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彗星试验分析指标的进展和应用

卫生毒理学杂志 2004年第3期18卷 190-192页

作者：乔琰鲁志松姚汉超杨旭李睿华中师范大学生命科学学院湖北武汉430079

彗星试验(comet assay)也叫单细胞凝胶电泳技术(single cell gel electrophoresis),是由Ostling[1](1984)首次提出,是一种在单细胞水平上检测DNA损伤与修复的方法.彗星试验一般只需几千个细胞,适用于任何可制成单细胞悬液的真核细胞,所... 详细信息

彗星试验(comet assay)也叫单细胞凝胶电泳技术(single cell gel electrophoresis),是由Ostling[1](1984)首次提出,是一种在单细胞水平上检测DNA损伤与修复的方法.彗星试验一般只需几千个细胞,适用于任何可制成单细胞悬液的真核细胞,所需设备简单,试剂花费少且易得,而且快速、灵敏,从采样到结果分析只需数小时,整个过程可在1个工作日内完成,每109个相对原子质量DNA分子中可检测出0.1个DNA断裂.由于以上优点,彗星试验已被广泛应用于生物学、临床和毒理学等科研领域[2].

关键词：彗星试验分析指标颊黏膜细胞彗星图像

昆虫中肠Bt杀虫晶体蛋白毒素受体氨肽酶N的研究进展

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昆虫知识 2004年第3期41卷 203-207页

作者：刘凯于姚汉超杨红洪华珠华中师范大学昆虫学研究所武汉430079

鳞翅目昆虫中肠上皮细胞刷状缘膜 (BBM)上的Bt杀虫晶体蛋白毒素受体氨肽酶N(APN)的结构和位点密度的改变是昆虫对Bt毒素的主要抗性机制之一 ,该文简要综述了APN受体的研究进展。每种昆虫中肠上皮细胞中有数种APNs,彼此间同源性较高 ,其... 详细信息

鳞翅目昆虫中肠上皮细胞刷状缘膜 (BBM)上的Bt杀虫晶体蛋白毒素受体氨肽酶N(APN)的结构和位点密度的改变是昆虫对Bt毒素的主要抗性机制之一 ,该文简要综述了APN受体的研究进展。每种昆虫中肠上皮细胞中有数种APNs,彼此间同源性较高 ,其中部分APNs为Cry1A家族毒素的功能性受体。不同种类昆虫的APNs受体 ,甚至同一种昆虫的不同类型APNs,其所结合的毒素种类可能不同。APNs决定该昆虫对Cry1A类毒素的敏感程度差异。有些抗性昆虫的APNs基因编码区发生了多个点突变。

关键词：鳞翅目昆虫 Bt毒素中肠上皮细胞刷状缘膜受体抗性 BBM

苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒的感染对Sf9细胞周期的影响

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中国病毒学 2002年第2期17卷 132-136页

作者：王颖余泽华姚汉超陶德定陈曲侯华中师范大学昆虫研究所湖北武汉430079 华中科技大学同济附属医院分子实验中心湖北武汉430030

病毒的感染导致细胞内部发生一系列变化。应用流式细胞仪FACS的荧光检测 ,测出Sf9细胞完成整个周期循环大约需要 18h ,G1、S、G2 /M各时相的时间间隔约为 6h ;AcNPV感染Sf9细胞 12 18h ,细胞被抑制于G2 /M期 ;Sf9细胞同步于G1/S期后释... 详细信息

病毒的感染导致细胞内部发生一系列变化。应用流式细胞仪FACS的荧光检测 ,测出Sf9细胞完成整个周期循环大约需要 18h ,G1、S、G2 /M各时相的时间间隔约为 6h ;AcNPV感染Sf9细胞 12 18h ,细胞被抑制于G2 /M期 ;Sf9细胞同步于G1/S期后释放细胞并用AcNPV感染 ,12h后 ,2 / 3的细胞处于G2 /M期 ,1/

关键词：苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒感染 Sf9细胞周期流式细胞仪分析周期抑制

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甲醛对DNA损伤的彗星实验研究

实验生物学报 2004年第4期37卷 262-268页

作者：李睿鲁志松乔琰姚汉超于非非杨旭华中师范大学生命科学学院武汉430079

甲醛是一种遗传毒性物质。国内外学者的大量研究证实,甲醛可以引起DNA-DNA、DNA-蛋白质分子交联,但对于甲醛是否能够引起DNA 分子的断裂,学界却存在分歧。本实验以颊黏膜细胞作为实验材料,通过彗星实验对甲醛的遗传毒性——尤其是DNA ... 详细信息

甲醛是一种遗传毒性物质。国内外学者的大量研究证实,甲醛可以引起DNA-DNA、DNA-蛋白质分子交联,但对于甲醛是否能够引起DNA 分子的断裂,学界却存在分歧。本实验以颊黏膜细胞作为实验材料,通过彗星实验对甲醛的遗传毒性——尤其是DNA 分子断裂作用进行了系统的研究。结果显示甲醛在较低浓度(5μmol/L,7.5μmol/L,10μmol/L)时具有断裂作用,在较高浓度(15μmol/L,30μmol/L,50μmol/L)时则具有交联作用。根据本实验的结果,本文还首次论证了甲醛断裂作用的断裂峰值(7.5μmol/L)。

关键词：甲醛 DNA损伤彗星实验断裂峰值颊黏膜细胞遗传毒性

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斑节对虾组织的原代培养

华中师范大学学报（自然科学版） 1998年第2期32卷 210-214页

作者：刘凯于杨凯余泽华姚汉超熊光华陈曲侯华中师范大学昆虫学研究所

选用Ｌ－１５，添加１０％～２０％ＦＢＳ，渗透压用ＮａＣｌ等调节，ｐＨ７．０，在２８℃下，原代培养斑节对虾的多种组织，发现淋巴器官，造血器官和血淋巴的组织细胞在较宽范围的培养基渗透压条件下能贴壁生长形成细胞单层．每升培... 详细信息

选用Ｌ－１５，添加１０％～２０％ＦＢＳ，渗透压用ＮａＣｌ等调节，ｐＨ７．０，在２８℃下，原代培养斑节对虾的多种组织，发现淋巴器官，造血器官和血淋巴的组织细胞在较宽范围的培养基渗透压条件下能贴壁生长形成细胞单层．每升培养基添补７．５０ｇＮａＣｌ，０．３２ｇＫＣｌ，１．０２ｇＭｇＣｌ２６Ｈ２Ｏ，０．４９ｇＭｇＳＯ４７Ｈ２Ｏ，２．００ｇＣａＣｌ２２Ｈ２Ｏ和０．３０ｇ葡萄糖调节渗透压时。

关键词：斑节对虾原代培养血淋巴渗透压对虾病毒

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人造板材释放的甲醛所致遗传毒性的研究

环境科学学报 2003年第5期23卷 679-682页

作者：刘杰姚汉超陈茂林刘宏亮王光学严彦杨旭华中师范大学生命科学学院武汉430079

进行了两方面的DNA损伤实验 :(1)采用SCGE技术进行体外实验 ,观察甲醛对大鼠肝细胞和人血淋巴细胞DNA损伤作用 ;(2 )采用微核技术进行体内实验 ,观察甲醛对活体小鼠的骨髓嗜多染红细胞的微核率诱导作用 .结果表明在浓度为1 2 4mg m3 、3... 详细信息

进行了两方面的DNA损伤实验 :(1)采用SCGE技术进行体外实验 ,观察甲醛对大鼠肝细胞和人血淋巴细胞DNA损伤作用 ;(2 )采用微核技术进行体内实验 ,观察甲醛对活体小鼠的骨髓嗜多染红细胞的微核率诱导作用 .结果表明在浓度为1 2 4mg m3 、3.71mg m3 时 ,不论是体内还是体外实验 ,甲醛对细胞DNA都有明显的损伤作用 .SCGE实验结果还表明。

关键词：人造板材甲醛遗传毒性 DNA 损伤 SCGE技术微核技术人体空气污染装修

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蓖麻蚕血细胞的体外培养及病毒感染

华中师范大学学报（自然科学版） 1991年第4期25卷 479-483页

作者：余泽华姚汉超彭建新陈曲侯华中师范大学生物系

细胞在加有适量的植物凝血素(PHA)的TC-100和Grace培养基中生长情况要比在不加PHA的要好,尤其是在加有PHA的TC-100培养基中,细胞增殖尤为明显,许多团形细胞形成增殖中心,并且增殖较快,大约10天左右即基本长满瓶底进行第一次传代培养,原... 详细信息

细胞在加有适量的植物凝血素(PHA)的TC-100和Grace培养基中生长情况要比在不加PHA的要好,尤其是在加有PHA的TC-100培养基中,细胞增殖尤为明显,许多团形细胞形成增殖中心,并且增殖较快,大约10天左右即基本长满瓶底进行第一次传代培养,原代培养的细胞主要有两种类型:园形细胞和梭形细胞。传代培养细胞主要是园形细胞。多次实验结果表明,PHA对昆虫血淋巴中的某一类型细胞具有刺激增殖作用。笔者对这种现象进行了初步的讨论,用蓖麻蚕核型多角体病毒感染上述培养的细胞,通过光镜和电镜观察呈现出典型的细胞病理变化。

关键词：蓖麻蚕血细胞培养 NPV 植物凝血素

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蓖麻蚕NPV感染离体细胞的研究

蚕业科学 1991年第1期17卷 48-50页

作者：彭建新余泽华姚汉超陈曲侯华中师范大学昆虫学研究所

蓖麻蚕核型多角体病毒(NPV)是杆状病毒典型代表之一。建立蓖麻蚕NPV-昆虫细胞系统,对于研究病毒的增殖规律,阐述基因表达与调控等基础理论研究具有重要价值。特别是杆状病毒载体系统已成为杆状病毒分子生物学研究领域的热门课题。国内... 详细信息

蓖麻蚕核型多角体病毒(NPV)是杆状病毒典型代表之一。建立蓖麻蚕NPV-昆虫细胞系统,对于研究病毒的增殖规律,阐述基因表达与调控等基础理论研究具有重要价值。特别是杆状病毒载体系统已成为杆状病毒分子生物学研究领域的热门课题。国内已开始构建蓖麻蚕NPV表达载体,期望在细胞和活体水平表达外源基因。因此,选择和建立适宜的病毒宿主离体系统。

关键词：蓖麻蚕 NPV 感染离体细胞

大肠杆菌β－半乳糖苷酶基因在小菜蛾细胞中的表达

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华中师范大学学报（自然科学版） 1994年第1期28卷 91-94页

作者：杨凯余泽华施先宗姚汉超彭建新陈曲侯

用携带大肠杆菌β－半乳糖苷酶（β－ｇａｌ）基因的杆状病毒转移载体．ｐＡｃ３６０－β－ｇａｌ与苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）ＤＮＡ经钙磷沉淀法共转染小菜蛾细胞系（ＢＣＩＲＬ－ＰＸ２－ＨＮＵ２，Ｐｘ），利用Ｘ－... 详细信息

用携带大肠杆菌β－半乳糖苷酶（β－ｇａｌ）基因的杆状病毒转移载体．ｐＡｃ３６０－β－ｇａｌ与苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）ＤＮＡ经钙磷沉淀法共转染小菜蛾细胞系（ＢＣＩＲＬ－ＰＸ２－ＨＮＵ２，Ｐｘ），利用Ｘ－ｇａｌ空斑检测分析，β－ｇａｌ基因成功地插入ＡｃＮＰＶ基因组中，得到重组病毒Ａｃ－β－ｇａｌ，重组病毒在Ｐｘ细胞中表达出受ＡｃＮＰＶ多角体蛋白基因启动子控制的具有生物活性的外源基因表达产物──β－ｇａｌ．

关键词：大肠杆菌半乳糖苷酶菜蛾细胞