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重组S-腺苷甲硫氨酸合成酶DS16在毕赤酵母中的表达及其酶学性质研究

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重组S-腺苷甲硫氨酸合成酶DS16在毕赤酵母中的表达及其酶学性质研...

作者：姚高峰华东理工大学

学位级别：硕士

S-腺苷甲硫氨酸合成酶（EC 2.***.1.6, Methionine adenosyltransferase, MAT）催化底物ATP和甲硫氨酸合成S-腺苷甲硫氨酸（SAM）,是目前已知生物体内获得SAM的唯一途径。本实验室前期采用DNAShuffling技术对SAM合成酶进行体外进化,经筛... 详细信息

S-腺苷甲硫氨酸合成酶（EC 2.***.1.6, Methionine adenosyltransferase, MAT）催化底物ATP和甲硫氨酸合成S-腺苷甲硫氨酸（SAM）,是目前已知生物体内获得SAM的唯一途径。本实验室前期采用DNAShuffling技术对SAM合成酶进行体外进化,经筛选获得了一编码高酶活SAM合成酶的基因ds16,有效提高了重组Pichia pastoris胞内SAM合成。前期的实验表明dsl6与Saccharomyces cerevisiae来源的sam2基因同源性达99%,但在P. pastoris胞内表达后,DS16活性显著高于SAM2。为了研究重组酶DS16的特性从而揭示其酶活提高的机理,本课题通过围绕DS16在P. pastoris中的高效表达、分离纯化以及DS16的酶学性质开展研究,并对设计信号肽序列促进外源蛋白在P. pastoris中的分泌表达进行了尝试。首先,为了提高蛋白表达水平以及简化分离纯化过程,分别采用胞内、外两种表达策略,构建了DS16蛋白N端或C端带有组氨酸亲和标签（His-tag）的P. pastoris重组菌,并探讨其最佳表达方式。对各重组菌胞内、外蛋白及酶活检测的结果表明,DS16分泌表达菌株分泌水平普遍较低,胞内酶活达到胞外酶活的两倍以上,难以用于分离纯化;在DS16的N端或C端加上His-tag后,SAM合成酶活性下降为DS16的1/3左右。利用胞内表达重组菌G/pPIC3.5Kds16高效表达DS16,采用DEAE离子交换、苯基疏水层析两步层析,成功从细胞裂解液中分离纯化DS16,经超滤脱盐浓缩后,最终纯度达93%,比活达1.828 U/mg。对DS16进行了酶学性质的考察,发现其热稳定性大大高于S. cerevisiae来源的SAM2,推测是其表观酶活提高的主要原因。针对a-MF前导肽对DS16分泌效率低下的缺陷,利用已公布的P. pastoris全基因组序列,设计内源性的信号肽序列,尝试外源蛋白的分泌表达。以a-MF前导肽为对照,采用LacZ、egfp和ds16三个外源基因对内源性信号肽PIPA00211S的分泌性能进行考察。结果表明PIPA00211S的分泌效果不理想,但不同外源基因的分泌效果各不相同,并且不同程度影响了蛋白的表达水平。内源性信号肽促进蛋白分泌有待进一步的优化设计和研究。

关键词： S-腺苷甲硫氨酸合成酶毕赤酵母蛋白分离纯化酶学性质信号肽

试论《庄子》的审丑之维——以庄子笔下的丑怪形象为例

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试论《庄子》的审丑之维——以庄子笔下的丑怪形象为例

作者：姚高峰苏州大学

学位级别：硕士

庄子是一个奇人,其书也是一本奇书。对这奇人,历史上除《史记》有零星的记载外,他的身世几乎不可考。然而这奇书,却因历代文人的喜爱而保留了下来。《庄子》之奇,一个重要的原因,在笔者看来是它包含了大量的审丑经验。这审丑经验与现实... 详细信息

庄子是一个奇人,其书也是一本奇书。对这奇人,历史上除《史记》有零星的记载外,他的身世几乎不可考。然而这奇书,却因历代文人的喜爱而保留了下来。《庄子》之奇,一个重要的原因,在笔者看来是它包含了大量的审丑经验。这审丑经验与现实生活存在着一定的张力,因为无论社会还是人生都有着审美化的倾向,这也是人性使然。我们认为,作为感性学的美学(Aesthetics)应该不仅包含对审美活动的研究,而且也不能忽视审丑活动的作用。甚至,可以说,审丑活动的存在才能证明Aesthetics的成熟。作为一个方外之人,庄子有非常人所拥有的智慧与胆略,他的美学趣味当然也与众不同。因此,庄子笔下的文字就不免具有了“不经”的色彩:让丑人和怪物登上了舞台,代表庄子来言说大道。本文从《庄子》世界的审丑之维入手,希望弥补庄子美学(Aesthetics)研究上的不足。首先,通过对庄子的语言、人物以及内含的大道进行分析,可看出《庄子》世界是一个丑的世界。在这丑的世界里,不仅能见到一个“逍遥”的庄子,更多的则是一个“不得已”的庄子。他审丑是因为其对人生、社会、大道的深刻认识,所以庄子的审丑之维具有三个特点:理智的审丑、大胆的审丑、美丑兼审。最后,笔者把焦点放在丑人和怪物身上,通过分析我们可以看到庄子对德性的追求(即对得道真人的呼唤)和其独特的生死观(即一种逍遥的生活方式)以及一种新的艺术感(即丑感)。笔者希望在受到庄子智慧的洗礼后,可以增强对生活的理解。

关键词：《庄子》丑人怪物审丑

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论刘庆邦小说的人物系列

论刘庆邦小说的人物系列

作者：姚高峰安徽大学

学位级别：硕士

作家刘庆邦在其一百多篇中短篇小说和三部长篇小说中,成功地塑造了三类人物形象。一类是在淳朴的农村环境中生活的少男少女和坚守传统文化的老人们,少男少女在艰难的自然环境和社会环境中仍然对美、生命充满热爱,他们在生活中坚强地成长... 详细信息

作家刘庆邦在其一百多篇中短篇小说和三部长篇小说中,成功地塑造了三类人物形象。一类是在淳朴的农村环境中生活的少男少女和坚守传统文化的老人们,少男少女在艰难的自然环境和社会环境中仍然对美、生命充满热爱,他们在生活中坚强地成长,与家人一起分担苦难,但是特殊的家庭背景和身世,使其对朦胧的爱情充满了向往和敏感;老人们不愿离开自己的土地和房屋,更不愿放弃自己坚守的文化传统。另一类是在市场经济中人性发生变异的人们,他们在经济地位上升、社会地位提高的以后禁不住商品经济大潮的诱惑,不再有农村人淳朴的性格,而是变得市侩、势利,更有一些女性为了金钱,放弃了传统的道德情操和底线,背叛自己的丈夫和家庭,甚至出卖自己的肉体。男性在商品经济中也未能幸免,他们或者毒杀自己的亲生儿子或者暴富以后与自己的妻子离婚。再一类是在充满危险的煤矿中工作的矿工们,这里,一方面是井下工作的残酷,随时都有生命的危险;另一方面是矿工之间的尔虞我诈,浸透着人性的黑暗。在黑暗之中还有一线希望和光亮,一些矿工和下层女性保持着对美好的爱情、婚姻的坚守和对家庭的维护。通过这三类人物形象的分析,刘庆邦赞扬了坚持传统文化和文明的淳朴的少男少女和坚韧的老人们,批判了在市场经济大潮中发生人性蜕变的人们。

关键词：生命呈现文化坚守人性变异煤矿血泪

优化甲硫氨酸补料策略提高重组毕赤酵母G12-CBS合成S-腺苷甲硫氨酸

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华东理工大学学报（自然科学版） 2012年第5期38卷 587-593页

作者：武晓乐秦秀林姚高峰储炬钱江潮华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237

重组毕赤酵母G12-CBS经代谢工程改造,可高效表达重组S-腺苷甲硫氨酸(SAM)合成酶,并弱化了SAM转化途径的关键酶β-胱硫醚合成酶,是一株优良的SAM高产菌。为了利用G12-CBS高效合成SAM,需对前体(甲硫氨酸)的补料策略进行优化。首先在摇瓶... 详细信息

重组毕赤酵母G12-CBS经代谢工程改造,可高效表达重组S-腺苷甲硫氨酸(SAM)合成酶,并弱化了SAM转化途径的关键酶β-胱硫醚合成酶,是一株优良的SAM高产菌。为了利用G12-CBS高效合成SAM,需对前体(甲硫氨酸)的补料策略进行优化。首先在摇瓶中考察了不同甲硫氨酸(L-Methionine,L-Met)添加量对于G12-CBS的影响,发现每24hL-Met补加量超过3mg/mL时,会影响重组菌生长和SAM合成。在15L发酵罐中优化L-Met的补料速率,当外源补料速率为0.4g/(L·h)时SAM产量最高,分别比补料速率为0.2g/(L·h)和0.6g/(L·h)时提高22.2%和31.8%,达到13.01g/L,比出发菌最高产量提高54%。代谢物及酶活测定的结果表明,较低的L-Met补料速率(0.2g/(L·h))导致前体供应不足而影响SAM合成,过高的补料速率(0.6g/(L·h))可能会抑制三羧酸循环,并且影响氮源的摄取和利用,从而导致菌体生长和产物合成受到抑制。

关键词：毕赤酵母 S-腺苷甲硫氨酸甲硫氨酸

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语义环境中信息可信度计算方法研究

情报理论与实践 2012年第1期35卷 103-105,128页

作者：钟诚赵志峰姚高峰镇江船艇学院计算机教研室江苏镇江212003

模拟社会网络中人际交互过程,提出一种基于本体理论的计算信息可信度的方法。该方法从两个方面考虑信息可信度,一是信息所含内容本身的可信度;二是发布信息节点的可信度。同时考虑时间因素的影响以及对恶意节点的惩罚。分析和模拟实验表... 详细信息

模拟社会网络中人际交互过程,提出一种基于本体理论的计算信息可信度的方法。该方法从两个方面考虑信息可信度,一是信息所含内容本身的可信度;二是发布信息节点的可信度。同时考虑时间因素的影响以及对恶意节点的惩罚。分析和模拟实验表明,该方法具有比较好的可行性。

关键词：语义网本体信息可信度算法

椭圆空气孔矩形结构光子晶体光纤的高双折射及限制损耗分析

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光子学报 2014年第S1期43卷 50-53页

作者：盛勇陆驹姚高峰胡乐镇江船艇学院江苏镇江212013 江苏大学江苏镇江212013

提出了以包层为椭圆空气孔的矩形结构光子晶体光纤,采用有限元法分析了光子晶体光纤的双折射和损耗特性.研究表明:当光子晶体光纤中心缺失两个空气孔,即Λx=1.0μm,Λy=2.0μm时,在1.55μm处双折射可以达到1.98×10-2;在芯区引入小的椭... 详细信息

提出了以包层为椭圆空气孔的矩形结构光子晶体光纤,采用有限元法分析了光子晶体光纤的双折射和损耗特性.研究表明:当光子晶体光纤中心缺失两个空气孔,即Λx=1.0μm,Λy=2.0μm时,在1.55μm处双折射可以达到1.98×10-2;在芯区引入小的椭圆空气孔时,双折射与引入椭圆空气孔的大小、长短轴的比例和空气孔的位置有关;芯区引入空气孔后,使光模场发生了形变,同时减少了向包层的泄漏,其损耗相比未引入空气孔小;增加包层的层数,发现包层层数对光纤双折射和损耗几乎没有影响,当包层层数N>4时,损耗小于10-3量级.

关键词：双折射限制损耗光子晶体光纤有限元法

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军事医学心理学研究现状与发展构想

解放军医学杂志 2011年第12期36卷 1255-1258页

作者：张理义姚高峰解放军102医院全军心理疾病防治中心江苏常州213003

目的综述国内外、军内外医学心理学研究现状和发展动态,提出未来我军医学心理学研究发展构想。方法采用文献检索方法,检索复习近10年来国内外、军内外医学心理学在基础研究、学科建设、专业教学和服务部队等方面的主要文献,分析该学科... 详细信息

目的综述国内外、军内外医学心理学研究现状和发展动态,提出未来我军医学心理学研究发展构想。方法采用文献检索方法,检索复习近10年来国内外、军内外医学心理学在基础研究、学科建设、专业教学和服务部队等方面的主要文献,分析该学科取得的新进展和发展趋势。结果近10年来,医学心理学在生理心理学、心理测量、心理咨询与治疗等方面取得了长足进步。随着医学心理学的蓬勃发展,我军在心理学研究和人才培养方面也取得了丰硕成果,在官兵心理测量与选拔、军事应激的干预及应激后康复等方面取得了一系列成就。结论抓住机遇,加大专业人才培养力度,推进我军军人心健康、心理疾病病因学、非军事行动及战争性心理障碍的预防及治疗方案的研究,是我军医学心理学未来的研究方向。

关键词：心理学,医学创伤和损伤应激精神卫生军事人员

军队驾驶员心理承受力与特质应对方式的关系及其影响因素研究

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解放军医学杂志 2013年第7期38卷 597-600页

作者：张理义范惠民过伟赵娟涂德华陈春霞姚高峰解放军102医院全军心理疾病防治中心江苏常州213003 第二军医大学临床医学院精神卫生系上海200433 江苏大学临床医学院精神卫生系江苏镇江212013 马鞍山市人民医院精神科安徽马鞍山243000

目的探讨军队驾驶员的心理承受力与特质应对方式的关系及其影响因素。方法采用随机整群抽样法,抽取390名驾驶员官兵作为实验组,396名非驾驶员官兵作为对照组,以军人心理承受力量表及特质应对方式问卷进行评测,分析心理承受力与特质应对... 详细信息

目的探讨军队驾驶员的心理承受力与特质应对方式的关系及其影响因素。方法采用随机整群抽样法,抽取390名驾驶员官兵作为实验组,396名非驾驶员官兵作为对照组,以军人心理承受力量表及特质应对方式问卷进行评测,分析心理承受力与特质应对的关系及影响因素。采用SPSS 17.0软件进行描述性统计分析、独立样本t检验、相关分析及多元逐步回归分析等统计学分析。结果与对照组相比,实验组问题解决、意志力、自信心及总分较高(P<0.01或0.05);相关分析显示,心理承受力各因子均与积极特质应对方式呈正相关(P<0.01或0.05);与消极特质应对方式呈负相关(P<0.01);意志力与文化程度呈正相关(P<0.05)。多元逐步回归发现,积极应对(PC)、消极应对(NC)均进入以问题解决、意志力、人际交往、自信心及心理承受力总分为因变量的回归方程(P<0.01);NC进入以家庭支持为因变量的回归方程(P<0.01);文化程度进入以意志力为因变量的回归方程(P<0.01)。结论军队驾驶员的心理承受力较高,特质应对方式是影响驾驶员心理承受力的主要因素。文化程度可影响军队驾驶员的意志力。

关键词：心理承受力特质应对方式文化程度驾驶员

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表观遗传修饰与精神疾病的关系

中华行为医学与脑科学杂志 2017年第6期26卷 492-496页

作者：张理义姚高峰解放军第102医院全军心理疾病防治中心常州213003

精神疾病是一类遗传和环境因素共同作用所致的疾病，而表观遗传学是衔接环境暴露与遗传背景之间的桥梁。为探讨表观遗传修饰与精神疾病的关系特别是精神分裂症和抑郁症，于2017年3月在PubMed、ScienceDirect等多个数据库中进行检索，以... 详细信息

精神疾病是一类遗传和环境因素共同作用所致的疾病，而表观遗传学是衔接环境暴露与遗传背景之间的桥梁。为探讨表观遗传修饰与精神疾病的关系特别是精神分裂症和抑郁症，于2017年3月在PubMed、ScienceDirect等多个数据库中进行检索，以“DNA甲基化”、“组蛋白乙酰化”、“组蛋白甲基化”、“非编码RNA”、“抑郁症”、“精神分裂症”等检索词，用“DNA甲基化与抑郁症或精神分裂症”、“组蛋白乙酰化与抑郁症或精神分裂症”等检索式，通过文献追溯，收集国内外1997—2017年公开发表的相关文献67篇，经过筛选，最终保留41篇。文献分析显示，DNA甲基化、组蛋白乙酰化或甲基化和非编码RNA等表观遗传修饰与精神疾病（精神分裂症及抑郁症）的发生存在关联，可能在疾病发生、发展过程中扮演了重要的角色。而精神疾病表观遗传学的进一步深入研究，将为理解其分子病理机制以及探索基于该机制的有效治疗靶点带来启示。

关键词： DNA甲基化组蛋白乙酰化组蛋白甲基化非编码RNA 抑郁症精神分裂症