℃,后期为30℃,静置培养6d。发酵工艺优化前后CMC酶活和FPA酶活分别提高了80.8%和88.9%。

关键词：绿色木霉纤维素酶固态发酵麦角固醇工艺优化

谷氨酸棒杆菌的氨基酸输送系统的存在、功能及其在氨基酸生产上的重要性

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无锡轻工大学学报（食品与生物技术） 2004年第3期23卷 105-110页

作者：张星元李秀敏杨毅姜绪林江南大学工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214036

主要介绍了谷氨酸棒杆菌(Corynebacteriumglutamicum)中各种氨基酸输送系统及其基因、底物、特性和在氨基酸生产上的应用.

关键词：输送蛋白谷氨酸棒杆菌氨基酸生产

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用于育种的结构类似物的计算机辅助选择

无锡轻工大学学报（食品与生物技术） 2003年第4期22卷 83-86,90页

作者：李秀敏姜绪林杨毅张星元江南大学工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214036

借助于计算机,对已成功地用于菌种筛选的一些结构类似物及它们对应的化合物的三维空间结构的相似性和使用效果,分别进行了测试和比较.介绍了使用ACDlabs软件包为菌种选育选用合适的结构类似物的方法.

关键词：育种结构类似物计算机辅助选择菌种筛选 ACD-labs软件包

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生物技术在食品检验中的应用

食品界 2023年第6期 96-98页

作者：姜绪林石河子大学

1.食品安全的基本概念食品安全关系着人们的身体健康,因此对其进行风险分析非常重要。相关人员通过食品安全风险分析能够明确食品感染源和感染方式,对食物链潜在的风险作出准确预测,从而采取有效的措施。食品风险分析是风险分析中的主... 详细信息

1.食品安全的基本概念食品安全关系着人们的身体健康,因此对其进行风险分析非常重要。相关人员通过食品安全风险分析能够明确食品感染源和感染方式,对食物链潜在的风险作出准确预测,从而采取有效的措施。食品风险分析是风险分析中的主要内容。需要注意的是,风险评估应当与毒理学、微生物学等相关专业进行结合。

关键词：食品安全食品检验感染方式感染源风险分析风险评估毒理学有效的措施

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绿色木霉固态发酵纤维素酶生物量的测定及发酵培养基的初步优化

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食品与生物技术学报 2005年第3期24卷 101-105页

作者：姜绪林孙瑶杨毅杜大庆张星元江南大学工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214036

为了测定绿色木霉固态发酵纤维素酶的生物量,采用紫外分光检测固态发酵过程中麦角固醇的量.确定了其最佳提取工艺:在75℃恒温水浴中反应0.5h,用乙醚萃取,乙醇定容,紫外282nm检测.在此基础上对绿色木霉固态发酵的培养基进行了初步的优化... 详细信息

为了测定绿色木霉固态发酵纤维素酶的生物量,采用紫外分光检测固态发酵过程中麦角固醇的量.确定了其最佳提取工艺:在75℃恒温水浴中反应0.5h,用乙醚萃取,乙醇定容,紫外282nm检测.在此基础上对绿色木霉固态发酵的培养基进行了初步的优化,并得到了最佳的培养基组合:碳源为蔗糖,无机氮源为(NH4)2SO4,水料质量比为2.2,pH为5.5.用该培养基,CMC酶活和滤纸酶活分别比优化前提高了21.0%和44.1%.

关键词：绿色木霉固态发酵纤维素酶生物量麦角固醇

生物素和VB_1在谷氨酸棒杆菌过量合成缬氨酸中的作用

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食品与生物技术学报 2005年第4期24卷 57-60,65页

作者：杨毅章志兰姜绪林杜大庆张星元江南大学工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214036

通过对谷氨酸棒杆菌突变株AATV341进行生物素和VB1添加量的实验,探讨了生物素和VB1添加量对该菌株菌体质量及缬氨酸产量的影响;同时根据对AATV341进行的胞内外某些特定氨基酸和有机酸检测,研究了这两种维生素对碳架代谢流的分布,尤其是... 详细信息

通过对谷氨酸棒杆菌突变株AATV341进行生物素和VB1添加量的实验,探讨了生物素和VB1添加量对该菌株菌体质量及缬氨酸产量的影响;同时根据对AATV341进行的胞内外某些特定氨基酸和有机酸检测,研究了这两种维生素对碳架代谢流的分布,尤其是对丙酮酸节点处的代谢流量分布的影响.结果表明,生物素添加量在40μg/L时,菌体质量和缬氨酸在胞外的累积明显提高,谷氨酸在胞外累积降低;VB1的适量添加,可提高缬氨酸在胞外的累积,降低发酵液中乙酸和草酰乙酸的含量.

关键词：缬氨酸谷氨酸棒杆菌生物素维生素B1 碳代谢流草酰乙酸乙酸

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L-缬氨酸产生菌的选育及其代谢流分析

生物技术 2003年第6期13卷 19-21页

作者：李秀敏杨毅姜绪林张星元江南大学工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214036

以谷氨酸棒杆菌 (Corynebacteriumglutamicum)AS1.4 95 (Leu- )为出发菌株 ,通过多次亚硝基胍 (NTG)诱变 ,给AS1.4 95 (Leu- )依次叠加L -AAHss,2 -TAr,Vd- 的遗传标记 ,得到突变株AATV341(Leu- ,L -AAHss,2 -TAr,Vd- ) ,可在 8%的葡萄糖培养基积累L-缬氨酸 2 4 .5g L ,比出发菌株提高了 5 .13倍。同时运用代谢流量分析理论 ,测定出发菌株AS1.4 95及其突变株AATV341在L -缬氨酸合成阶段的代谢流量 ,并初步进行比较和分析 ,发现遗传标记的引入使流量分配发生了重大变化 ,流量分配朝着有利于L -缬氨酸合成的方向改变。

关键词： L-缬氨酸产生菌选育代谢流分析谷氨酸棒杆菌亚硝基胍诱变

基于局部椭圆变形的长输管道内检测的实践应用

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腐蚀与防护 2024年第4期45卷 75-80页

作者：姜绪彪惠州市大亚湾华德石化有限公司惠州516081

论述了基于局部椭圆变形的长输管道,在无法实施局部换管的特定条件下如何实施内检测工作的应用实践。通过对漏磁检测设备的连接臂、皮碗法兰和探头进行改造,提升了检测设备在3D(内径)弯管处的通过能力,实现了不发生卡球事故的安全目标... 详细信息

论述了基于局部椭圆变形的长输管道,在无法实施局部换管的特定条件下如何实施内检测工作的应用实践。通过对漏磁检测设备的连接臂、皮碗法兰和探头进行改造,提升了检测设备在3D(内径)弯管处的通过能力,实现了不发生卡球事故的安全目标。通过对现场实测数据和内检测报告数据的分析比对,验证了内检测数据量化精度达到Rosen公司标准。为今后在长输管道局部椭圆变形及其他变形的特定条件下,实施内检测工作积累了实践经验,为类似管道的内检测、技术管理和安全运营提供了一定的借鉴作用。

关键词：长输管道椭圆度内检测几何变形漏磁开挖验证

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重组人鼻病毒3C融合蛋白酶的安全性研究

过程工程学报 2023年第9期23卷 1333-1340页

作者：刘玉莹伍树明姜绪林银飞沈迩萃张贵锋张红彩张海江刘永江北京康乐卫士生物技术股份有限公司北京100176 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京100190 中国科学院大学化学工程学院北京100049

为了评价重组人鼻病毒3C融合蛋白酶(GST-3C)的安全性,本工作通过单次给药毒性试验和免疫毒性试验对GST-3C的毒性进行了研究。设置一个给药组,准备雌雄ICR小鼠各10只,采用最大给药量法,分别尾静脉注射GST-3C,单次给药最大给药剂量为25.25... 详细信息

为了评价重组人鼻病毒3C融合蛋白酶(GST-3C)的安全性,本工作通过单次给药毒性试验和免疫毒性试验对GST-3C的毒性进行了研究。设置一个给药组,准备雌雄ICR小鼠各10只,采用最大给药量法,分别尾静脉注射GST-3C,单次给药最大给药剂量为25.25 mg/kg;实验另设一个生理盐水对照组。给药一次,观察ICR小鼠的中毒症状、中毒程度、性质、恢复情况和死亡等,并在观察期结束对动物及时进行解剖,观察GST-3C对小鼠脏器的影响。对免疫毒性进行试验,50只小鼠随机分为5组(溶剂对照组、环磷酰胺阳性对照组、含佐剂GST-3C低剂量组、含佐剂GST-3C高剂量组和不含佐剂GST-3C对照组),通过迟发型超敏反应方法,计算脾指数、胸腺指数和肿胀度,观察GST-3C对迟发超敏反应的影响;40只小鼠随机分为4组(溶剂对照组、含佐剂GST-3C低剂量组、含佐剂GST-3C高剂量组和不含佐剂GST-3C对照组),通过溶血空斑试验方法,对溶血空斑计数,评价其对小鼠体液免疫功能影响。单次给药毒性试验结果表明,和生理盐水对照组相比,实验组小鼠体重差异并不明显,给药组动物脏器均未发现异常表现情况。在本次试验条件下,ICR小鼠静脉注射GST-3C单次给药的最大耐受剂量(MTD)大于25.25 mg/kg。免疫毒性试验结果表明,给药期间,与溶剂对照组比较,GST-3C给药各组动物体重未见显著降低,动物笼旁观察未见与给药相关的异常变化,迟发超敏试验和溶血空斑试验结果分别显示GST-3C对动物的细胞免疫功能和体液免疫功能均无抑制作用,为评价GST-3C的安全性提供了依据。

关键词：重组人鼻病毒3C融合蛋白酶单次给药毒性试验免疫毒性试验安全性