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甘胆口服液对副溶血性弧菌引起的对虾肝胰腺损伤坏死病防治效果

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科技通报 2024年第3期40卷 36-40,78页

作者：程安达冯东岳郑阿钦孙艳霞黄雷赵宇杰薛兴华姚嘉赟王秀敏北京生泰尔科技股份有限公司/国家企业技术中心/北京市中兽药工程技术研究中心/动物疾病防治新药技术北京市工程实验室北京102600 全国水产技术推广总站北京100125 农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室/浙江省鱼类健康与营养重点实验室/浙江省淡水水产研究所浙江湖州313001

副溶血弧菌引起的对虾急性肝胰腺坏死病是南美白对虾养殖危害最大的疾病之一,但目前缺乏有效的绿色防控手段。为探究甘胆口服液对南美白对虾急性肝胰腺坏死病的防治作用,在副溶血性弧菌人工感染对虾4 h后,通过投喂不同剂量(0.5、1.0、2.... 详细信息

副溶血弧菌引起的对虾急性肝胰腺坏死病是南美白对虾养殖危害最大的疾病之一,但目前缺乏有效的绿色防控手段。为探究甘胆口服液对南美白对虾急性肝胰腺坏死病的防治作用,在副溶血性弧菌人工感染对虾4 h后,通过投喂不同剂量(0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL/kg饲料)的甘胆口服液进行治疗,连续用药1周后观察对虾肝胰腺病理损伤情况,测定血淋巴中丙氨酸氨基转移酶(ALT)与天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量,统计对虾发病率和感染死亡率。结果表明:甘胆口服液以2.0~5.0 mL/kg饲料的剂量给药7 d,可改善副溶血性弧菌感染引起的对虾肝胰腺细胞受损情况,有效抑制肝胰腺损伤导致的AST、ALT含量的异常升高,并将感染对虾死亡率降低至12%以下。甘胆口服液对副溶血性弧菌引起的对虾急性肝胰腺坏死病具有较好的治疗效果。

关键词：南美白对虾甘胆口服液副溶血性弧菌急性肝胰腺坏死病防治效果

黄颡鱼小RNA病毒qPCR检测方法的建立与应用

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病毒学报 2023年第4期39卷 1062-1071页

作者：穆雪姣潘晓艺周可欣蔺凌云姚嘉赟沈锦玉浙江海洋大学舟山316022 浙江省淡水水产研究所、农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室、浙江省鱼类健康与营养重点实验室湖州313001

黄颡鱼小RNA病毒(Yellow catfish Picornavirus,YCPrV)是黄颡鱼重要的致死性病原,本研究旨在建立一种快速、精准的YCPrV检测方法。基于YCPrV 22426⁃8毒株RdRp基因编码区序列设计特异性引物和探针,通过质粒标准品和标准曲线的制作,反应... 详细信息

黄颡鱼小RNA病毒(Yellow catfish Picornavirus,YCPrV)是黄颡鱼重要的致死性病原,本研究旨在建立一种快速、精准的YCPrV检测方法。基于YCPrV 22426⁃8毒株RdRp基因编码区序列设计特异性引物和探针,通过质粒标准品和标准曲线的制作,反应体系和反应条件的优化,灵敏度和特异性的测试,建立一种检测YCPrV的TaqMan荧光定量PCR(qPCR)方法。结果显示,在绘制的qPCR标准曲线中,拷贝数与Ct值具有良好的线性关系,相关系数(R^(2))为0.9974,扩增效率为88.98%,最高检测灵敏度为5.09×10^(0)拷贝。该方法对来自黄颡鱼、鲫鱼、鲤鱼和虾的其它8种病毒无扩增信号,仅YCPrV具有扩增曲线,对临床样品阳性检出率比普通PCR高12.28%。自然感染黄颡鱼组织中YCPrV检测结果发现,病毒载量从高到低依次为肠、肾、心、肝、脾、鳃和脑。以上结果表明,本研究建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法具有良好的特异性、灵敏度和可重复性,临床检测YCPrV时,建议优选肾和心作为检测靶标组织。YCPrV qPCR方法的建立,可为YCPrV的精准定量检测和疾病早期预防提供有利手段。

关键词：黄颡鱼小RNA病毒病毒性出血病 TaqMan荧光定量PCR

鲤疱疹病毒2型(CyHV-2)灭活疫苗制备及其免疫效力测定

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海洋与湖沼 2022年第5期53卷 1143-1150页

作者：潘晓艺蔺凌云朱悦姚嘉赟尹文林刘忆瀚陈凡沈锦玉浙江省淡水水产研究所农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省鱼类健康与营养重点实验室浙江湖州313001 浙江海洋大学水产学院浙江舟山316022 杭州市农业技术推广中心浙江杭州310001

鲫造血器官坏死病是由鲤疱疹病毒2型(CyHV-2)引起的危害我国养殖鲫鱼(Carassius auratus)最严重的病毒性疾病。为制备有效预防鲫造血器官坏死病的灭活疫苗,以CyHV-2代表流行株CNDF-TB2015为疫苗株,以CSC细胞系进行病毒增殖,并采用不同... 详细信息

鲫造血器官坏死病是由鲤疱疹病毒2型(CyHV-2)引起的危害我国养殖鲫鱼(Carassius auratus)最严重的病毒性疾病。为制备有效预防鲫造血器官坏死病的灭活疫苗,以CyHV-2代表流行株CNDF-TB2015为疫苗株,以CSC细胞系进行病毒增殖,并采用不同浓度的病毒对不同规格鲫鱼进行攻毒,建立攻毒模型。结果表明,培养的病毒滴度达10^(10)TCID_(50)/mL,以4×10^(7)TCID_(50)/尾的剂量腹腔注射感染体重300 g的鲫鱼可造成100%的死亡率。对病毒灭活剂甲醛、β-丙内酯和BEI灭活条件进行筛选优化,对疫苗免疫佐剂763A、IMS1312、铝胶和M402进行筛选,结果表明,浓度为10^(8.3) TCID_(50)/mL的病毒液最佳灭活条件为终浓度10 mmol/L的BEI 37℃灭活72 h,疫苗制备最佳佐剂为水佐剂IMS1312。对灭活疫苗的最小免疫剂量、最佳免疫剂量和有效免疫产生期进行测定,结果表明,要获得70%以上保护率的最小免疫剂量为8×10^(6)TCID_(50)/尾,最佳免疫剂量为4×10^(7)TCID_(50)/尾,在免疫4周后保护率可达80%,5周后保护率达到100%。制备的灭活疫苗为鲫造血器官坏死病的免疫预防提供了有力手段,也为其他水产动物病毒灭活疫苗的制备提供了借鉴。

关键词：鲤疱疹病毒2型鲫造血器官坏死病灭活疫苗免疫效力

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拟态弧菌最新研究进展

黑龙江畜牧兽医 2022年第13期 32-37页

作者：孙玉峰蔺凌云单晓枫钱爱东姚嘉赟康元环吉林农业大学动物医学院/动物生产及产品质量安全教育部重点实验室长春130118 浙江省淡水水产研究所农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室/浙江省鱼类健康与营养重点实验室浙江湖州313001

拟态弧菌(Vibrio mimicus,V.mimicus)是一种重要的人和水生动物共患病原菌,该菌不仅能引起水生动物的溃疡病、腹水病等,也能引起人的腹泻、中耳炎等,严重威胁公共卫生安全。文章主要从病原学、临床特征、国内外流行现状、诊断检测技术... 详细信息

拟态弧菌(Vibrio mimicus,V.mimicus)是一种重要的人和水生动物共患病原菌,该菌不仅能引起水生动物的溃疡病、腹水病等,也能引起人的腹泻、中耳炎等,严重威胁公共卫生安全。文章主要从病原学、临床特征、国内外流行现状、诊断检测技术、致病机理、防控技术等方面对拟态弧菌进行综述,旨在为有效防控拟态弧菌提供参考。

关键词：拟态弧菌临床特征毒力因子致病机制防控技术

SCC-37 37℃驯化的稳定性及其在常见病毒培养中的应用

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水产学报 2023年

作者：巩金鹏赵颖陈雪兰蔺凌云姚嘉赟穆雪姣周可欣王丛旭沈锦玉潘晓艺上海海洋大学水产与生命学院浙江省淡水水产研究所农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省鱼类健康与营养重点实验室湖州市南浔区农业技术推广服务中心

为建立能快速增殖且对常见病毒敏感的鳜鱼细胞系。实验利用已建立的鳜脊髓组织细胞系SCC，采用梯度血清逐步驯化的方式，建立一个连续细胞系SCC-37，分析该连续细胞系的来源、支原体污染、生长特性和冻存后细胞活力，评估其对传染性脾... 详细信息

为建立能快速增殖且对常见病毒敏感的鳜鱼细胞系。实验利用已建立的鳜脊髓组织细胞系SCC，采用梯度血清逐步驯化的方式，建立一个连续细胞系SCC-37，分析该连续细胞系的来源、支原体污染、生长特性和冻存后细胞活力，评估其对传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)、鳜虹彩病毒(SCRaV)和鳜弹状病毒(SCRV)的敏感性。结果显示，该细胞系SCC-37已连续培养30代，稳定的生长条件为L-15+10%NBCS、37 ℃培养；通过鳜28S rRNA基因分析其来源于鳜，支原体检测证实SCC-37无支原体污染；病毒敏感性结果表明，ISKNV、SCRaV和SCRV可在SCC-37中稳定增殖和传代，培养的病毒滴度在103.4至109.6TCID50/mL之间，电镜观察可见大量病毒颗粒。总之，新驯化的SCC-37为分离、鉴定和增殖病毒以及疫苗制备提供了重要工具。

关键词：鳜鳜脊髓组织细胞系 37℃驯化生长特性敏感性

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水产品中地西泮残留来源和应对措施

科学养鱼 2022年第9期44卷 51-52页

作者：尹文林姚嘉赟曲焕韬浙江省淡水水产研究所中国渔业协会水产养殖投入品分会浙江湖州313001 中国长江三峡集团有限公司中华鲟研究所湖北宜昌443100

近年来,我国不同地区、多种淡水水产品如鲢、鳙、鲤等均有检出地西泮残留的报道。虽然检出量较低,但《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》(GB 31650-2019)规定,地西泮属“可用作治疗、不得在动物性食品中检出”。地西泮残留检出... 详细信息

近年来,我国不同地区、多种淡水水产品如鲢、鳙、鲤等均有检出地西泮残留的报道。虽然检出量较低,但《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》(GB 31650-2019)规定,地西泮属“可用作治疗、不得在动物性食品中检出”。地西泮残留检出后将直接判定该批水产品不合格,因此地西泮残留品种、残留量以及潜在的危害引起了社会广泛关注,也使水产业蒙受了巨大经济损失。

关键词：最大残留限量淡水水产品动物性食品地西泮水产业中兽药应对措施检出量

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哈士蟆油复方抗疲劳作用研究

中成药 2008年第1期30卷 120-122页

作者：王高学姚嘉赟西北农林科技大学动物科技学院陕西杨陵712100

哈士蟆油（Oviductus Ranae，OR），系蛙科动物中国林蛙（Rana temporaria chensinesis David）雌蛙的输卵管干制品。其别名有林蛙油、田鸡油、哈什蟆油、蛤蚂油等。

关键词：哈士蟆油复方正交设计法抗疲劳

基于SecA基因的鰤鱼诺卡氏菌qPCR检测方法的建立及进化分析

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水生生物学报 2023年第10期47卷 1553-1560页

作者：周可欣潘晓艺蔺凌云黄雷穆雪姣王丛旭姚嘉赟劳顺健沈锦玉上海海洋大学水产与生命学院上海201200 浙江省淡水水产研究所农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省鱼类健康与营养重点实验室湖州313001 湖州市农业科技发展中心湖州313000

为对诺卡氏菌病进行快速早期诊断,建立了鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)TaqMan qPCR检测方法。以鰤鱼诺卡氏菌的管家基因SecA为靶标设计引物和探针,对反应条件进行优化,制作标准曲线,进行灵敏性、重复性和特异性测试,并将建立的方法... 详细信息

为对诺卡氏菌病进行快速早期诊断,建立了鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)TaqMan qPCR检测方法。以鰤鱼诺卡氏菌的管家基因SecA为靶标设计引物和探针,对反应条件进行优化,制作标准曲线,进行灵敏性、重复性和特异性测试,并将建立的方法应用于临床样品的检测。结果表明,优化后,引物和探针终浓度分别为0.3和0.1μmol/L,退火延伸温度60℃时,qPCR在9.85×1010—9.85×100copies内呈良好的线性关系,灵敏度最高达9.85 copies;重复性实验结果显示,组间和组内变异系数均小于1%;特异性结果表明,对无乳链球菌、弗氏柠檬酸杆菌和维氏气单胞菌等13种病菌均无扩增曲线;临床对42份大口黑鲈样品进行检测,结果表明,qPCR检出率比普通PCR提高14.24%;对发病大口黑鲈的组织及结节部位检测显示,结节部位菌载量大幅高于非结节部位,最高相差1000倍;SecA基因分析结果显示,SecA基因在传代中和种内高度保守,种间具有一定的离散性,是个很好的用于诺卡氏菌种鉴定的靶基因。研究建立的鰤鱼诺卡氏菌qPCR检测方法灵敏性高、特异性强、重复性好,可用于对鰤鱼诺卡氏菌病的早期诊断和定量检测,为诺卡氏菌病的早诊断早治疗提供了有效手段。

关键词：鰤鱼诺卡氏菌 qPCR 诺卡氏菌病大口黑鲈

siRNA干扰对鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF57基因表达的影响

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水生生物学报 2022年第4期46卷 537-544页

作者：金李萍潘晓艺蔺凌云姚嘉赟曹铮尹文林赖迎迢陶家发刘忆瀚沈锦玉上海海洋大学水产与生命学院上海201200 浙江省淡水水产研究所农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省鱼类健康与营养重点实验室湖州313001 中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部渔用药物创制重点实验室广州510380

研究通过在异育银鲫脊髓细胞系(Spinal cord tissue cell lines of Carassius auratus gibelio,CSC)中对鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)ORF57进行RNA干扰,以探究其对CyHV-2病毒复制的影响。首先,以FAM标记的异育银鲫β-actin的siRNA进行CSC细胞转染条件的优化,再将针对CyHV-2 ORF57基因设计的3条siRNA,转染CSC细胞,并进行病毒感染,评估siRNA对病毒复制和致细胞病变的影响。转染条件优化结果显示,在siRNA浓度为80 nmol/L,转染液维持24h后更换维持液,β-actin基因表达量最低且观察到的荧光点数量最多。而ORF57-siRNAs干扰结果显示,ORF57-siRNA-2组表现出了较强的抑制效果,在接毒48h时,ORF57-siRNA-2处理组的ORF57基因表达量降到相对于Mock组的33.55%(P<0.01),并且各ORF57-siRNA组都表现出了延缓CyHV-2致细胞病变的时间和强度,抑制时间可达120h。TCID_(50)结果显示,不同组的ORF57-siRNAs均能降低病毒滴度,其中ORF57-siRNA-2将病毒原液TCID_(50)108.487/mL下降至106.776/mL。研究结果表明,干扰ORF57的表达可大大降低CyHV-2的致细胞病变力和复制率,ORF57在CyHV-2复制与致细胞病变中起重要作用。本研究为CyHV-2基于siRNA技术的抗病毒治疗和弱毒株的改造提供了借鉴。

关键词：鲤疱疹病毒Ⅱ型 RNA干扰 ORF57 小干扰RNA 异育银鲫脊髓细胞系 TCID_(50)