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脱氧核酶抑制乙型肝炎病毒基因表达的实验研究

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浙江大学学报（医学版） 2003年第2期32卷 112-115页

作者：沃健儿吴晓玲朱海红周林福姚航平陈离伟浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所浙江杭州310003 杭州师范学院医学院浙江杭州310012

目的 :探讨乙型肝炎病毒 (HBV) s基因和 c基因特异性的脱氧核酶 (DNAzyme)对 HBV表面抗原 (HB-s Ag)和 e抗原 (HBe Ag)表达的抑制效应。方法 :设计合成针对 HBV s基因 ORF A157UG、e基因 ORF A1816UG的DNAzyme Drz BS、Drz BC,在 2 .2 ... 详细信息

目的 :探讨乙型肝炎病毒 (HBV) s基因和 c基因特异性的脱氧核酶 (DNAzyme)对 HBV表面抗原 (HB-s Ag)和 e抗原 (HBe Ag)表达的抑制效应。方法 :设计合成针对 HBV s基因 ORF A157UG、e基因 ORF A1816UG的DNAzyme Drz BS、Drz BC,在 2 .2 .15细胞上观察其对 HBV s基因、c基因的表达抑制效应。结果 :Drz BS、Drz BC作用于 2 .2 .15细胞后 ,可显著抑制 HBV s基因、c基因的表达 ,有效浓度为 0 .1～ 2 .5μmol/ L并呈剂量依赖性 ,最高抑制率分别为 94 .2 %和 91.8% ;有效抑制持续时间可达 72 h;Drz BS、Drz BC在细胞内对 Hbs Ag、Hbe Ag表达的抑制效率 ,明显高于作为对照的反义寡核苷酸 As BS、As BC,有效浓度较后者低至少 10倍。其对 2 .2 .15细胞的 HBVDNA复制无明显影响 ,亦未见明显的细胞毒性作用。结论 :在 2 .2 .15 HBV细胞模型系统 ,Drz BS、Drz BC能高效阻断 HBV s基因、e基因的表达 ,是一种特异性的、高效的抗 HBV基因治疗剂。

关键词：脱氧核酶抑制效应乙型肝炎病毒基因表达实验研究

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新型冠状病毒疫苗的研究进展

中华临床感染病杂志 2021年第1期14卷 13-20页

作者：陈科达李超男史丹蓉姚航平李兰娟浙江树人大学树兰国际医学院杭州310015 浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室杭州310003

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)自暴发以来,以其高致病性和传染性,对全球公共卫生安全造成了巨大威胁。到目前为止,新型冠状病毒(2019-nCoV)的致病机制仍不明确,尚无有效的治疗方法。疫苗作为预防病毒感染最有效的策略之一成为研究热点。... 详细信息

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)自暴发以来,以其高致病性和传染性,对全球公共卫生安全造成了巨大威胁。到目前为止,新型冠状病毒(2019-nCoV)的致病机制仍不明确,尚无有效的治疗方法。疫苗作为预防病毒感染最有效的策略之一成为研究热点。基于目前对2019-nCoV的了解,其疫苗的研发几乎涵盖了目前疫苗研究的所有形式,包括灭活疫苗、重组蛋白疫苗、病毒载体疫苗和核酸疫苗(mRNA或DNA疫苗)等。本文就2019-nCoV疫苗的候选靶点、疫苗类型、研发现状及进展等方面进行综述,为后续研究及防治提供参考。

关键词：冠状病毒属新型冠状病毒疫苗佐剂免疫效应

小白菊内酯对氧化应激诱导人晶状体上皮细胞凋亡的防护作用

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眼科研究 2007年第11期25卷 854-857页

作者：汤霞靖姚克叶盼盼姚航平浙江大学医学院附属二院眼科中心杭州310009

目的探讨植物成分小白菊内酯对过氧化氢(H2O2)诱导的人晶状体上皮细胞(LECs)凋亡的保护作用及其作用机制。方法人LECs(SRA01-04)用50μmol/L的H2O2诱导凋亡,同时加入不同浓度(0、10、20、50μmol/L)的小白菊内酯观察细胞形态变化;用流... 详细信息

目的探讨植物成分小白菊内酯对过氧化氢(H2O2)诱导的人晶状体上皮细胞(LECs)凋亡的保护作用及其作用机制。方法人LECs(SRA01-04)用50μmol/L的H2O2诱导凋亡,同时加入不同浓度(0、10、20、50μmol/L)的小白菊内酯观察细胞形态变化;用流式细胞仪检测细胞凋亡,用实时定量反转录PCR以及Westernblot检测caspase-3和caspase-9的表达。结果H2O2能明显诱导人LECs凋亡,促进caspase-3和caspase-9在转录水平和蛋白水平的表达;小白菊内酯能明显抑制H2O2诱导的人LECs凋亡,抑制caspase-3和caspase-9的表达,而作用呈浓度依从性。结论小白菊内酯对氧化应激诱导的人LECs凋亡具有保护作用,提示可能对白内障的发生具有潜在的防治作用。

关键词：小白菊内酯人晶状体上皮细胞过氧化氢凋亡白内障

HBV核心抗原EGFP融合蛋白表达质粒的构建及在Hep G_2细胞中的表达

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浙江预防医学 2005年第1期17卷 3-5页

作者：徐宁陈智姚航平羊正纲浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室浙江杭州310003

目的　探讨采用构建的质粒pHBc -EGFP转染HepG2 细胞 ,瞬时表达HBV核心抗原和增强型绿荧光蛋白的可行性。方法　克隆HBV核心抗原基因进入真核表达载体pEGFP -N1 中 ,脂质体法转染HepG2 细胞后在荧光显微镜下观察增强型绿荧光蛋白表达 ,... 详细信息

目的　探讨采用构建的质粒pHBc -EGFP转染HepG2 细胞 ,瞬时表达HBV核心抗原和增强型绿荧光蛋白的可行性。方法　克隆HBV核心抗原基因进入真核表达载体pEGFP -N1 中 ,脂质体法转染HepG2 细胞后在荧光显微镜下观察增强型绿荧光蛋白表达 ,并行RT -PCR及细胞免疫组化分析融合蛋白的表达。结果　重组pHBc -EGFP质粒可在HepG2 细胞内瞬时表达HBV核心抗原和增强型绿荧光蛋白融合蛋白。结论　pHBc -EGFP质粒构建成功 ,增强型绿荧光蛋白的表达可报告HBV核心抗原表达。

关键词： HBV核心抗原增强型绿荧光蛋白瞬时表达细胞免疫组化分析乙型肝炎病毒

雷公藤内酯醇对结肠癌细胞COX-2和iNOS表达的抑制作用

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中国药学杂志 2008年第10期43卷 758-761页

作者：夏旭芬王伟鲍亚萍张伟敏姚航平童向民浙江省立同德医院杭州310012 浙江大学医学院附属第一医院杭州310003

目的研究雷公藤内酯醇(TP)抑制结肠癌SW114细胞株环氧化酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及其产物PGE2和NO的表达,探讨TP的抗肿瘤机制。方法不同浓度的TP作用于结肠癌细胞株24h,通过RT-PCR,Western印迹杂交,ELISA检测环氧化酶-2(C... 详细信息

目的研究雷公藤内酯醇(TP)抑制结肠癌SW114细胞株环氧化酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及其产物PGE2和NO的表达,探讨TP的抗肿瘤机制。方法不同浓度的TP作用于结肠癌细胞株24h,通过RT-PCR,Western印迹杂交,ELISA检测环氧化酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及其产物,同时提取各组细胞蛋白质,TransAM测定核转录因子NF-κB活性。结果TP对结肠癌细胞株COX-2和iNOS的表达及其产物PGE2和NO的合成有抑制作用,而且也抑制SW114细胞的NF-κB活性,这些作用与剂量呈依赖关系。结论TP对SW114细胞COX-2和iNOS的表达及其产物PGE2和NO的合成有抑制作用,这种作用可能通过增强TP对核转录因子NF-κB活性的抑制作用而实现,揭示了TP抗肿瘤的部分依据。

关键词：雷公藤内酯醇结肠癌环氧化酶-2 诱导型一氧化氮合酶

亚急性重型病毒性肝炎患者和正常人PBMCs对IL-4应答性的比较

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中华微生物学和免疫学杂志 1998年第3期18卷 212-215页

作者：石裕明张立煌孙永良方海林何南祥刘克洲李敏伟姚航平浙江医科大学传染病研究所广州市第八人民医院传染病研究所

目的观察不同浓度白细胞介素４（ＩＬ－４）对亚急性重型病毒性肝炎（简称亚急重肝）患者和正常人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）中肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）－α和ＩＬ－１α表达的抑制情况，以比较两者ＰＢＭＣｓ对ＩＬ－４的应答性。... 详细信息

目的观察不同浓度白细胞介素４（ＩＬ－４）对亚急性重型病毒性肝炎（简称亚急重肝）患者和正常人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）中肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）－α和ＩＬ－１α表达的抑制情况，以比较两者ＰＢＭＣｓ对ＩＬ－４的应答性。方法应用Ｌ９２９细胞毒试验、免疫组织化学法和半定量逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＴＮＦ－α和ＩＬ－１α的表达水平。结果ＩＬ－４均以剂量依赖的方式抑制亚急重肝患者和正常人ＰＢＭＣｓＴＮＦ－α和ＩＬ－１α蛋白质和ｍＲＮＡ的表达，然而两者的剂量－反应曲线明显不同。在正常人，ＩＬ－４于１００Ｕ／ｍｌ时对ＰＢＭＣｓＴＮＦ－α和ＩＬ－１α的抑制效应接近最大，而在亚急重肝，需１０００Ｕ／ｍｌ的浓度才达到相似的抑制效应，两者剂量相差１０倍以上，反应曲线明显右移。如以１００Ｕ／ｍｌ的ＩＬ－４处理ＰＢＭＣｓ，对正常人ＴＮＦ－α生物活性、单核细胞ＴＮＦ－α和ＩＬ－１α阳性率及ｍＲＮＡ表达水平的抑制率均超过５０％，而对亚急重肝患者的抑制率仅８．１９％～１９．３９％。结论亚急重肝患者ＰＢＭＣｓ对ＩＬ－４的应答性明显低于正常人，由此致使ＩＬ－４不能有效地发挥抑制ＰＢＭＣｓ分泌ＴＮＦ－α和ＩＬ－１α的作用，可能是重?

关键词：白细胞介素-4 病毒性肝炎单核细胞

乙型肝炎病毒对干扰素-γ受体表达及其信号通路的影响

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中华传染病杂志 2004年第4期22卷 250-254页

作者：陈公英陈智任苏平吕国才李敏伟周慧明姚航平浙江大学医学院附属一院传染病研究所

目的　探索乙型肝炎病毒 (HBV)持续存在和复制对干扰素 γ受体 (IFN γR)、IFN γ/STAT 1信号及MHC Ⅰ诱导表达的影响。方法　采用流式细胞术、Western blot及半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)等方法 ,检测HepG2 .2 .15与HepG2肝... 详细信息

目的　探索乙型肝炎病毒 (HBV)持续存在和复制对干扰素 γ受体 (IFN γR)、IFN γ/STAT 1信号及MHC Ⅰ诱导表达的影响。方法　采用流式细胞术、Western blot及半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)等方法 ,检测HepG2 .2 .15与HepG2肝母细胞瘤细胞株及人正常细胞株LO2的IFN γR表达 ;同时检测细胞IFN γR1对IFN γ的结合能力。观测不同时间段的IFN γ/p STAT1信号活化及IFN γ/MHC Ⅰ诱导效应。结果　HepG2 .2 .15细胞膜结合型及全细胞内IFN γR1表达高于其母源性细胞HepG2及正常肝细胞株LO2细胞 ;HepG2 .2 .15 细胞IFN γR1mRNA量显著高于HepG2及LO2细胞 (t=9.35 ,P <0 .0 1) ;HepG2 .2 .15 细胞全细胞IFN γR2表达低于HepG2及LO2细胞 ;两株肿瘤细胞存在内源性 p STAT1条带 ;HepG2 .2 .15细胞IFN γ/p STAT1、IFN γ/MHC Ⅰ诱导效应较母源细胞低下。拉米夫定抑制HBVDNA后 ,可上调HepG2 .2 .15细胞的IFN γ/MHC Ⅰ表达。结论　HBV持续存在和复制可降低IFN γ/STAT1及IFN γ/MHC Ⅰ诱导表达的敏感性 ;并能上调IFN γR1表达、下调IFN γR2表达。

关键词： IFN-γ IFN—γ 表达 HepG2.2.15细胞 STAT1 干扰素-γ 乙型肝炎病毒目的方法结论

用SEREX方法筛选HCC抗原及hcct-19表达谱的检测

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世界华人消化杂志 2006年第11期14卷 1064-1070页

作者：陈晓红陈智陈峰姚航平夏琦焦婧婧浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所浙江省杭州市310003

目的:用SEREX方法鉴定HCC表达的肿瘤抗原,检测hcct-19的表达谱．方法:将HCC表达文库铺板,IPTG诱导蛋白质表达,BSA封闭．同1:1 000稀释的预吸收 HCC患者血清反应后,与1:5 000稀释的羊抗人抗体反应,在BCIP／NBT的作用下显色,挑取阳性克隆... 详细信息

目的:用SEREX方法鉴定HCC表达的肿瘤抗原,检测hcct-19的表达谱．方法:将HCC表达文库铺板,IPTG诱导蛋白质表达,BSA封闭．同1:1 000稀释的预吸收 HCC患者血清反应后,与1:5 000稀释的羊抗人抗体反应,在BCIP／NBT的作用下显色,挑取阳性克隆噬菌斑块,重复筛选和铺板3次,直至得到一致的单克隆免疫阳性重组噬菌体．挑取阳性克隆噬菌斑,用载体克隆位点两端的通用引物进行PCR扩增,PCR产物纯化测序, 序列结果用BLAST软件同GenBank中的已知基因进行对比分析．检测阳性克隆抗原基因 hcct-19在部分正常组织、肿瘤组织及肿瘤细胞株中的表达,半定量RT-PCR方法检测阳性克隆抗原基因在肝癌及癌旁组织中的表达．结果:共得到31个阳性克隆,代表14个不同的 cDNA序列,其中10个为已知功能的基因,4 个为未知功能的基因．在已知功能的基因中, RFC2、NDUFA4及MCART1首次被发现与 HCC有关．hcct-19在部分正常组织、肿瘤组织及肿瘤细胞株中表达,在肝癌组织中的表达强度明显高于癌旁组织(13．2±2．7vs2．9±0．3, P<0．05)．结论:本实验筛选出的HCC抗原有助于进一步阐明HCC的形成过程．hcct-19可能作为一个过量表达的基因参与了HCC的发病过程．

关键词： SEREX 肝细胞癌抗原 hcct-19 表达谱人组织细胞株

重型病毒性肝炎患者PBMCs中TNF-α、IL-1α和IL-4mRNA表达水平及其意义探讨

维普期刊数据库评论

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中华微生物学和免疫学杂志 1997年第6期17卷 425-429页

作者：石裕明何南祥刘克洲孙永良方海林张立煌李敏伟姚航平广州市第八人民医院传染病研究所浙江医科大学传染病研究所

本实验应用半定量ＲＴ－ＰＣＲ检测了８例急重肝、１３例亚急重肝和１６例慢重肝患者ＰＢＭＣｓＴＮＦ－α、ＩＬ－１α和ＩＬ－４ｍＲＮＡ的表达水平并对其意义进行了探讨。结果表明，急重肝和亚急重肝患者ＰＢＭＣｓＴＮＦ－α和ＩＬ... 详细信息

本实验应用半定量ＲＴ－ＰＣＲ检测了８例急重肝、１３例亚急重肝和１６例慢重肝患者ＰＢＭＣｓＴＮＦ－α、ＩＬ－１α和ＩＬ－４ｍＲＮＡ的表达水平并对其意义进行了探讨。结果表明，急重肝和亚急重肝患者ＰＢＭＣｓＴＮＦ－α和ＩＬ－１αｍＲＮＡ的表达水平较正常人明显增高，且与内毒素血症和病情轻重相关，而慢重肝仅ＴＮＦ－αｍＲＮＡ略增高，提示ＴＮＦ－α和ＩＬ－１α在急重肝和亚急重肝的发病机理中可能起重要的作用，而在慢重肝的作用可能不是主要的。虽然三型重型肝炎患者ＩＬ－４ｍＲＮＡ的表达水平与正常人比较无显著差异，但急重肝和亚急重肝患者ＩＬ－４ｍＲＮＡ／ＴＮＦ－αｍＲＮＡ和ＩＬ－４ｍＲＮＡ／ＩＬ－１αｍＲＮＡ的比值均明显低于正常人，表明急重肝和亚急重肝患者炎症细胞因子和抗炎症细胞因子调节网络严重失调，ＩＬ－４水平相对低下可能是急重肝和亚急重肝患者ＴＮＦ－α和ＩＬ－１α异常增高的原因之一。

关键词：病毒性肝炎肿瘤坏死因子白细胞介素