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转录因子Nrf2在纳米二氧化钛暴露所致小鼠静脉血栓形成中的作用及机制研究

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转录因子Nrf2在纳米二氧化钛暴露所致小鼠静脉血栓形成中的作用及...

作者：姚春阳中国医科大学

学位级别：硕士

目的:血栓形成(Thrombosis)是造成全球疾病负担的主要因素,也是导致死亡的主要原因。据统计,全世界约有四分之一的人死于血栓。除此之外,血栓形成也是缺血性心脏病、缺血性中风和静脉血栓栓塞症(Venous thrombosis embolism,VTE)的常见... 详细信息

目的:血栓形成(Thrombosis)是造成全球疾病负担的主要因素,也是导致死亡的主要原因。据统计,全世界约有四分之一的人死于血栓。除此之外,血栓形成也是缺血性心脏病、缺血性中风和静脉血栓栓塞症(Venous thrombosis embolism,VTE)的常见病理。VTE包括深静脉血栓(Deep venous thrombosis,DVT)形成和肺血栓栓塞症(Pulmonary embolism,PE)。在全球范围内,公众对血栓形成,尤其是VTE的认知度较低。近年来,纳米二氧化钛(Titanium dioxide nanoparticles,TiONPs)由于具有强催化活性、表面吸附、光催化活性和紫外线吸收等被广泛应用于生产生活领域。随着TiONPs的广泛应用,人们越来越关注其对人体健康的影响。相关研究发现,TiONPs可引起细胞内活性氧自由基(Reactive oxidation stress,ROS)的升高,进而导致细胞DNA损伤甚至死亡。ROS的升高也是静脉血栓形成机制之一。核转录因子NF-E2相关因子2(Nuclear factor erythroid-derived 2-like 2,NFE2L2,又称Nrf2)介导的适应性抗氧化反应体系是对抗氧化应激的多种细胞防御机制中,最重要且研究最多的调控机制。本研究旨在系统阐明转录因子Nrf2在TiONPs暴露所致小鼠静脉血栓形成中的作用及相关机制、理清TiONPs致红细胞毒性及其在静脉血栓形成危害发展中的作用,以期利用调控NRF2活性等途径为静脉血栓防治提供新的思路。研究方法:1.将不同基因型的小鼠随机分为四组:Nrf2-WT溶剂对照组(Nrf2-WT,Veh)、Nrf2-KO溶剂对照组(Nrf2-KO,Veh),Nrf2-WT造模组(Nrf2-WT,TiONPs)和Nrf2-KO造模组(Nrf2-KO,TiONPs)。用1%的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉小鼠,给予Veh组股静脉注射体重(g)×10/μL生理盐水作为溶剂对照,造模组股静脉注射体重(g)×10/μL TiONPs(25 mg/kg)注射剂作为造模组。注射1h后,摘单侧眼球取新鲜小鼠血液于商品化1.5 m L EDTA抗凝离心管和3%的肝素抗凝管中,4℃保存,不超过24 h,进行相关生化指标检测。2.体外血液样品的检测:使用对应试剂盒检测红细胞丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(Glutathione,GSH)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物(Glutathione Peroxidase,GPx)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)水平;通过流式细胞仪、血细胞分析仪检测红细ROS、磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)、微泡(Microvesicles,MV)及红细胞数量指标;通过光学显微镜、共聚焦显微镜观察小鼠红细胞形态学、红细胞聚集及红细胞PS的产生情况。结果:1.TiONPs能够诱导小鼠静脉血栓的形成,与Nrf2-WT组相比,Nrf2-KO组小鼠形成的静脉血栓重量更重,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.TiONPs并未诱导小鼠红细胞溶血的发生,但当给予TiONPs处理之后,Nrf2-KO组小鼠红细胞数量及红细胞压积与Nrf2-WT组相比有明显的降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。光学显微镜观察显示,小鼠红细胞形态发生了明显的改变,有较多棘突状红细胞生成。3.当给予TiONPs处理之后,Nrf2-KO组小鼠红细胞内ROS的生成与Nrf2-WT组相比,有明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05),但我们并没有发现小鼠红细胞膜MDA水平及红细胞内总GSH含量的变化。但是,我们发现,当给予TiONPs处理之后,与对照组相比,Nrf2-KO组小鼠红细胞内谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶的含量均有所降低,差异具有统计学意义(P<0.05),说明红细胞内抗氧化水平有所下降。4.当给予TiONPs处理之后,与对照组相比,Nrf2-KO组小鼠红细胞PS、MV的产生明显增加,小鼠红细胞MV中产生的PS也明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。同时我们发现,与对照组相比,Nrf2-KO组小鼠红细胞凝血酶的产生明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05),且通过共聚焦显微镜观察,进一步证实了这一点。于此同时,通过光学显微镜观察,我们还发现Nrf2-KO组小鼠红细胞聚集情况更加明显。结论:1、Nrf2的缺失能够加重TiONPs诱导的小鼠静脉血栓的形成;2、Nrf2的缺失促进TiONPs的暴露所导致的小鼠红细胞内活性氧的生成增加及抗氧化酶活性的下降,使红细胞形态学产生改变,并加重了红细胞膜PS的暴露,进而导致红细胞凝血酶的生成增多,以及加重红细胞聚集,最终导致静脉血栓形成增多。

关键词：纳米二氧化钛静脉血栓红细胞 Nrf2 氧化应激

非洲猪瘟病毒和猪圆环病毒2型双重SYBR GreenⅠ荧光PCR检测方法的建立

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中国兽医学报 2022年第5期42卷 862-866页

作者：于新友李天芝王金良姚春阳沈志强山东绿都生物科技有限公司山东滨州256600 山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600

为建立同时检测非洲猪瘟病毒(ASFV)和猪圆环病毒2型(PCV2)核酸的荧光PCR方法,试验根据GenBank中ASFV的p72基因和PCV2的ORF1基因序列,分别设计特异性引物,通过对加样体系和扩增程序的优化,建立了检测ASFV和PCV2的双重SYBR GreenⅠ荧光PC... 详细信息

为建立同时检测非洲猪瘟病毒(ASFV)和猪圆环病毒2型(PCV2)核酸的荧光PCR方法,试验根据GenBank中ASFV的p72基因和PCV2的ORF1基因序列,分别设计特异性引物,通过对加样体系和扩增程序的优化,建立了检测ASFV和PCV2的双重SYBR GreenⅠ荧光PCR方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行评价,最后对收集的临床样品进行检测。结果表明,最终确立的20μL反应体系中各引物最佳添加量为:F10.7μL、R11.0μL、F20.8μL和R21.5μL;优化后的扩增反应程序为:95℃预变性3 min;94℃变性5 s,54℃退火20 s(此处收集荧光),40个循环。该方法具有很好的特异性,不与其他常见猪病原体发生交叉反应。检测ASFV和PCV2的灵敏度分别可达5.6 copies/μL和3.2 copies/μL,T_(m)值的批内和批间变异系数均不高于1.0%,对14份临床样品的检测结果与参比方法一致。本研究所建立ASFV和PCV的双重SYBR GreenⅠ荧光PCR方法敏感性高,特异性好,可用于临床2种疾病的快速检测。

关键词：非洲猪瘟病毒猪圆环病毒 SYBR GreenⅠ 荧光PCR

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设施病虫害的多源信息融合检测方法研究

设施病虫害的多源信息融合检测方法研究

作者：姚春阳江苏大学

学位级别：硕士

设施农业是我国农业的重要支撑产业。温室内部温度适宜、相对湿度大、叶片较湿润,极易导致病虫害的爆发。由于大部分温室管理者缺乏科学系统的植物病理学知识,难以对作物病虫害爆发状况的严重程度做出准确的判断;同时,管理者盲目的农药... 详细信息

设施农业是我国农业的重要支撑产业。温室内部温度适宜、相对湿度大、叶片较湿润,极易导致病虫害的爆发。由于大部分温室管理者缺乏科学系统的植物病理学知识,难以对作物病虫害爆发状况的严重程度做出准确的判断;同时,管理者盲目的农药喷洒会导致了农药残留与病虫害难以有效地抑制,从而造成农作物减产及环境污染问题。为了对温室中病虫害现象进行虫害现象的预测及病害程度的快速判定,本试验以温室中常见虫害与病害为研究对象,采用逻辑回归的方法,建立了基于温湿度变化趋势的虫害逻辑回归预测模型;对黄瓜叶片病害特征进行了光谱信息分析,最后采用可见光光谱与太赫兹光谱融合的方法对病害叶片进行自动分级检测。主要研究结果为:（1）在收集温室环境信息与病虫害样本的基础上,分析了全年各月的虫害爆发天数与五月份温室温湿度及虫害发生数量的日变化,建立了基于温湿度变化趋势的虫害预警模型。根据病害的实际统计状况可以发现:虫害的发生随月份呈现出先上升后下降的趋势;除7、8月份以外,传感器预测的虫害爆发天数的变化趋势与实际统计趋势一致。五月份,白粉虱、潜叶蝇、和蚜虫的变化趋势与温湿度变化趋势一致,且白粉虱的数量最多。基于机器学习中常用的逻辑回归预测的虫害预警模型结果表明:三种虫害的验证集的预测正确率均在87.5%以上,且测试集的预测正确率均在77.5%以上,预测精度较高,可以应用于温室虫害的监测预警当中。（2）对采集到的病害叶片进行分类后,进行可见光光谱成像扫描实验。使用了逐步回归法与PCA算法对获取的数据进行特征波长的提取,得出白粉病的特征波长为690.5 nm、555 nm、420.9 nm、614 nm、467.8 nm;黄瓜霜霉病的特征波长为425.6 nm、700.8 nm、575.3 nm、635.1 nm、487.8 nm,与黄瓜霜霉病与白粉病的各前五个主成分。基于支持向量机算法建立了可见光光谱病害程度分级系统,测试集结果表明结果证明逐步回归法提取的特征模型较PCA效果更优,分类正确率分别高达77.27%与69.70%以上,Sigmoid函数在4种核函数中具有最高的分类正确率。（3）基于获取的太赫兹数据分析了病害叶片的时域光谱响应信息,进行了太赫兹系统病害检测分类的可行性分析。采用SPA与SCARS两种算法提取病害太赫兹敏感波段,并基于主成分分析法进行了太赫兹特征的提取。建立了基于太赫兹信息的病害SVM分类模型,并进行了测试验证,其中SPA算法的分类正确率达到了69.70%（白粉病）与71.43%（霜霉病）;结果表明:采用SPA法构建的太赫兹特征模型识别效果要优于SCARS法。（4）基于获取到的黄瓜病害叶片的高光谱及太赫兹特征信息,进行了多源信息的特征层融合,并通过支持向量机的多分类方式,合理的划分训练集和测试集后进行后续的多核函数的分类实验。结果表明,基于Sigmoid核函数和线性核函数的虫害分类识别具有较高的分类精度,其中多源信息融合的分类检测精度达到了94.42%（白粉病）与93.88%（霜霉病）。可用于黄瓜霜霉病与白粉病的病害程度自动识别,且多源信息融合的测试分类精度要高于单一信息模型的测试分类。

关键词：病虫害可见光光谱太赫兹病害分级检测多源信息融合

应用沈氏免疫增强剂拮抗氟苯尼考对鸡免疫抑制作用的研究

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应用沈氏免疫增强剂拮抗氟苯尼考对鸡免疫抑制作用的研究

作者：姚春阳吉林大学

学位级别：硕士

氟苯尼考（Florfenicol）又称氟甲砜霉素（Thi-amphenicol），为甲砜霉素的衍生物，是一种新型的氯霉素类广谱抗生素，目前是动物专用抗生素，具有吸收良好、抗菌谱广、在动物体内无残留或残留量较低、不存在致癌、致畸、致突变的“三... 详细信息

氟苯尼考（Florfenicol）又称氟甲砜霉素（Thi-amphenicol），为甲砜霉素的衍生物，是一种新型的氯霉素类广谱抗生素，目前是动物专用抗生素，具有吸收良好、抗菌谱广、在动物体内无残留或残留量较低、不存在致癌、致畸、致突变的“三致”作用，对动物无潜在性致障碍性贫血等优点，在兽医临床上得到了广泛应用，在畜禽细菌性疾病防治方面起到了关键性作用。但氟苯尼考作为甲砜霉素的衍生物，能够可逆性的抑制红细胞的生成，具有一定的免疫抑制作用，对动物机体法氏囊、胸腺、盲肠扁桃体等免疫器官在短期内可造成不可逆的轻度损害，还可导致疫苗免疫效果的失败。免疫增强剂是指能增强机体的非特异性免疫功能，增强机体免疫应答，提高机体抗病力的物质，也称免疫佐剂。本研究以SPF鸡、肉鸡为研究对象，通过检测血清中细胞因子的变化来了解动物机体的免疫抑制状态，全面研究氟苯尼考对鸡的免疫抑制作用及对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响，同时研究免疫增强剂对氟苯尼考免疫抑制的消除作用，为临床合理用药和疾病预防免疫提供技术支持。本课题的研究内容主要包括以下三个方面：第一部分：将70只10日龄SPF鸡分七组（A、B1、B2、B3，C1、C2、C3组），A组为空白对照组，B1、B2、B3组分别在饮水中添加水溶性氟苯尼考100mg/L、200mg/L、400mg/L，C1、C2、C3组分别在饲料中添加氟苯尼考预混剂50mg/kg体重、100mg/kg体重、200mg/kg体重。11-17日龄各给药组连续给药7d。在10、15、22、29、43、57日龄分别采集血清，测定IL-10和IFN-γ含量水平。结果表明水溶性氟苯尼考中剂量（200mg/L）和高剂量（400mg/L）、氟苯尼考预混剂中剂量（100mg/kg体重）和高剂量（200mg/kg体重）均呈现免疫抑制状态，其血清中IL-10、IFN-γ含量明显升高。第二部分：氟苯尼考对SPF鸡新城疫疫苗免疫作用的影响及应用沈氏免疫增强剂拮抗氟苯尼考对SPF鸡免疫抑制作用的研究。将50只14日龄SPF鸡分成五组（A、B、C、D、E组）。A组饲料中拌喂氟苯尼考预混剂200mg/kg体重;B组饮水中添加水溶性氟苯尼考400mg/L;C组饲料中拌喂氟苯尼考预混剂200mg/kg体重，22-28日龄饮水中添加沈氏免疫增强剂1g/L;D组饮水中添加水溶性氟苯尼考400mg/L，22-28日龄饮水中添加沈氏免疫增强剂1g/L;E组为空白对照。15-22日龄各给药组连续给药7d，各组均在22日龄免疫鸡新城疫活疫苗1羽份。在14、22、29、36、43、50、60日龄分别采集血清，测定IL-10和IFN-γ含量及ND抗体水平。结果表明，两种剂型的氟苯尼考饲喂SPF鸡后，均对ND疫苗的免疫效果产生影响，使抗体滴度水平较正常低;沈氏免疫增强剂对SPF雏鸡血清中IL-10、IFN-γ的分泌产生了抑制作用，能够显著降低血清中的IL-10、IFN-γ含量，消除氟苯尼考的副作用。第三部分：氟苯尼考对肉鸡新城疫疫苗免疫作用的影响及应用沈氏免疫增强剂拮抗氟苯尼考对肉鸡免疫抑制作用的研究。将50只7日龄AA肉鸡分成五组（A、B、C、D、E组）。A组饲料中拌喂氟苯尼考预混剂200mg/kg体重;B组饮水中添加水溶性氟苯尼考400mg/L;C组饲料中拌喂氟苯尼考预混剂200mg/kg体重，18-24日龄饮水中添加沈氏免疫增强剂1g/L;D组饮水中添加水溶性氟苯尼考400mg/L，18-24日龄饮水中添加沈氏免疫增强剂1g/L;E组为空白对照。11-18日龄各给药组连续给药7d，各组均在7、21日龄免疫鸡新城疫活疫苗1羽份。在7、10、18、24、31、38日龄分别采集血清，测定IL-10和IFN-γ含量及ND抗体水平。结果表明，两种剂型的氟苯尼考饲喂肉鸡后，均对ND疫苗的免疫效果产生影响，使抗体滴度水平较正常低;沈氏免疫增强剂对肉鸡血清中IL-10、IFN-γ的分泌产生了抑制作用，能够显著降低血清中的IL-10、IFN-γ含量，消除氟苯尼考的副作用。

关键词：氟苯尼考免疫增强剂拮抗氟苯尼考免疫抑制细胞因子新城疫疫苗抗体水平

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和谐社会视角下企业诚信问题研究

和谐社会视角下企业诚信问题研究

作者：姚春阳河南农业大学

学位级别：硕士

中国作为世界上著名的文明古国之一，有着悠久的历史和灿烂的的文化，中华民族的祖先在漫长的历史长河中逐渐培育和形成的推崇诚信、讲求友爱的优良品德。历来都受到人们的敬仰和青睐。但在我国社会转型的背景下，由于受到经济、政治、... 详细信息

中国作为世界上著名的文明古国之一，有着悠久的历史和灿烂的的文化，中华民族的祖先在漫长的历史长河中逐渐培育和形成的推崇诚信、讲求友爱的优良品德。历来都受到人们的敬仰和青睐。但在我国社会转型的背景下，由于受到经济、政治、文化和社会等多种因素的影响，与社会主义经济发展相适应的社会主义思想道德体系尚未完全建立，导致了人们的价值观念、思想道德观念及诚实守信意识发生了偏差，社会规范出现亏空，诚信缺失现象在某些领域已呈泛滥之势，企业诚信缺失严重，它极大地阻碍了社会主义经济的健康发展与和谐社会的构建。因此，在和谐社会视角下研究企业诚信问题就具有了积极的现实意义。鉴于此本文主要对和谐社会下企业诚信的问题进行了研究，为和谐社会视角下企业诚信建设路径选择提供了理论依据和现实基础。整篇文章论述共分为四部分：第一部分：阐述企业诚信与和谐社会的相关内容。从诚信内涵分析入手，讲述了企业诚信内涵及基本特征，突出强调企业诚信是社会诚信建设的重点。紧接着把和谐社会作为另一个切入点进行阐述，讲明了和谐社会的内涵及基本特征。最后重点讲述企业诚信对构建和谐社会的重要意义。第二部分：针对影响和谐社会建设的企业诚信的现状进行阐述。首先论述了我国企业诚信建设方面取得的成就：企业诚信意识不断提高，企业诚信的竞争优势显著增强，企业职业道德进一步提升。其次阐述了由于企业诚信的缺失所带来的一系列问题。这也是当前我国企业诚信缺失的主要表现。第三部分:针对我国企业诚信缺失的问题，重点分析了其内部和外部原因。企业内部原因包括经济体制转型期的利益驱动、企业管理者诚信意识淡薄、企业员工诚信教育自觉性缺乏等方面。外部原因涉及到政府行为不规范，法律、法规不健全，信息不对称等方面，以上这些因素都是造成了当前我国企业诚信缺失状况的原因所在。第四部分：在和谐社会视角下，加强对企业诚信建设的路径选择进行了探讨，主要对策包括:加强企业诚信文化建设，明确诚信理念;营造企业诚信社会氛围，加快政府职能转变，强化信息公开，完善企业诚信的法律体系，构筑社会诚信氛围;建立企业诚信运行机制，完善企业诚信制度，强化企业社会责任，加强企业伦理道德建设;加大社会监督惩罚力度，充分发挥行业协会的监管作用，利用现代媒体手段的舆论监督作用;借鉴西方发达国家企业诚信建设经验。本文的创新之处在于:论文的中心观点紧密联系中国特色社会主义现代化建设实际，时刻关注党和国家推进企业改革发展的重大课题，并从研究诚信，重点突出企业诚信问题，提高社会诚信意识，提升全体公民的道德素质入手，以改过去人们多从产权制度、信用制度等角度探讨企业诚信缺失原因，而从伦理道德和企业文化等角度来对企业诚信缺失成因进行分析，相应地找出解决对策，从而把企业诚信建设作为一个中心命题来研究，去探索符合社会主义和谐社会的企业诚信制度建设。

关键词：诚信企业诚信和谐社会建设

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巴斯德毕赤酵母表达系统的研究进展

黑龙江畜牧兽医 2008年第2期 26-28页

作者：姚春阳沈旭庄金秋山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600

第一个被选择用于表达外源蛋白的是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae),人们对其基因操作和生物学特性比较了解,长期用于发酵的经验也显示其安全可靠.然而实践证明,酿酒酵母表达系统也有其局限性,如缺乏强有力的启动子、分泌效率差、... 详细信息

第一个被选择用于表达外源蛋白的是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae),人们对其基因操作和生物学特性比较了解,长期用于发酵的经验也显示其安全可靠.然而实践证明,酿酒酵母表达系统也有其局限性,如缺乏强有力的启动子、分泌效率差、表达菌株不够稳定、表达质粒易于丢失等,也不是理想的外源基因表达宿主.

关键词：毕赤酵母表达系统巴斯德毕赤酵母外源基因表达酿酒酵母生物学特性蛋白质表达生物学领域外源蛋白

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羊病诊治实用技术

2018年

作者：刘吉山姚春阳肖跃强

来源：南通市图书馆图书评论

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猪增生性肠炎实验室诊断方法研究进展

养猪 2022年第6期 121-128页

作者：庄金秋梅建国姚春阳张颖李峰山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600

猪增生性肠炎(PPE)是由胞内劳森氏菌(LI)感染引起的一种以回肠和结肠隐窝内未成熟的肠细胞发生腺瘤样增生为特征的肠道传染病。PPE常引起猪只生长发育阻滞,饲料报酬率严重降低。该病已在全球范围内猪场流行,且其发病率呈上升趋势,给养... 详细信息

猪增生性肠炎(PPE)是由胞内劳森氏菌(LI)感染引起的一种以回肠和结肠隐窝内未成熟的肠细胞发生腺瘤样增生为特征的肠道传染病。PPE常引起猪只生长发育阻滞,饲料报酬率严重降低。该病已在全球范围内猪场流行,且其发病率呈上升趋势,给养猪业造成了严重的危害和巨大的经济损失,是影响世界养猪业发展的重要疾病之一。目前国内对该病的研究比较薄弱,应引起足够的重视。文章从组织病理学、细菌分离与鉴定、血清免疫学和分子生物学等方面综述了LI的最新诊断方法研究进展,分析了各种方法的优缺点与实用性,以期为LI感染的鉴定和PPE的有效防控提供参考。

关键词：猪增生性肠炎诊断研究进展

50mg/kg(L)氟苯尼考对鸡IL-10与INF-γ表达量的影响

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黑龙江畜牧兽医 2013年第11期 153-155页

作者：姚春阳王金良沈志强丁壮吉林大学畜牧兽医学院长春130000 山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600

为研究50 mg/kg(L)剂量氟苯尼考对鸡机体免疫机能的影响,试验以14日龄SPF鸡、肉鸡为研究对象,给其口服和或在其饮水中添加50 mg/kg(L)氟苯尼考,停药后免疫鸡新城疫活疫苗。结果表明:口服50 mg/kg氟苯尼考组及饮水中添加50 mg/L氟苯尼考... 详细信息

为研究50 mg/kg(L)剂量氟苯尼考对鸡机体免疫机能的影响,试验以14日龄SPF鸡、肉鸡为研究对象,给其口服和或在其饮水中添加50 mg/kg(L)氟苯尼考,停药后免疫鸡新城疫活疫苗。结果表明:口服50 mg/kg氟苯尼考组及饮水中添加50 mg/L氟苯尼考组在白细胞介素-10(IL-10)含量、γ-干扰素(IFN-γ)含量、新城疫抗体效价方面与同日龄对照组相比均差异不显著(P>0.05)。说明服用50 mg/kg(L)氟苯尼考对鸡机体免疫机能不产生抑制作用。

关键词：氟苯尼考白细胞介素-10(IL-10) γ-干扰素(IFN-γ)