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正常核型急性髓系白血病患者NPM突变的检测及临床意义

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正常核型急性髓系白血病患者NPM突变的检测及临床意义

作者：姚金晓郑州大学

学位级别：硕士

背景与目的研究表明,大多数急性髓系白血病(AML)患者初诊时骨髓原始细胞至少隐藏着一种染色体变异。其中一些染色体变异,不仅是AML亚型的诊断标志,而且还是关于完全缓解率(CR)、复发风险及总生存率(OS)的预后指标。然而,相当一部分AML患... 详细信息

背景与目的研究表明,大多数急性髓系白血病(AML)患者初诊时骨髓原始细胞至少隐藏着一种染色体变异。其中一些染色体变异,不仅是AML亚型的诊断标志,而且还是关于完全缓解率(CR)、复发风险及总生存率(OS)的预后指标。然而,相当一部分AML患者(约40%-49%的成人和25%的儿童),通过传统的染色体分析没有发现可见的染色体异常。这部分正常核型AML(CN-AML)患者,是AML中占比例最多的亚型,通常归为预后中等组。这部分病人的预后有很大异质性,其5年生存率在不同的报告中自24%至42%不等,原因在于他们虽然没有可见的染色体异常,但基因水平可能存在不同的异常。人nucleophosmin(NPM)基因定位于5q35,全长约23 kb,含12个外显子。NPM主要定位在核仁颗粒区,也可通过核定位信号在细胞核与细胞质之间往返,参与核质间运输。国外研究发现NPM基因第12外显子突变是AML发生频率最高的一种分子遗传学改变,可出现在AML各亚型(M3除外)中,主要累及染色体核型正常的患者,发生率最高可达64%,并与疾病的发生、发展密切相关。NPM基因第12外显子的插入突变导致C-末端氨基酸残基改变,使核定位信号丢失,NPM蛋白由核仁区异常移位至胞质区。由于常规检测NPM突变的方法需PCR扩增与DNA测序先后进行,繁琐费时,为此我们参考国外报道,建立了一种简便易行的检测方法,采用免疫细胞化学法检测胞质异常定位的突变NPM蛋白,并用PCR产物测序方法,验证免疫细胞化学法的检测结果,对我院62例CN-AML患者NPM突变情况进行了初步研究。进一步结合临床资料分析其意义,初步探讨其与CN-AML的关系。对象与方法1.62例原发初诊AML患者来自2006年10月至2009年3月我院收治病例,经MIC分型确诊,另设正常对照组7例,来源于我院移植病房正常供者骨髓,染色体至少分析20个克隆为正常核型。2.病人及正常对照者骨髓细胞涂片标本应用免疫细胞化学染色法检测NPM基因突变导致NPM蛋白胞质异常定位情况。骨髓细胞涂片采用过氧化物酶标记的链霉卵白素法(S-P)检测,反应应用1:50的NPM多克隆抗体、生物素化羊抗兔IgG二抗,经DAB显色、苏木素复染固定封片。3.抽取患者及正常对照组肝素抗凝骨髓液2ml,Ficoll分离单个核细胞,常规酚-氯仿-异戊醇法提取DNA。基因组DNA进行PCR扩增,扩增产物经凝胶回收,直接测序检测突变情况。NPM基因第12外显子扩增引物:上游引物:5′-CAAGACTATTTGCCATTCCTAAC-3′,下游引物5′-TTAACTCTCTGGTGGTAGAATGAA -3′,扩增产物为560bp。反应设立内参照β-actin:上游引物:5′-CTCCATCCTGGCCTCGCTGT-3′,下游引物:5′-GCTGTCACCTTCACCGTTCC-3′,扩增产物为268bp。PCR反应体系50μl:包括Taq酶2.5μl,20μM上下游引物各1μl,dNTP100nmol,10×PCR Buffer 5μl,基因组DNA 1μg,补水至50μl反应体系。反应条件:95℃10min;95℃30s,55℃45s,72℃1min,35个循环:72℃10min。结果1.免疫细胞化学法:62例原发初诊正常核型AML患者中共检出胞质定位的NPM蛋白18例(29.0%),7例健康对照者均未发现胞质NPM蛋白。2.基因组DNA PCR产物测序法:检出相应的18例患者发生突变,15例患者为A型突变,3例患者为B型突变。两种检测方法结果完全一致。***突变与临床特征的关系(见表一):NPM突变组与未突变组相比,患者发病时的白细胞数、血红蛋白量、血小板计数、骨髓原始细胞比例及淋巴结肿大、肝脾肿大、牙龈增生、皮肤浸润差别无显著性(P＞0.05);突变组患者的年龄集中于40～60岁;性别以女性为多,男女比例1:1.6。***突变与临床疗效的关系:经两周期标准DA或HA方案诱导缓解,18例NPM突变患者中16例获得完全缓解(88.9%),而其余44例患者中28例获得完全缓解(63.6%),两组相比,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论***突变是CN-AML患者一个重要的分子预后标志,NPM突变提示CN-AML患者临床预后较好。2.我们建立的免疫细胞化学染色法为CN-AML患者NPM突变提供了简单易行,稳定可靠的检测方法。

关键词：急性髓系白血病 NPM 免疫细胞化学预后

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番茄抗黄化曲叶病毒病基因的分子标记研究

番茄抗黄化曲叶病毒病基因的分子标记研究

作者：姚金晓浙江师范大学

学位级别：硕士

番茄是目前世界上栽培最为广泛的蔬菜之一,是人民生活中经常见的一种蔬菜。黄化曲叶病毒病(TYLCVD)目前成了危害番茄生产的主要病害之一。番茄黄化曲叶病毒病在首次发现后,几年内便迅速蔓延爆发,故须立即采取措施进行积极有效的防控,其... 详细信息

番茄是目前世界上栽培最为广泛的蔬菜之一,是人民生活中经常见的一种蔬菜。黄化曲叶病毒病(TYLCVD)目前成了危害番茄生产的主要病害之一。番茄黄化曲叶病毒病在首次发现后,几年内便迅速蔓延爆发,故须立即采取措施进行积极有效的防控,其中防治该番茄黄化曲叶病毒病最有效的方法就是培育抗病品种。随着分子生物学研究的不断深入,筛选到与抗性基因紧密连锁的分子标记对育种有重大意义。随着分子生物技术的发展,黄化曲叶病毒病的研究有了新的方法和手段。对黄化曲叶病毒病抗性基因的研究,有利于分子标记辅助育种的开展。我们以抗病品系"T0727"和感病品系"T9179"及其构建的F1、F2代群体为基础材料,利用AFLP、SRAP、以及c DNA-AFLP三种标记方法进行抗病性基因的分子标记的研究,结果如下：(1)利用AFLP技术寻找与抗病相关的分子标记,17条EcoRI引物和22条MseI引物相互组合共计374对引物,在抗病亲本"T0727"、感病亲本“T9179"、“T07027×T9179"F1、抗病池(BR)以及感病池(BS)之间总共扩增出了大约35000条带。其中共找到3个与抗病相关的AFLP分子标记(E-ACA/M-CAG、E-ACC /M-CAG和E-ACT/M-CTA)遗传距离分别为18.2cM、9.5cM和20.1 cM。为了方便在分子标记辅助育种实践中使用,将AFLP中的E-ACC/M-CAG标记转化成SCAR标记。通过进行群体分析,证明该SCAR标记特征带与原AFLP标记表现一致。(2)应用SRAP分子标记技术结合群分法策略在亲本“T0727”、“T9179”、‘T07027×T9179"F1、抗病池(BR)和感病池(BS)中筛选与番茄抗黄化曲叶病毒病紧密连锁的分子标记。从340对引物组合中进行筛选,其中有262对引物扩增出稳定的条带,有效率为77.0%。我们筛选到1个与抗性基因连锁的SRAP标记。经过小群体检测,初步估计筛选到的标记与抗病基因可能连锁。我们将一步验证该标记在整个F2代群体的有效性。(3)以黄花曲叶病毒诱导抗病亲本“T0727”、感病亲本“T9179”及其杂交F1代,采用cDNA-AFLP技术分析其基因差异表达谱。用64对AFLP引物组合对处理和对照的cDNA进行AFLP分析。共得到9条差异条带,并且得到了测序结果。在NCBI数据库中进行BLAST比对,其中5条有相似性较高的基因,4条没有搜索到同源序列。差异片段的功能有待进一步研究。

关键词：番茄黄化曲叶病毒病(TYLCVD) AFLP SCAR SRAP cDNA-AFLP

血清IL-10、TGF-β_(1)、sCD30联检对非霍奇金淋巴瘤患者化疗相关间质性肺炎的预测价值

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海南医学 2024年第5期35卷 699-703页

作者：王建新姬玉涵刘宁洒姚金晓南阳市第二人民医院血液淋巴瘤科河南南阳473000

目的探究血清白细胞介素-10 (IL-10)、转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))、可溶性CD30 (sCD30)联检对非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者化疗相关间质性肺炎(IP)的预测价值。方法回顾性分析2019年1月至2022年12月南阳市第二人民医院收治的168例NH... 详细信息

目的探究血清白细胞介素-10 (IL-10)、转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))、可溶性CD30 (sCD30)联检对非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者化疗相关间质性肺炎(IP)的预测价值。方法回顾性分析2019年1月至2022年12月南阳市第二人民医院收治的168例NHL患者的临床诊治资料,根据化疗期间是否出现IP分为IP组(n=37)和非IP组(n=131),比较两组患者的一般资料、入院时血清IL-10、TGF-β_(1)、sCD30水平,采用Logistic回归方程筛选IP发生影响因素,绘制受试者工作特征曲线(ROC)及曲线下面积(AUC)分析血清IL-10、TGF-β_(1)、sCD30预测IP效能,采用相对危险度(RR)分析不同血清IL-10、TGF-β_(1)、sCD30表达对IP发生的影响。结果 IP组患者的血清LDH水平为(288.84±86.41) U/L,利妥昔单抗应用所占比例为48.65%,明显高于非IP组的(199.95±59.66) U/L、22.90%,差异均有统计学意义(P0.05);IP组患者的血清IL-10、TGF-β_(1)、sCD30水平分别为(25.41±7.60) ng/L、(29.55±8.83) pg/mL、(142.21±42.67) k U/L、,明显高于非IP组的(18.00±5.41) ng/L、(20.65±6.20) pg/mL、(98.87±28.96) kU/L、,差异均有统计学意义(P<0.05);经Logistic回归方程显示,IL-10 (OR:18.046)、TGF-β_(1)(OR:16.755)、sCD30 (OR:17.126)、LDH (OR:15.561)、应用利妥昔单抗(OR:10.331)均是NHL患者化疗相关IP发生的影响因素(P<0.05);经ROC分析结果显示,血清IL-10、TGF-β_(1)、sCD30联合预测IP效能[AUC:0.947,95%CI:0.901~0.976]明显优于三者单一预测[AUC:0.740,95%CI:0.667~0.804]、[AUC:0.762,95%CI:0.691~0.824]、[AUC:0.745,95%CI:0.672~0.809];血清IL-10、TGF-β_(1)、sCD30高表达者IP发生率是低表达的2.914、5.287、3.142倍。结论血清IL-10、TGF-β_(1)、sCD30是NHL患者化疗相关IP的高危因素,联合检测有助于提高预测效能,指导临床医生做出治疗决策,减少IP发生风险。

关键词：非霍奇金淋巴瘤化疗间质性肺炎白细胞介素-10 转化生长因子-β_(1) 可溶性CD30

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小白菜高效低成本无土栽培基质的配比试验研究

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分子植物育种 2015年第10期13卷 2256-2261页

作者：严中琪杨飞殷武平姚金晓吴菊舟山市农林科学研究院舟山316000

本研究以不结球白菜‘华冠青梗菜’为试验材料,研究了不同基质成分和配比对白菜生长的影响,旨在为白菜高效低成本栽培技术研究提供科学依据。本研究通过以商品育苗基质为对照,选用商品育苗基质、木屑和棉籽壳为原料,按照3种原料的不同... 详细信息

本研究以不结球白菜‘华冠青梗菜’为试验材料,研究了不同基质成分和配比对白菜生长的影响,旨在为白菜高效低成本栽培技术研究提供科学依据。本研究通过以商品育苗基质为对照,选用商品育苗基质、木屑和棉籽壳为原料,按照3种原料的不同体积配比配制出4种复合基质,分析及研究了不同试验处理对白菜生长形态(出苗,子叶展平,两叶一心,株高,茎粗,主根长)、积累生物量(单株鲜重)及基质成本的影响。通过隶属函数法对白菜生长发育指标进行综合评价,结果表明:商品育苗基质+木屑+棉籽壳(6:3:1)的配比组合成本最低,小白菜的出苗率、子叶展平率、两叶一心率均为最大,且株高、茎粗、主根长和单株鲜重均显著优于其他基质配方,是适合小白菜生长的最佳基质配比组合。

关键词：小白菜基质幼苗生长配比试验

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急性白血病继发肝脾念珠菌病的CT表现

中国医学影像学杂志 2018年第3期26卷 202-204页

作者：姚金晓周亚兰魏旭东马海龙杨如玉南阳市中心医院血液内科河南南阳473000 河南省肿瘤医院血液内科河南郑州450008

肝脾念珠菌病（hepatosplenic candidosis,HSC）指真菌侵及肝、脾、肾等深部组织并造成组织损害。急性白血病（acute leukemia,AL）因肿瘤性疾病本身、放化疗、黏膜屏障的破坏及广谱抗生素应用导致菌群失调等诸多因素,HSC的发生率明显升... 详细信息

肝脾念珠菌病（hepatosplenic candidosis,HSC）指真菌侵及肝、脾、肾等深部组织并造成组织损害。急性白血病（acute leukemia,AL）因肿瘤性疾病本身、放化疗、黏膜屏障的破坏及广谱抗生素应用导致菌群失调等诸多因素,HSC的发生率明显升高,是AL患者常见的死亡原因之一。然而,HSC症状不典型,早期诊断较为困难,且抗真菌治疗疗程长,经济代价大。

关键词：白血病急性病念珠菌病肝疾病脾疾病体层摄影术,螺旋计算机图像增强

有机生态栽培基质配比对生菜生长及品质的影响

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分子植物育种 2020年第6期18卷 1983-1990页

作者：杨飞姚金晓张志刚张成浩舟山市农林科学研究院舟山316000 舟山市尚鲜农业科技有限公司舟山316000 浙江省农业科学院杭州310021

以传统基质草炭、蛭石及腐熟羊粪和玉米秸秆为原料,配制成12种不同配比的栽培基质,以商品叶菜类栽培基质作为对照,研究不同基质配方对生菜生长的影响,以期获得最适合生菜栽培的基质配比组合。结果表明,不同组合基质配比均能满足生菜的... 详细信息

以传统基质草炭、蛭石及腐熟羊粪和玉米秸秆为原料,配制成12种不同配比的栽培基质,以商品叶菜类栽培基质作为对照,研究不同基质配方对生菜生长的影响,以期获得最适合生菜栽培的基质配比组合。结果表明,不同组合基质配比均能满足生菜的正常生长,所有处理的株高、叶面积、单株鲜重和单株干重都较对照组(CK)有着不同程度提高,其中T11(草炭∶腐熟羊粪∶玉米秸秆∶蛭石=1∶4∶3∶4)条件下各指标表现最好,分别较CK提高了31.80%、47.15%、59.43%和79.53%;从生理生化指标来看,T11处理的Vc含量最高,是CK的2.5倍;T10(草炭∶腐熟羊粪∶玉米秸秆∶蛭石=3∶1∶4∶4)的根系活力是所有处理中最高的,达到CK的2.02倍;T12(草炭∶腐熟羊粪∶玉米秸秆∶蛭石=3∶4∶1∶4)处理的叶绿素含量最高,是CK的1.41倍,硝酸盐含量最低,较CK降幅达到74.59%。通过隶属函数进行综合比较分析,我们认为T11是所有供试处理中最适合生菜栽培的基质配比。

关键词：有机生态型配比基质生菜(Lactuca sativa L.) 综合评价

MBL基因多态性与多发性骨髓瘤患者化疗期间感染的关联

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中华医院感染学杂志 2022年第17期32卷 2662-2666页

作者：陈宛丽姚金晓杨莹王舒刘冰南阳市第二人民医院血液淋巴瘤科河南南阳473000

目的探究甘露糖结合凝集素(MBL)基因多态性与多发性骨髓瘤(MM)患者化疗期间感染并发症的关系。方法选取2019年6月-2020年12月在河南省南阳市第二人民医院接受化疗治疗的MM患者84例,分析化疗期间患者感染情况、感染病原菌分布,PCR技术检... 详细信息

目的探究甘露糖结合凝集素(MBL)基因多态性与多发性骨髓瘤(MM)患者化疗期间感染并发症的关系。方法选取2019年6月-2020年12月在河南省南阳市第二人民医院接受化疗治疗的MM患者84例,分析化疗期间患者感染情况、感染病原菌分布,PCR技术检测患者MBL基因多态性,酶联免疫吸附法检测血浆MBL水平。结果84例患者中26例化疗期间发生感染,感染率为30.95%;感染部位以呼吸系统为主(65.38%);26例感染患者共检出病原菌41株,其中革兰阴性菌22株(53.66%),革兰阳性菌15株(36.59%),真菌4株(9.76%);感染组患者的肾功能不全占比高于未感染组,血清白蛋白和血浆MBL水平低于未感染组(P0.05);两组患者rs1800450、rs7095891位点基因型和等位基因频率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MBL基因多态性及其血浆水平与MM患者化疗期间感染并发症的发生相关,临床可通过检测患者MBL基因多态性、血浆MBL水平以评估化疗期间感染的发生风险。

关键词：多发性骨髓瘤化疗医院感染甘露糖结合凝集素基因多态性

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舟山地区设施小冬瓜高产栽培技术

北方园艺 2016年第7期 43-44页

作者：姚金晓杨飞任如红吴菊王国华吴海平舟山市农林科学研究院浙江舟山316000

从种子选购、播种、施肥、田间管理,病害防治等方面总结了小冬瓜高产栽培技术,以供生产参考。

关键词：冬瓜舟山高产栽培

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农业有机生物质对菠菜生长和品质的影响

分子植物育种 2018年第22期16卷 7558-7563页

作者：杨飞姚金晓朱家骝杨梢娜张成浩舟山市农林科学研究院舟山316000 浙江省农业科学院杭州310021

以菇渣、水稻秸秆、羊粪作为有机生态型栽培基质,采用随机组合设计方法,通过盆栽试验研究了3种农业有机废弃物对菠菜生长和品质的影响。结果表明,添加不同配比有机生物质对菠菜的生长以及菠菜体内VC含量、可溶性糖含量、硝酸盐和草酸的... 详细信息

以菇渣、水稻秸秆、羊粪作为有机生态型栽培基质,采用随机组合设计方法,通过盆栽试验研究了3种农业有机废弃物对菠菜生长和品质的影响。结果表明,添加不同配比有机生物质对菠菜的生长以及菠菜体内VC含量、可溶性糖含量、硝酸盐和草酸的积累都有显著的促进作用,随着羊粪比重的增加,菠菜体内硝酸盐和草酸含量也随之减少。综合比较得出,菇渣:水稻秸秆:羊粪=1∶1∶2时菠菜植株生长最好,同时可以有效控制菠菜体内硝酸盐和草酸含量,认为是一种理想的配比组合。本研究为解决畜粪便导致的环境污染问题,以及增加菠菜产量和品质提供科学依据。

关键词：农业有机生物质菠菜生长品质