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FK506增强雷公藤内酯醇对滑膜成纤维细胞COX-2和iNOS表达的抑制作用

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第3期35卷 277-282页

作者：姚航平邵雪婷孙文佶邵传森张立煌浙江大学医学院附属第一医院浙江大学医学院免疫学研究所浙江大学医学院免疫学研究所杭州310031 杭州310003

研究了FK5 0 6对雷公藤内酯醇抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞 (RASF)增殖和表达环氧化酶 2 (COX 2 )、诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)及合成前列腺素E2 (PGE2 )、一氧化氮 (NO)的影响 ,探讨了FK5 0 6联合雷公藤抗类风湿作用的机制。分离培... 详细信息

研究了FK5 0 6对雷公藤内酯醇抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞 (RASF)增殖和表达环氧化酶 2 (COX 2 )、诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)及合成前列腺素E2 (PGE2 )、一氧化氮 (NO)的影响 ,探讨了FK5 0 6联合雷公藤抗类风湿作用的机制。分离培养人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞 ,用不同浓度的FK5 0 6处理后 ,加或不加雷公藤内酯醇 (TP)和TNFα ,分别用 [3H] TdR法、竞争ELISA和硝酸酶还原法、半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)法、细胞酶免疫法及Western印迹法检测滑膜细胞的增殖活性、细胞培养上清液中PGE2和NO的水平、滑膜细胞COX 2和iNOSmRNA表达水平及蛋白质表达水平。同时提取各组细胞蛋白质 ,测定其核转录因子NF κB活性。结果表明 ,FK5 0 6( 10～ 10 0 0nmol/L)及低浓度的TP( 10 μg/L)单独对TNFα活化的RASF表达COX 2、iNOS及合成PGE2、NO均无明显的抑制作用 ;FK5 0 6与低浓度的TP联合作用后 ,对活化的RASF具有不同程度的抑制作用 ,并与联合的FK5 0 6浓度 ( 10～ 10 0 0nmol/L)呈明显正相关性 ,且两者联合对TNFα激活的RASF核转录因子NF κB活性有明显的抑制作用。实验未观察到FK5 0 6对TP抑制滑膜细胞增殖的影响。以上结果说明 ,FK5 0 6可显著增强TP对滑膜细胞COX 2和iNOS的表达及其产物PGE2和NO合成

关键词： FK506 雷公藤内酯醇关节炎,类风湿环氧化酶-2 诱导型一氧化氮合酶

免疫刺激DNA序列对粉尘螨诱导的Th1和Th2细胞因子的调节作用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2001年第2期19卷 65-67页

作者：周承姚航平温廷桓孙翠如浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所杭州310003 上海医科大学医学螨类研究室上海200032

目的　研究免疫刺激DNA序列 (ISS)对螨性过敏性哮喘患者外周血单个核细胞 (PBMC)经粉尘螨变应原 (Df)诱导的Th1和Th2细胞因子的调节效应。方法　分离螨性过敏性哮喘患者及正常人PBMC ,加入ISS和Df刺激培养 ;以酶联免疫吸附试验检测培养... 详细信息

目的　研究免疫刺激DNA序列 (ISS)对螨性过敏性哮喘患者外周血单个核细胞 (PBMC)经粉尘螨变应原 (Df)诱导的Th1和Th2细胞因子的调节效应。方法　分离螨性过敏性哮喘患者及正常人PBMC ,加入ISS和Df刺激培养 ;以酶联免疫吸附试验检测培养上清中IFN γ、IL 12及IL 5含量 ;用荧光免疫酶标法检测患者血清中Df特异性IgE ,并作统计相关性分析。结果　无论正常人还是患者PBMC加入ISS和Df刺激培养后 ,其上清中IL 12、IFN γ的含量较Df和对照序列刺激组明显增高 ,而IL 5却明显降低。正常对照组PBMC经ISS及Df刺激后产生的IFN γ、IL 12水平明显高于患者组 ,而IL 5则相反。患者组PBMC经ISS及Df刺激后产生的IL 12与IFN γ呈明显正相关。结论　ISS对正常人及螨性变态反应患者PBMC具有显著增强尘螨变应原诱导的Th1细胞因子表达 ,并抑制Th2细胞因子产生的作用 ,在尘螨变态反应疾病的治疗中具有潜在的临床价值。

关键词：免疫刺激DNA序列粉尘螨哮喘细胞因子 Th1细胞 Th2细胞

表没食子儿茶素没食子酸酯抑制脂多糖诱导人视网膜内皮细胞中调节活化正常T细胞表达与分泌趋化因子的表达

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生理学报 2014年第2期66卷 145-150页

作者：张惠燕王剑勇姚航平杭州职业技术学院杭州310018 浙江大学医学院附属第一医院眼科杭州310003 浙江大学医学院附属第一医院感染病诊治国家重点实验室杭州310003

本研究旨在探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导人视网膜内皮细胞(human retinal endothelial cells,HRECs)炎症反应通路中调节活化正常T细胞表达与分泌趋化因子(regulated upon activation normal T cell expressed and secreted,RANTES)表达的影响及可能机制。将HRECs作为研究对象,分别用实时细胞计数法和非同位素细胞增殖法检测LPS(50～250 ng/mL)和EGCG(0～200μmol/L)对HRECs的毒性作用,确定合适的实验药物浓度。再将细胞随机分为正常对照组、LPS组和LPS+不同浓度EGCG(100、50、25、12.5、6.25μmol/L)共7组,用不同浓度EGCG预处理2 h,再加入LPS刺激24 h后,酶联免疫吸附法测定各组培养上清液中RANTES的表达水平,Western免疫印迹法检测蛋白激酶Akt及其磷酸化水平。结果显示,LPS可显著刺激诱导HRECs产生RANTES,EGCG抑制LPS诱导的RANTES表达,作用呈剂量依赖性。免疫印迹结果也显示,LPS对HRECs炎症过程中的Akt通路起重要作用,EGCG可显著抑制LPS诱导HRECs中Akt信号分子的蛋白磷酸化水平。以上结果提示,EGCG能有效抑制LPS诱导HRECs中RANTES的表达,其机制可能与抑制Akt信号通路有关。

关键词：表没食子儿茶素没食子酸酯调节活化正常T细胞表达与分泌趋化因子人视网膜内皮细胞 Akt蛋白磷酸化

骨形成蛋白-2转染MG-63细胞增加其对壳聚糖膜的粘附

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材料科学与工程学报 2011年第6期29卷 911-915,897页

作者：范丽卢岩林慧平姚航平林军浙江大学医学院第一附属医院浙江杭州310003

为了观察壳聚糖膜对转染载有骨形成蛋白基因(bone morphogenetic protein,BMPDNA)的成骨样细胞(MG 63)粘附及增殖的影响,本研究构建重组BMP-2质粒并转染入MG 63,分别经酶切、PCR、Western、免疫组化鉴定;制备壳聚糖膜(chitosan,CS),然... 详细信息

为了观察壳聚糖膜对转染载有骨形成蛋白基因(bone morphogenetic protein,BMPDNA)的成骨样细胞(MG 63)粘附及增殖的影响,本研究构建重组BMP-2质粒并转染入MG 63,分别经酶切、PCR、Western、免疫组化鉴定;制备壳聚糖膜(chitosan,CS),然后将转染细胞与该材料分别培养1、3、5天,扫描电镜观察细胞在材料表面的粘附形态;24、48、72、96小时后MTS检测细胞的增殖情况。结果发现转染了BMP-2 DNA MG63在壳聚糖膜材料上形态生长良好,有利于细胞的粘附行为;96小时后与未转染细胞组相比无明显差异。结果表明虽然体外转染BMP-2的MG63的增殖没有明显促进作用,但有利于细胞与材料间的粘附。结论:BMP-2转染成骨细胞增加细胞壳聚糖膜间的粘附,这将有助于了解壳聚糖细胞复合材料临床骨再生的应用前景。

关键词：骨形成蛋白壳聚糖成骨样细胞

Antitumor effects of interleukin-18 gene-modified hepatocyte cell line on implanted liver carcinoma

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Chinese Medical Journal 2003年第10期116卷 1475-1479页

作者：冷建杭张立煌姚航平曹雪涛 Central Laboratory the First People's Hospital Institute of Immunology Zhejiang University Iustitute of Immunology the Second Military Medical University

Objective To investigate the antitumor effects of intrasplenically transplanted interleukin-18 (IL-18) gene-modified hepatocytes on murine implanted liver carcinoma. Methods Embryonic murine hepatocyte cell line (BNL-CL2) was transfected with a recombinant adenovirus encoding IL-18 and used as delivery cells for IL-18 gene transfer. Two cell lines,BNL-LacZ and BNL-CL2, were used as controls. One week after intrasplenic injection of C26 cells (colon carcinoma line),tumor-bearing syngeneic mice underwent the intrasplenic transplantation of IL-18 gene-modified hepatocyte cell line and were divided into treatment group (BNL IL-18) and control groups (BNL-LacZ and BNL-CL2 ). Two weeks later,the serum levels of IL-18,interferon-γ (IFN-γ),tumor necrosis factor-α (TNF-α) and nitric oxide (NO) in the implanted liver carcinoma-bearing mice were assayed,the cytotoxicity of murine splenic cytotoxic T-lymphocytes (CTLs) was measured,and the morphology of the hepatic tumors was studied to evaluate the antitumor effects of the approach. Results In the treatment group,the serum levels of IL-18,IFN-γ,TNF-α and NO increased significantly. The splenic CTL activity increased markedly ( P <0.01) ,accompanied by a substantial decrease in tumor volume and the percentage of tumor area and prolonged survival of liver carcinomo-being mice. Conclusions In vivo IL-18 expression by ex vivo manipulated cells with IL-18 recombinant adenovirus is able to exert potent antitumor effects by inducing a predominantly T-cell-helper type 1 (Th1) immune response. Intrasplenic transplantation of adenovirus-mediated IL-18 gene-modified hepatocytes could be used as a targeting treatment for implanted liver carcinoma.

关键词： interleukin-18·gene therapy·intrasplenic transplantation·implanted liver carcinoma

类风湿性关节炎患者血清和滑液IL-18及IL-18结合蛋白的水平及意义

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检验医学 2004年第6期19卷 518-520页

作者：王叶萍姚航平浙江省长兴县人民医院检验科浙江长兴313100 浙江大学医学院传染病研究所浙江杭州310003

目的　研究类风湿性关节炎 (RA)患者血清、滑液中白细胞介素 18(IL 18)及IL 18结合蛋白 (IL 18BP)的水平 ,探讨他们在RA致病中的作用。方法　应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验 (ELISA)和生物学方法分别测定RA患者血清、滑液中IL 18及IL 1... 详细信息

目的　研究类风湿性关节炎 (RA)患者血清、滑液中白细胞介素 18(IL 18)及IL 18结合蛋白 (IL 18BP)的水平 ,探讨他们在RA致病中的作用。方法　应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验 (ELISA)和生物学方法分别测定RA患者血清、滑液中IL 18及IL 18BP水平和生物活性 ,同时采用硝酸酶还原法及竞争ELISA分别检测一氧化氮 (NO)和前列腺素E2 (PGE2 )的含量。以因外伤截肢者作对照。结果　RA患者血清、滑液中IL 18水平和生物活性均显著高于对照组 ,且滑液中量及活性比血清中高 ;而IL 18BP水平RA患者明显低于对照组。结论　IL 18的过度表达以及IL 18BP表达的相对不足 ,可能是RA发病的机制之一 ;选择抑制过度表达的IL 18生物活性 ,及增加IL 18BP的表达 ,将是RA治疗的新途径。

关键词：类风湿性关节炎血清滑液 IL-18 IL-18 结合蛋白

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B7-H4在胰腺癌中的表达及其临床意义

浙江大学学报（医学版） 2013年第5期42卷 511-516页

作者：洪波钱韵姚航平浙江大学医学院附属第二医院病理科浙江杭州310009 浙江大学医学院附属第二医院临床检验中心浙江杭州310009 浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室浙江杭州310003

目的:制备小鼠抗B7-H4单克隆抗体后研究B7-H4在胰腺癌中的表达情况及临床意义。方法:以稳定表达B7-H4胞外段的3T3-B7-H4细胞为免疫原,免疫Babl/C小鼠;应用常规杂交瘤技术将免疫的小鼠脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,使用间接ELISA方... 详细信息

目的:制备小鼠抗B7-H4单克隆抗体后研究B7-H4在胰腺癌中的表达情况及临床意义。方法:以稳定表达B7-H4胞外段的3T3-B7-H4细胞为免疫原,免疫Babl/C小鼠;应用常规杂交瘤技术将免疫的小鼠脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,使用间接ELISA方法筛选分泌抗B7-H4单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对所获得的单克隆抗体进行亚型鉴定,使用Western blot、免疫沉淀和免疫组化等方法对单克隆抗体特异性进行鉴定;应用免疫组织化学染色检测B7-H4分子在胰腺癌中的表达情况,并评价其与临床病理特征的关系。结果:获得1株亚型为IgM、轻链为κ型的单克隆抗体,经鉴定该单克隆抗体能与B7-H4发生反应。免疫组化显示:胰腺癌组织中B7-H4在胞浆和(或)胞膜弥漫表达,表达量显著高于正常胰腺组织(P<0.05)。B7-H4在临床肿瘤分级较高患者的胰腺癌组织及有淋巴结转移患者的胰腺癌组织中表达显著增强。结论:成功获得了特异性抗B7-H4的单克隆抗体,B7-H4在胰腺癌组织中表达上调,并与患者肿瘤分级和淋巴结转移密切相关。

关键词： B7-H4 抗原,CD80 胰腺肿瘤基因,肿瘤抗体,单克隆免疫组织化学淋巴转移酶联免疫吸附测定

血管紧张素II对巨噬细胞(THP-1细胞)凝集素样氧化低密度脂蛋白受体表达的影响

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中国病理生理杂志 2003年第2期19卷 230-234,T005页

作者：张磊朱建华黄元伟姚航平浙江大学医学院附属第一医院浙江杭州310003 浙江大学医学院免疫学研究所浙江杭州310031

目的 :研究AngII对人单核 /巨噬细胞 (THP - 1细胞 )凝集素样氧化低密度脂蛋白受体 (LOX - 1 )蛋白表达和基因转录的影响 ,从细胞蛋白、分子水平探讨AngII和巨噬细胞LOX - 1相互之间的关系 ,以进一步了解两者在动脉粥样硬化中的地位。方... 详细信息

目的 :研究AngII对人单核 /巨噬细胞 (THP - 1细胞 )凝集素样氧化低密度脂蛋白受体 (LOX - 1 )蛋白表达和基因转录的影响 ,从细胞蛋白、分子水平探讨AngII和巨噬细胞LOX - 1相互之间的关系 ,以进一步了解两者在动脉粥样硬化中的地位。方法 :将不同浓度AngII(1× 1 0 - 9- 1× 1 0 - 5mol/L)与经 0 1 μmol/L佛波酯 (PMA)诱导分化后的THP - 1细胞共孵育 2 4h ,以及将 1× 1 0 - 6 mol/L浓度的AngII与诱导分化后的THP - 1细胞作用不同时间0、3、6、1 2、2 4、48h后 ,用细胞酶联免疫法和半定量RT -PCR分别检测LOX - 1蛋白和mRNA表达的情况。结果 :未经诱导的THP - 1细胞不表达LOX - 1mRNA ;而经PMA诱导后 ,THP - 1细胞停止增殖 ,由单核细胞分化成为巨噬细胞 ,并表达LOX - 1mRNA。不同浓度的AngII作用诱导分化后的THP - 1细胞 2 4h,细胞LOX - 1蛋白和mRNA的表达呈浓度依赖性显著增加。同一浓度的AngII作用THP - 1细胞 ,可呈时间依赖性诱导LOX - 1蛋白和mRNA表达 ,其趋势是 3h左右开始增加 ,2 4h左右至最高峰 ,之后逐渐减低。结论 :经PMA诱导分化后的THP - 1细胞表达LOX- 1 ;AngII能明显增强分化后的THP - 1细胞表达LOX - 1蛋白和mRNA ,并呈浓度和时间依赖性。AngII这种作用可能是促进动脉粥样硬化发生、发?

关键词：血管紧张素Ⅱ 巨噬细胞受体 LDL

微囊化转mIFN-γ基因CHO细胞皮下移植促进荷瘤小鼠T_H1T_H2的漂移

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中华微生物学和免疫学杂志 2003年第3期23卷 195-198页

作者：潘月龙郑树孝作祥姚航平浙江大学肿瘤研究所浙江大学免疫学研究所杭州310009

目的　通过观察微囊化转mIFN γ基因CHO细胞皮下移植对荷瘤小鼠TH1 TH2类细胞因子的影响 ,进一步了解外源性IFN γ对TH1 TH2平衡的调节作用 ,同时验证微囊化基因工程细胞移植治疗恶性肿瘤的可行性。方法　将mIFN γ基因转染到正常细胞CH... 详细信息

目的　通过观察微囊化转mIFN γ基因CHO细胞皮下移植对荷瘤小鼠TH1 TH2类细胞因子的影响 ,进一步了解外源性IFN γ对TH1 TH2平衡的调节作用 ,同时验证微囊化基因工程细胞移植治疗恶性肿瘤的可行性。方法　将mIFN γ基因转染到正常细胞CHO ,然后进行微囊化 ,移植到荷瘤小鼠的皮下 ,2周后 ,测定小鼠血清TH1和TH2类细胞因子IFN γ、IL 2、IL 12、IL 4、IL 10的水平 ,并与对照组相比较。同时测量肿瘤的平均直径 ,以观察肿瘤的生长速度 ,并观察荷瘤小鼠的生存期。结果　经微囊化转mIFN γ基因CHO细胞皮下移植干预治疗后 ,小鼠血清TH1类细胞因子IFN γ、IL 2、IL 12水平明显升高 ,而TH2类细胞因子IL 4、IL 10变化不明显 ;小鼠肿瘤的生长速度明显减慢 ,生存期明显延长。结论　外源性IFN γ促进荷瘤小鼠TH1细胞的分化 ,使TH1 TH2向着TH1方向漂移 ;微囊化基因工程细胞的移植 ,有望替代基因工程药物 ,成为治疗恶性肿瘤的又一新平台。

关键词：微囊 IFN-γ TH1/TH2 肿瘤基因工程免疫学