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糖皮质激素广谱特异性单克隆抗体的制备及其ic-ELISA方法的建立

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食品科学 2019年第14期40卷 186-191页

作者：姚添淇劳翠瑜王士峰胡桂平张世伟广东省深圳市计量质量检测研究院国家营养食品质量监督检验中心

将氢化可的松半抗原HYD通过活化脂法与钥孔戚血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联获得氢化可的松完整抗原KLH-HYD,并对小鼠肌肉注射此抗原,使小鼠免疫;通过杂交瘤技术获得1株能够稳定分泌氢化可的松的单克隆抗体细胞株HYD-C1,... 详细信息

将氢化可的松半抗原HYD通过活化脂法与钥孔戚血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联获得氢化可的松完整抗原KLH-HYD,并对小鼠肌肉注射此抗原,使小鼠免疫;通过杂交瘤技术获得1株能够稳定分泌氢化可的松的单克隆抗体细胞株HYD-C1,并通过腹水制备大量抗体。将氢化可的松半抗原HYD和地塞米松半抗原DEX通过活化脂法分别与卵清蛋白(ovalbumin,OVA)偶联作为包被原,建立糖皮质激素的间接竞争酶联免疫吸附检测(indirect competitive-enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)方法。结果:在同源包被情况下氢化可的松灵敏度为1.63 ng/mL,异源包被情况下灵敏度为0.24 ng/mL;在交叉抑制实验中,异源策略中的各糖皮质激素灵敏度均高于同源策略中的结果,异源策略条件下很好地覆盖了本研究中所检测的糖皮质激素,使该抗体具备良好的广谱特异性。在异源策略添加回收实验中平均添加回收率在77.5%~111.3%之间,落在合理范围内,满足检测需求。结论:成功制备出氢化可的松单克隆抗体,建立了同源和异源策略糖皮质激素检测方法,结果发现异源策略中糖皮质激素的灵敏度高于同源策略,并使该方法具有更好的广谱特异性。

关键词：糖皮质激素同源策略异源策略广谱特异性间接竞争酶联免疫吸附(ic-ELISA)法

基于图像处理技术的泥石流照片中块石分割算法分析比较

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路基工程 2019年第1期 65-70页

作者：秦胜伍姚添淇吉林大学建设工程学院长春130026

近几年泥石流灾害多发,而泥石流粒度分析量测任务繁重。为此,结合计算机图像处理技术,将野外实地块石照片进行计算机处理。在处理前期,将照片中块石有效地分割出来是一个最重要问题。该项技术研究在当今地质领域中是一个新兴热门领域,... 详细信息

近几年泥石流灾害多发,而泥石流粒度分析量测任务繁重。为此,结合计算机图像处理技术,将野外实地块石照片进行计算机处理。在处理前期,将照片中块石有效地分割出来是一个最重要问题。该项技术研究在当今地质领域中是一个新兴热门领域,国内外的研究甚少,这项技术的研究现在处于萌芽阶段。有鉴于此,分析比较当今分割效果较好的3种算法并结合其他小算法,得出归一化分割算法结合分水岭算法,高低帽变换算法,beareaopen变换算法,能够较好地分割出块石,效果比较理想。

关键词：泥石流粒度分析计算机图像处理技术归一化分割算法高低帽变换算法 beareaopen变换算法

过敏性哮喘模型脱敏治疗前后小鼠肥大细胞的变化与其细胞因子的检测

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中国免疫学杂志 2014年第6期30卷 779-783页

作者：姚添淇吴莹莹杨小猛匡渤海刘志刚深圳大学过敏反应与免疫学研究所深圳518060 南昌大学医学院遗传教研室南昌330046

目的:制备粉尘螨粗抗原建立BALB/c小鼠哮喘模型,检测细胞因子并观察肥大细胞形态及脱颗粒的情况。方法:制备粉尘螨粗抗原,30只BALB/c小鼠随机均分为3组,阴性对照组(A组)、哮喘模型组(B组)和治疗组(C组)。A组始终使用PBS处理,B组和C组在... 详细信息

目的:制备粉尘螨粗抗原建立BALB/c小鼠哮喘模型,检测细胞因子并观察肥大细胞形态及脱颗粒的情况。方法:制备粉尘螨粗抗原,30只BALB/c小鼠随机均分为3组,阴性对照组(A组)、哮喘模型组(B组)和治疗组(C组)。A组始终使用PBS处理,B组和C组在第0、7和14天用50μg粉尘螨粗抗原+50μl明矾佐剂腹腔注射致敏。在第28天,A组和B组用PBS、C组用粉尘螨粗抗原(350μg/次)皮下注射免疫1周,隔天免疫1次,末次免疫1周后开始用50μg粉尘螨粗抗原滴鼻激发,每天1次,连续7次。末次激发24 h后进行气道高反应检测。末次激发48 h后处死小鼠取血,对小鼠进行肺泡灌洗收集肺泡灌洗液(BALF),无菌摘取肺组织和脾脏,分别进行肺组织病理切片与脾细胞培养。检测BALF和脾细胞上清中IL-4、IL-10和IFN-γ细胞因子水平,血清中IgE、组胺抗体水平,进行HE染色和甲苯胺蓝染色观察肺部炎症细胞浸润程度和肥大细胞脱颗粒状况。结果:与B组相比,C组气道高反应性和肺部病理症状减轻(P<0.01)。C组BALF中细胞计数结果显示与B组相比细胞总数和嗜酸粒细胞数明显减少(P<0.01)。与B组相比,C组的肥大细胞脱颗粒情况明显减轻,细胞形态稳定。与B组(IgE:1.905)相比,C组血清中抗原特异性IgE抗体水平(IgE:1.278)明显降低(P<0.01)。BALF细胞因子IL-4、IL-10和IFN-γ水平检测结果显示,与B组相比,C组BALF中IL-4水平明显降低接近A组值(P<0.01),而IL-10与A、B两组相比有明显升高(P<0.01),C组的IFN-γ也高于A、B两组(P<0.01)。C组脾细胞上清中IL-4明显低于B组(P<0.01),而IL-10明显高于B组(P<0.01),IFN-γ也明显高于B组(P<0.01)。BALF和血清中组胺水平结果显示,在BALF中,C组与B组相比略低(P<0.05),而在血清中检测出的组胺有明显降低(P<0.05)。结论:过敏性哮喘模型脱敏治疗后小鼠肥大细胞脱颗粒情况被抑制。

关键词：粉尘螨过敏性哮喘肥大细胞明矾佐剂

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牛奶蛋白改性纤维免疫层析快速鉴定方法

产业用纺织品 2019年第4期37卷 44-49页

作者：张世伟王云发王士峰姚添淇冯荣虎杨国武深圳市计量质量检测研究院国家营养食品质量监督检验中心

建立了一种快速、简单、准确的牛奶蛋白改性纤维鉴定方法。使用ESI(Electron Spray Ionization)/TOF(Time of Flight)质谱对牛奶蛋白改性纤维胰蛋白酶解肽进行分析,确定了牛奶蛋白改性纤维特征肽段,使用该特征肽段制备得到特异性单克隆... 详细信息

建立了一种快速、简单、准确的牛奶蛋白改性纤维鉴定方法。使用ESI(Electron Spray Ionization)/TOF(Time of Flight)质谱对牛奶蛋白改性纤维胰蛋白酶解肽进行分析,确定了牛奶蛋白改性纤维特征肽段,使用该特征肽段制备得到特异性单克隆抗体;将酪蛋白包被于T线,建立了针对牛奶蛋白改性纤维的免疫层析快速鉴定方法。该方法以7M尿素为提取剂,检出限为氨基酸质量分数为1.00%的牛奶蛋白改性纤维(相当于混纺4.00%牛奶蛋白改性纤维的纱线),检测时间不超过20min(含前处理)。该方法无需使用分析仪器,对常见的纤维没有非特异性识别,纤维的染色不会对检测结果造成干扰。

关键词：牛奶蛋白改性纤维免疫层析法纤维鉴定特征肽段

基于酶联免疫分析的大豆蛋白复合纤维鉴定方法

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毛纺科技 2019年第7期47卷 47-51页

作者：张世伟王云发王士峰姚添淇冯荣虎杨国武深圳市计量质量检测研究院国家营养食品质量监督检验中心

不同蛋白来源的改性纤维成本差异较大,为区分纤维的蛋白来源,建立了一种简单、准确的大豆蛋白复合纤维鉴定方法。根据大豆蛋白现有的氨基酸序列和蛋白交联的位点设计一段特征肽半抗原,将该特征肽段偶联载体蛋白,免疫实验动物,并制备得... 详细信息

不同蛋白来源的改性纤维成本差异较大,为区分纤维的蛋白来源,建立了一种简单、准确的大豆蛋白复合纤维鉴定方法。根据大豆蛋白现有的氨基酸序列和蛋白交联的位点设计一段特征肽半抗原,将该特征肽段偶联载体蛋白,免疫实验动物,并制备得到特异性单克隆抗体。将优化浓度的抗原包被于酶标版,抗体偶联辣根过氧化物酶,建立针对大豆蛋白复合纤维的酶联免疫吸附实验(ELISA)。该方法采用7M尿素作为提取剂,检出限为1.8%氨基酸含量的大豆蛋白复合纤维,检测时间不超过70 min(含前处理)。该方法对常见的纤维无非特异性识别,纤维染色不会对检测结果造成干扰。

关键词：大豆蛋白复合纤维酶联免疫吸附实验纤维鉴定特征肽段

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河鲀毒素胶体金免疫层析快速定量方法

食品科技 2017年第7期42卷 313-317页

作者：张世伟王士峰姚添淇冯荣虎杨国武赖心田深圳市计量质量检测研究院深圳518102

建立了河鲀毒素的胶体金免疫层析检测方法。所建立的河鲀毒素检测方法IC_(50)为48 ng/m L,线性范围为(10~160)ng/m L(y=-0.20lnx+1.23,R^2=0.98)。建立了基于磷酸盐缓冲液一步提取的河鲀毒素快速前处理方法,检测河鲀样本的最低检出限为2... 详细信息

建立了河鲀毒素的胶体金免疫层析检测方法。所建立的河鲀毒素检测方法IC_(50)为48 ng/m L,线性范围为(10~160)ng/m L(y=-0.20lnx+1.23,R^2=0.98)。建立了基于磷酸盐缓冲液一步提取的河鲀毒素快速前处理方法,检测河鲀样本的最低检出限为20μg/kg,平均相对标准偏差<20%(n=6)。该方法适用于热加工样品的检测,整个检测过程仅需10 min,且无需使用大型设备,为河鲀餐前快检提供了有力的技术手段。

关键词：河鲀毒素胶体金免疫层析

胶体金免疫层析法快速检测配方羊奶粉中的牛β-乳球蛋白

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食品工业科技 2018年第15期39卷 60-64页

作者：王士峰姚添淇冯荣虎胡桂平劳翠瑜张世伟深圳市计量质量检测研究院广东深圳518102

建立了一种可快速检测配方羊奶粉中牛β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-lg)的胶体金免疫层析检测方法。通过杂交瘤技术制备β-lg单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),半抑制浓度(50%inhibiting concentration,IC_(50))为5.87μg/mL。将胶体金标记的β-lg mAb包被于金标垫,β-lg和山羊抗小鼠IgG标记于硝酸纤维素膜(nitrocellulose membrane,NC膜)分别作为检测线(T线)和质控线(C线),开发了可检测β-lg的免疫层析试纸条。该试纸条对β-lg的检测限(limit of detection,LOD)值为50μg/mL,与其他基质成分均未产生有效交叉反应,对全脂山羊乳粉中掺杂脱脂牛奶粉(nonfat skim milk,NFSM)、脱盐乳清粉(desalted whey powder,DWP)和乳清蛋白粉(whey protein powder,WPP)的LOD值分别为5%、5%和0.1%。运用该方法对9个市售配方羊奶粉进行分析,检测结果与商品化酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒一致。该方法前处理快速简单,5 min即可裸眼判定结果,可用于配方羊奶粉商品的现场快速检测。

关键词：牛β-乳球蛋白免疫层析配方羊奶粉掺杂

过敏性哮喘模型小鼠肥大细胞的活化及细胞因子的变化

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南昌大学学报（医学版） 2014年第4期54卷 4-8,107页

作者：姚添淇吴莹莹杨小猛匡渤海刘志刚深圳大学过敏反应与免疫学研究所广东深圳518060 南昌大学基础医学院遗传教研室南昌330006

目的观察粉尘螨粗抗原建立的Bal b/c哮喘模型小鼠肥大细胞的活化及细胞因子的变化。方法将20只Bal b/c小鼠按随机数字表法分为2组:阴性对照组(A组,n=10),使用100μL PBS处理;哮喘模型组(B组,n=10),50μg粉尘螨粗抗原+50μL明矾佐剂分别... 详细信息

目的观察粉尘螨粗抗原建立的Bal b/c哮喘模型小鼠肥大细胞的活化及细胞因子的变化。方法将20只Bal b/c小鼠按随机数字表法分为2组:阴性对照组(A组,n=10),使用100μL PBS处理;哮喘模型组(B组,n=10),50μg粉尘螨粗抗原+50μL明矾佐剂分别在第0、7和14d腹腔注射致敏1次,第28天再用50μg粉尘螨抗原滴鼻激发,每天1次,连续7次。末次激发24h测定气道高反应;48h处死小鼠进行眼球取血,进行肺泡灌洗并收集右肺的肺泡灌洗液(BALF),无菌取肺HE染色病理观察、甲苯胺蓝染色观察肥大细胞脱颗粒,制取脾细胞及粉尘螨粗抗原刺激培养。采用ELISA法测定BALF和脾细胞培养上清IL-4、IL-10和IFN-γ以及血清IgE、组胺抗体含量。结果与A组相比:B组气道高反应性和肺部病理显著加重(P<0.01);BALF细胞总数和嗜酸粒细胞数显著增多(P<0.01);肥大细胞脱颗粒现象显著加重;血清抗原特异性IgE水平显著升高(P<0.01);BALF和脾细胞培养上清IL-4和IL-10水平显著升高(P<0.05或P<0.01),IFN-γ水平显著降低(P<0.01);BALF和血清组胺水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论过敏性哮喘模型中肥大细胞被活化。

关键词：粉尘螨过敏性哮喘肥大细胞明矾佐剂动物,实验小鼠