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盐酸石蒜碱对TPC-1细胞增殖和周期的影响

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中国病理生理杂志 2022年第2期38卷 292-302页

作者：黄霜林琳袁琳张峰源姜旭淦陈盛霞江苏大学医学院江苏镇江212013

目的:探讨盐酸石蒜碱(LH)对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖和周期的影响及其机制。方法:体外培养TPC-1细胞,用不同浓度(1.25、2.5、5、10、20、40、60、80和100μmol/L)的LH处理TPC-1细胞48 h,CCK-8法检测LH作用TPC-1细胞的IC;。参照IC_(5... 详细信息

目的:探讨盐酸石蒜碱(LH)对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖和周期的影响及其机制。方法:体外培养TPC-1细胞,用不同浓度(1.25、2.5、5、10、20、40、60、80和100μmol/L)的LH处理TPC-1细胞48 h,CCK-8法检测LH作用TPC-1细胞的IC;。参照IC_(50),将对数生长期TPC-1细胞随机分为7组:空白对照(control)组、溶剂对照(DMSO)组、1μmol/L LH组、2μmol/L LH组、4μmol/L LH组、NAC(3 mmol/L)组和LH(4μmol/L)+NAC(3 mmol/L)组。用CCK-8法、平板集落、EdU实验检测LH对细胞增殖的影响;透射电子显微镜观察细胞线粒体超微结构;流式细胞术检测细胞周期、活性氧(ROS)水平及线粒体膜电位变化;Western blot法检测MAPK家族蛋白(p38 MAPK、ERK1/2、JNK、p-p38 MAPK、p-ERK1/2和p-JNK)的水平;免疫荧光检测p-p38 MAPK、p-JNK和p-ERK1/2在细胞内的定位。结果:(1)LH抑制TPC-1细胞增殖,抑制率与LH浓度及作用时间呈正比,LH作用48 h的IC;为2.314μmol/L;(2)4μmol/L LH处理后TPC-1细胞线粒体超微结构发生变化,LH呈浓度依赖性地使线粒体膜电位去极化(P<0.05);(3)LH处理后TPC-1细胞S期比例显著升高,G;/G;期比例显著降低(P<0.05);(4)LH处理后的TPC-1细胞ROS水平相较对照组显著升高(P<0.01);(5)LH处理后TPC-1细胞p38 MAPK、ERK1/2、JNK、p-p38 MAPK、p-ERK1/2和p-JNK蛋白水平均显著升高,尤以磷酸化蛋白升高显著,具有一定的药物浓度依赖性,且p-p38 MAPK和pERK1/2在TPC-1细胞中都出现不同程度的入核现象;(6)NAC能抑制部分MAPK通路的激活。结论:LH在体外能抑制TPC-1细胞的增殖,诱导细胞线粒体超微结构受损、线粒体膜电位去极化、细胞S期阻滞和细胞ROS水平升高,其作用机制可能是通过ROS累积诱导激活部分MAPK通路而发挥作用。

关键词：盐酸石蒜碱 TPC-1细胞细胞增殖细胞周期活性氧

阴道毛滴虫巨噬细胞迁移抑制因子对THP-1巨噬细胞的作用

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中国血吸虫病防治杂志 2023年第1期35卷 29-37页

作者：林琳黄霜张峰源李家政姜旭淦陈盛霞江苏大学医学院检验系江苏镇江212013 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所(国家热带病研究中心)、国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室、WHO热带病合作中心、国家级热带病国际联合研究中心上海200025

目的探讨阴道毛滴虫分泌的巨噬细胞迁移抑制因子(TvMIF)对THP-1巨噬细胞的作用。方法原核表达重组TvMIF蛋白并纯化,鉴定后去内毒素。采用不同浓度(0、1、5、10、50 ng/mL和100 ng/mL)重组TvMIF蛋白作用于THP-1巨噬细胞,用细胞计数试剂盒... 详细信息

目的探讨阴道毛滴虫分泌的巨噬细胞迁移抑制因子(TvMIF)对THP-1巨噬细胞的作用。方法原核表达重组TvMIF蛋白并纯化,鉴定后去内毒素。采用不同浓度(0、1、5、10、50 ng/mL和100 ng/mL)重组TvMIF蛋白作用于THP-1巨噬细胞,用细胞计数试剂盒(cell counting kit,CCK)-8检测重组TvMIF蛋白对THP-1巨噬细胞的毒性,采用流式细胞术检测细胞凋亡和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,采用实时荧光定量PCR技术(real-time fluorescence quantitative PCR,qPCR)检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptorprotein 3,NLRP3)、caspase-1、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-18mRNA表达水平变化,采用Western blotting技术检测THP-1巨噬细胞中caspase1、NLRP3、消化道皮肤素D(gasdermin D,GSDMD)及GSDMD蛋白氨基端裂解片段(gasdermin D N-terminal,GSDMD-NT)、pro-IL-1β蛋白表达水平变化。结果成功表达并纯化获得分子量为15.5 kDa的重组TvMIF蛋白。内毒素检测结果显示,已去除重组TvMIF蛋白的内毒素(浓度<0.1 EU/mL),可用于蛋白功能研究。流式细胞术检测结果显示,当重组TvMIF蛋白浓度≤10 ng/mL时可促进THP-1巨噬细胞凋亡,当TvMIF浓度为5 ng/mL时凋亡现象最为明显,当重组TvMIF蛋白浓度为50、100 ng/mL时可抑制THP-1巨噬细胞凋亡。当TvMIF蛋白浓度为1 ng/mL时,ROS含量明显升高。qPCR检测结果显示,1 ng/mL重组TvMIF蛋白作用THP-1巨噬细胞8 h后,caspase-1、NLRP3、IL-18和IL-1βmRNA水平均显著上升。Western blotting检测结果显示,1 ng/mL重组TvMIF蛋白刺激THP-1巨噬细胞后,caspase-1和NLRP3蛋白表达量显著上升,pro-IL-1β、GSDMD和GSDMD-NT蛋白表达量显著增加;用NLRP3炎症小体特异性抑制剂MCC950预处理后,GSDMD和GSDMD-NT蛋白表达水平显著下降。结论高浓度重组TvMIF蛋白抑制THP-1巨噬细胞凋亡;低浓度重组TvMIF蛋白激活NLRP3炎症小体,促进THP-1巨噬细胞焦亡。

关键词：阴道毛滴虫巨噬细胞迁移抑制因子 THP-1巨噬细胞 NLRP3炎症小体细胞凋亡细胞焦亡

PKD通过ERK1/2信号通路调控单核细胞增生李斯特菌感染Caco-2细胞

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中国人兽共患病学报 2023年第10期39卷 927-932页

作者：李家政张峰源许晶晶姜旭淦陈盛霞江苏大学医学院检验医学系镇江212013 南京中医药大学附属苏州市中医医院苏州215000

目的探讨蛋白激酶D(PKD)在单核细胞增生李斯特菌(Lm)感染Caco-2细胞中的作用及其机制。方法建立Lm感染Caco-2细胞模型,qRT-PCR检测PKD1、PKD2和PKD3 mRNA表达水平。加入PKD抑制剂CID755673后,Lm感染Caco-2细胞,CCK-8法测定细胞存活率,We... 详细信息

目的探讨蛋白激酶D(PKD)在单核细胞增生李斯特菌(Lm)感染Caco-2细胞中的作用及其机制。方法建立Lm感染Caco-2细胞模型,qRT-PCR检测PKD1、PKD2和PKD3 mRNA表达水平。加入PKD抑制剂CID755673后,Lm感染Caco-2细胞,CCK-8法测定细胞存活率,Western blot法检测细胞炎症相关蛋白和ERK1/2信号通路蛋白的表达。结果Lm感染促进Caco-2细胞表达PKD;与Lm组相比,抑制PKD可明显降低Caco-2细胞存活率(F=4.831,P<0.05),明显抑制炎症相关蛋白NLRP3、p-IκBα(F_(NLRP3)=35.02,F_(p-IκBα)=45.19,均P<0.01)和ERK1/2蛋白(F=326.9,P<0.001)的表达。结论PKD-ERK1/2信号通路在Lm感染Caco-2细胞中发挥重要调控作用。

关键词：单核细胞增生李斯特菌 Caco-2 蛋白激酶D ERK1/2信号通路炎症

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糖化血红蛋白的研究现状与进展

临床检验杂志 2011年第8期29卷 605-608页

作者：涂国华姜旭淦江苏大学基础医学与医学技术学院江苏镇江212013

糖化血红蛋白（glycated hemoglobin,GHb）是红细胞内血红蛋白与糖类物质（主要是葡萄糖）通过非酶促作用形成的化合物。2007年中国2型糖尿病（T2DM）防治指南中已将GHb作为血糖控制状态的指标[1]。本文对GHb形成的分子基础、检测方法... 详细信息

糖化血红蛋白（glycated hemoglobin,GHb）是红细胞内血红蛋白与糖类物质（主要是葡萄糖）通过非酶促作用形成的化合物。2007年中国2型糖尿病（T2DM）防治指南中已将GHb作为血糖控制状态的指标[1]。本文对GHb形成的分子基础、检测方法的研究现状与标准化、测定影响因素和在糖尿病（diabetes mellitus,DM）诊疗中的应用进行综述。

关键词：糖化血红蛋白糖尿病标准化

新形势下临床生物化学检验课程混合式教学模式的实践与探索

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现代职业教育 2022年第31期 118-120页

作者：梁照锋马洁姜旭淦王佳纪成钱晖江苏大学医学院

近年来“互联网+教育”日益广泛地融入教学，线上线下混合式教学已逐渐成为医学检验技术不可或缺的教学模式。结合医学检验专业和临床生物化学检验课程的特点，充分利用“互联网+教育”的信息化技术，不断深化临床生物化学检验教学改革... 详细信息

近年来“互联网+教育”日益广泛地融入教学，线上线下混合式教学已逐渐成为医学检验技术不可或缺的教学模式。结合医学检验专业和临床生物化学检验课程的特点，充分利用“互联网+教育”的信息化技术，不断深化临床生物化学检验教学改革，探索和构建“以人为本”和“以学生为中心”的线上线下混合式教学模式，从而调动学生学习的积极性，提升学习效果，以期培养更加胜任岗位的高素质医学检验人才。

关键词：新形势医学检验临床生物化学检验混合式教学教学改革

单增李斯特菌感染抑制HepG2细胞RhoA表达并促进其凋亡

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细胞与分子免疫学杂志 2016年第5期32卷 615-618,624页

作者：吴亮韩新烨刘原苏丹华付涛姜旭淦陈盛霞许化溪江苏大学医学院江苏镇江212013

目的探讨单增李斯特菌(Lm)调控Hep G2细胞的凋亡能力以及对Rho家族Rho A蛋白表达的影响。方法常规方法培养Hep G2细胞,分别以感染复数(MOI)=10和MOI=100接种Lm菌EGD株,共培养1 h和20 h后收集培养物。异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化... 详细信息

目的探讨单增李斯特菌(Lm)调控Hep G2细胞的凋亡能力以及对Rho家族Rho A蛋白表达的影响。方法常规方法培养Hep G2细胞,分别以感染复数(MOI)=10和MOI=100接种Lm菌EGD株,共培养1 h和20 h后收集培养物。异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率,反转录PCR检测Hep G2细胞Rho A和caspase 3编码基因表达,分光光度法检测Hep G2细胞活化的caspase 3水平,Western blot法检测Hep G2细胞Rho A蛋白表达。结果 Lm的侵袭可促进Hep G2细胞凋亡,下调Hep G2细胞Rho A编码基因和蛋白表达,并上调caspase 3编码基因表达。结论 Lm感染促进宿主细胞凋亡,抑制宿主细胞Rho A表达。

关键词：单增李斯特菌 Rho A 细胞骨架凋亡

口服Ⅱ型胶原蛋白对血清抗体和派氏集结细胞因子表达的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第6期27卷 621-625页

作者：姜旭淦陈盛霞吴亮许化溪江苏大学基础医学与医学技术学院江苏镇江212013

目的:探讨口服Ⅱ型胶原蛋白(CⅡ)对派[伊尔]氏集结(PP结)的形态学、细胞因子表达水平和血清特异性IgG、IgA、IgM含量的影响。方法:连续10 d给小鼠口服不同剂量的CⅡ,第11天和第21天用佐剂或CⅡ进行免疫,分别于第11天、第21天和第31天采... 详细信息

目的:探讨口服Ⅱ型胶原蛋白(CⅡ)对派[伊尔]氏集结(PP结)的形态学、细胞因子表达水平和血清特异性IgG、IgA、IgM含量的影响。方法:连续10 d给小鼠口服不同剂量的CⅡ,第11天和第21天用佐剂或CⅡ进行免疫,分别于第11天、第21天和第31天采集血液和PP结。PP结经HE染色后,镜下观察其增生的情况。用荧光实时定量RT-PCR法,检测PP结中IL-17、TNF-α、IFN-γ和TGF-β1 mRNA的水平。采用ELISA法检测血清抗CⅡIgG、IgA、IgM的水平。结果:口服CⅡ10 d后,PP结增生活跃,高剂量组可见清晰的帽状结构;血清中出现IgA,未见IgG和IgM水平增加;IL-17、TNF-α、IFN-γmRNA的表达受到抑制。以CⅡ初次免疫后,实验组IgA、IgM、IL-17的水平均低于对照组(P<0.05或P<0.01),TGF-β1的水平显著增加(P<0.05)。以CⅡ加强免疫后,高剂量组IgA的水平显著增加(P<0.05),实验组IgM的水平仍受到抑制(P<0.05或P<0.01),TGF-β1的水平高于对照组(P<0.05)。以佐剂免疫时PP结中细胞因子的表达与CⅡ免疫时相似,未见血清抗CⅡIgG、IgA、IgM水平的变化。结论:口服CⅡ能使血清中产生特异性IgA,抑制PP结IL-17、TNF-α、IFN-γ的基因表达,对CⅡ免疫后IgA、IgM的产生和IL-17 mRNA的表达具有一定的抑制作用。以上结果表明,血清特异性抗体的水平和细胞因子表达的变化在口服CⅡ诱导免疫耐受对类风湿性关节炎的治疗作用方面发挥着重要的作用。

关键词：口服耐受派[伊尔]氏集结细胞因子 Ⅱ型胶原蛋白

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谷氨酰内切酶的原核表达及生物化学特性分析

临床检验杂志 2012年第4期30卷 274-277页

作者：李礼吴亮陈盛霞姜旭淦江苏大学基础医学与医学技术学院江苏镇江212013

目的原核表达谷氨酰内切酶,评价其生物化学特性。方法 PQE60Glu△Cmut5质粒转化大肠埃希菌M15,经异丙基β-D-硫代半乳糖(IPTG)诱导、Ni-NTA亲和层析等步骤获得重组谷氨酰内切酶。以偶氮酪蛋白为底物测定其酶活性,分析底物浓度、温度、p... 详细信息

目的原核表达谷氨酰内切酶,评价其生物化学特性。方法 PQE60Glu△Cmut5质粒转化大肠埃希菌M15,经异丙基β-D-硫代半乳糖(IPTG)诱导、Ni-NTA亲和层析等步骤获得重组谷氨酰内切酶。以偶氮酪蛋白为底物测定其酶活性,分析底物浓度、温度、pH、金属离子和EDTA对酶活性的影响。采用SDS-PAGE电泳和质谱研究谷氨酰内切酶对Hb的酶解作用。结果重组谷氨酰内切酶可以在M15菌中高效表达,并具有较高的酶活性。SDS-PAGE分析显示其相对分子质量约33 000。谷氨酰内切酶的Km值为0.26 mmol/L,最适反应温度为55℃,最适pH为8.0,Ca2+和Mg2+能激活酶活性,Fe2+、Zn2+、Mn2+和EDTA则对酶活性有抑制作用。SDS-PAGE和质谱分析显示重组谷氨酰内切酶对Hb有特异性水解作用。结论谷氨酰内切酶在大肠埃希菌M15中能获得高效表达,具有特有的生物化学特性和严格的底物水解特异性。

关键词：谷氨酰内切酶原核表达偶氮酪蛋白

Tet-on慢病毒系统表达弓形虫ROP18的研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2015年第1期33卷 25-28页

作者：王晓朱君吴亮吴腊梅刘原苏丹华丁宁赵康容姜旭淦陈盛霞曹建平江苏大学医学院镇江212013 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心上海200025

目的用Tet-on慢病毒载体系统构建稳定表达弓形虫棒状体蛋白18(ROP18)的293T细胞株。方法PCR扩增ROP18基因序列插入慢病毒载体p LVCT-t TR-KRAB中,构建带有ROP18活性片段的慢病毒载体p LVCT-t TRKRAB-ROP18。经鉴定后将该重组载体(6μg)... 详细信息

目的用Tet-on慢病毒载体系统构建稳定表达弓形虫棒状体蛋白18(ROP18)的293T细胞株。方法PCR扩增ROP18基因序列插入慢病毒载体p LVCT-t TR-KRAB中,构建带有ROP18活性片段的慢病毒载体p LVCT-t TRKRAB-ROP18。经鉴定后将该重组载体(6μg)与辅助质粒ps PAX2(4μg)和p MD2.G(2μg)共同转染293T细胞,荧光显微镜下观察细胞荧光。于转染后48和72 h收集含有慢病毒颗粒上清液,感染293T细胞。以1μg/ml强力霉素(DOX)诱导293T细胞表达ROP18,荧光显微镜下观察细胞荧光,RT-PCR法检测293T细胞中的ROP18表达情况。结果 PCR扩增rop18片段为960 bp,与预期大小一致。经PCR和酶切鉴定重组慢病素载体构建成功。转染48 h后,293T细胞于荧光显微镜下可见绿色荧光。经DOX诱导24 h即可观察到293T细胞中明亮绿色荧光。RT-PCR检测结果显示,293T细胞ROP18可产生960 bp特异条带,与预期结果一致。结论采用Tet-on慢病毒载体系统构建了稳定表达弓形虫ROP18的293T细胞株。

关键词：刚地弓形虫棒状体蛋白18 慢病毒四环素诱导调控表达系统