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养血安胎方调节自噬改善复发性自然流产小鼠子宫内膜上皮细胞间质转化及蜕膜化的作用研究

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中国药物警戒 2024年第5期21卷 547-552页

作者：姚伟洁闫仕祺袁偲偲贡磊磊冯欣首都医科大学附属北京妇产医院北京妇幼保健院药事部北京100026 首都医科大学中医药学院中医络病研究北京市重点实验室北京100069

目的探讨养血安胎方调节自噬改善复发性自然流产(RSA)小鼠子宫内膜上皮细胞-间质转化(EMT)及蜕膜化的作用。方法构建肾虚血瘀型RSA小鼠以及正常妊娠小鼠,正常妊娠小鼠分别腹腔注射2 mg·kg^(-1)雷帕霉素(Rapa)溶液或15 mg·kg^(-1)3-甲... 详细信息

目的探讨养血安胎方调节自噬改善复发性自然流产(RSA)小鼠子宫内膜上皮细胞-间质转化(EMT)及蜕膜化的作用。方法构建肾虚血瘀型RSA小鼠以及正常妊娠小鼠,正常妊娠小鼠分别腹腔注射2 mg·kg^(-1)雷帕霉素(Rapa)溶液或15 mg·kg^(-1)3-甲基腺嘌呤(3-MA)溶液进行干预;另设置相同方法处理的RSA小鼠、Rapa及3-MA干预的小鼠组,并同时灌胃给药浓度为28.08 g·kg^(-1)的养血安胎溶液进行干预,收集小鼠子宫内膜。通过Western blot法测定小鼠子宫内膜EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、N-cadherin和Fibronectin的表达,以及蜕膜化相关蛋白BMP2、HOXA10、PRL和IGFBP1的表达。结果与正常妊娠组比较,RSA组小鼠子宫内膜中E-cadherin的蛋白表达显著增加,Vimentin、N-cadherin、Fibronectin、BMP2、HOXA10、PRL和IGFBP1的蛋白表达均显著降低;Rapa组小鼠子宫内膜中E-cadherin的蛋白表达显著增加,Vimentin、N-cadherin、Fibronectin、BMP2、HOXA10、PRL和IGFBP1的蛋白表达均显著降低;3-MA组小鼠子宫内膜中E-cadherin的蛋白表达显著降低,HOXA10的蛋白表达显著增加。与RSA组比较,RSA+养血安胎组小鼠子宫内膜中E-cadherin的蛋白表达显著降低,Vimentin、N-cadherin、Fibronectin、BMP2、HOXA10、PRL和IGFBP1的蛋白表达均显著增加。与Rapa组比较,Rapa+养血安胎组小鼠子宫内膜中E-cadherin的蛋白表达显著降低,Vimentin、N-cadherin、Fibronectin、BMP2、HOXA10、PRL和IGFBP1的蛋白表达均显著增加。结论养血安胎方能够抑制自噬,从而促进妊娠小鼠子宫内膜的EMT及蜕膜化过程,降低流产率。

关键词：养血安胎方雷帕霉素 3-甲基腺嘌呤复发性自然流产自噬胚胎植入上皮细胞-间质转化蜕膜化中药复方小鼠

养血安胎方对复发性自然流产小鼠胎盘血管生成与自噬的调控作用研究

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中国药物警戒 2024年第4期21卷 371-377页

目的探讨养血安胎方治疗复发性自然流产(RSA)的分子机制。方法构建肾虚血瘀型RSA小鼠模型,养血安胎方干预后收集小鼠胎盘,苏木素伊红(HE)染色、马松(Masson)染色观察小鼠胎盘病理变化、免疫组化法测定小鼠胎盘增殖细胞核抗原(PCNA)、纤... 详细信息

目的探讨养血安胎方治疗复发性自然流产(RSA)的分子机制。方法构建肾虚血瘀型RSA小鼠模型,养血安胎方干预后收集小鼠胎盘,苏木素伊红(HE)染色、马松(Masson)染色观察小鼠胎盘病理变化、免疫组化法测定小鼠胎盘增殖细胞核抗原(PCNA)、纤维蛋白原(Fibrinogen)及CD34蛋白的表达,Western blot法测定小鼠胎盘血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮细胞生长因子受体2(p-VEGFR2)、p62,Beclin 1,LC3Ⅰ和LC3Ⅱ的蛋白表达,透射电镜观察小鼠胎盘的超微结构。结果与RSA组比较,RSA+养血安胎组小鼠取材时体重显著增加,胚胎吸收率显著降低;HE染色、Masson染色及PCNA、Fibrinogen蛋白表达显示小鼠胎盘发育状况明显改善,透射电镜结果与p62、Beclin1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的蛋白表达显示小鼠胎盘自噬水平明显降低,CD34、VEGFA和p-VEGFR2蛋白表达显示胎盘血管生成明显增加。结论养血安胎方能够改善RSA小鼠的胎盘发育状况,促进胎盘血管生成,其方式可能与抑制自噬体与溶酶体的融合,从而抑制自噬有关。

关键词：养血安胎方复发性自然流产血管生成自噬肾虚血瘀中药复方小鼠胎盘

养血安胎方调节自噬治疗复发性自然流产小鼠的机制研究

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中国药物警戒 2024年第4期21卷 378-385页

目的探讨养血安胎方调节自噬影响胎盘血管生成进而治疗复发性自然流产(RSA)的机制。方法对妊娠小鼠分别使用雷帕霉素、3-甲基腺嘌呤及养血安胎方进行干预,收集小鼠胎盘,苏木素伊红(HE)染色、马松(Masson)染色观察妊娠小鼠的病理改变,免... 详细信息

目的探讨养血安胎方调节自噬影响胎盘血管生成进而治疗复发性自然流产(RSA)的机制。方法对妊娠小鼠分别使用雷帕霉素、3-甲基腺嘌呤及养血安胎方进行干预,收集小鼠胎盘,苏木素伊红(HE)染色、马松(Masson)染色观察妊娠小鼠的病理改变,免疫组化法测定增殖细胞核抗原(PCNA)、Fibrinogen及CD34蛋白的表达,Western blot法测定血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮细胞生长因子受体2(p-VEGFR2)、p62、Beclin1、LC3Ⅰ和LC3Ⅱ蛋白的表达,透射电镜观察胎盘的超微结构。结果与正常妊娠组比较,雷帕霉素(Rapa)组小鼠取材时体重明显减轻,胚胎吸收率明显增加,HE染色、Masson染色及PCNA与Fibrinogen蛋白表达显示小鼠胎盘发育变差;透射电镜结果与p62、Beclin1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达显示小鼠胎盘自噬水平明显增加;CD34、VEGFA和p-VEGFR2蛋白表达显示胎盘血管生成异常;与Rapa组比较,Rapa+养血安胎组小鼠取材时体重明显增加,胚胎吸收率明显降低,HE染色、Masson染色及PCNA与Fibrinogen蛋白表达显示小鼠胎盘发育得到明显改善,透射电镜结果与p62、Beclin1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达显示小鼠胎盘自噬水平明显降低,CD34、VEGFA和p-VEGFR2蛋白表达显示胎盘血管生成增加。结论养血安胎方通过抑制自噬体和溶酶体的融合,从而抑制自噬,改善妊娠小鼠的胎盘发育状况,促进胎盘的血管生成,从而降低了流产率。

关键词：复发性自然流产自噬血管生成养血安胎方中药复方雷帕霉素 3-甲基腺嘌呤蛋白表达

基于网络药理学和分子对接探讨养血安胎颗粒治疗复发性流产分子作用机制

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中国药物警戒 2024年第4期21卷 366-370页

作者：李心蕾贡磊磊王晓霞张雪艳赵涵姚伟洁袁偲偲冯欣首都医科大学附属北京妇产医院北京妇幼保健院药事部北京100026 北京市肛肠医院药剂科北京100120

目的基于网络药理学和分子对接技术研究养血安胎颗粒治疗复发性流产(RSA)作用机制。方法通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)和中医药整合药理学研究平台(TCMIP)数据库收集养血安胎颗粒主要化学成分及其映射靶标,通过OMIM、GeneC... 详细信息

目的基于网络药理学和分子对接技术研究养血安胎颗粒治疗复发性流产(RSA)作用机制。方法通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)和中医药整合药理学研究平台(TCMIP)数据库收集养血安胎颗粒主要化学成分及其映射靶标,通过OMIM、GeneCards、Drugbank、PharmGkb、TTD数据库收集RSA疾病靶标,并通过在线工具draw venn diagram分析药物与疾病靶标交集,导入STRING数据库,分析共有靶标相互作用关系(PPI),并对其进行生物信息学分析。此外,根据Degree值分析养血安胎颗粒治疗RSA的核心靶标,采用分子对接技术,研究靶标与化学成分之间结合度,验证网络药理学分析结果。结果共收集养血安胎颗粒化学成分70个和靶标236个,疾病靶标去重后获得453个。通过交集分析共获得66分共有靶标。PPI互作分析发现IL6、MMP9、TNF、IL1B、IL10等靶标是养血安胎颗粒治疗RSA核心靶标。生物信息学富集分析发现,这些共有靶标主要作用于TNF信号通路、HIF-1信号通路、FoxO信号通路、雌激素信号通路等信号通路。进一步的分子对接结果表明,度值(degree)靠前的靶标MMP9与芍药苷、芝麻素、槲皮素和山柰酚对接良好。尤其是芍药苷对接结果优于阳性对照。结论通过网络药理学和分子对接分析,发现养血安胎颗粒中主要活性成分通过作用于MMP9影响多条信号通路发挥治疗RSA作用。

关键词：养血安胎颗粒复发性流产网络药理学分子对接作用机制多维网络分析

胎盘血管生成异常致复发性自然流产及其中医药治疗的研究进展

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西部中医药 2023年第1期36卷 139-145页

作者：姚伟洁冯欣首都医科大学附属北京妇产医院北京妇幼保健院北京100006

对胎盘血管生成异常致复发性自然流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)及其中医药治疗的研究进行综述,指出胎盘血管生成异常是导致复发性自然流产的重要原因之一,血管生成因子能够促进或抑制血管生成,参与胎儿发育过程,miRNA在胎... 详细信息

对胎盘血管生成异常致复发性自然流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)及其中医药治疗的研究进行综述,指出胎盘血管生成异常是导致复发性自然流产的重要原因之一,血管生成因子能够促进或抑制血管生成,参与胎儿发育过程,miRNA在胎盘血管生成中的作用已得到证实,通过调控血管生成因子及miRNA进而调控胎盘血管生成可以作为临床治疗RSA的方法之一;外泌体能够通过携带蛋白质、信使核糖核酸(mRNA)和微小核糖核酸(miRNA)至受体细胞,实现对受体细胞的调节,并已被证明对胎盘血管生成具有调控作用,从而影响胎儿的生长发育;中医药能够通过调控血管生成治疗RSA,但需进一步深入探讨。

关键词：自然流产复发性血管生成血管生成因子 miRNA 外泌体中医药

木丹颗粒通过miR-146a调控对糖尿病周围神经病变大鼠TLR4通路的影响

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西部中医药 2022年第10期35卷 48-52页

作者：姚伟洁赵香妍首都医科大学附属北京妇产医院北京妇幼保健院北京100006 北京市和平里医院

目的:探讨木丹颗粒通过miR-146a调控对糖尿病周围神经病变大鼠TLR4通路的影响。方法:1)动物实验。40只SD大鼠中,设10只为空白对照组,其余制备糖尿病模型大鼠后分为模型组,α-硫辛酸组和木丹颗粒组,每组10只。灌胃给予相应药物,12周后处... 详细信息

目的:探讨木丹颗粒通过miR-146a调控对糖尿病周围神经病变大鼠TLR4通路的影响。方法:1)动物实验。40只SD大鼠中,设10只为空白对照组,其余制备糖尿病模型大鼠后分为模型组,α-硫辛酸组和木丹颗粒组,每组10只。灌胃给予相应药物,12周后处死并收集坐骨神经。2)细胞实验。将RSC96细胞分为25、150 mM组,150 mM+α-硫辛酸组和150 mM+木丹颗粒(10%,1%和0.1%)组,分别给予相应含药血清孵育48 h后,收集细胞。3)RT-PCR法测定坐骨神经和RSC96细胞的miR-146a表达,RT-PCR法和Western blot法测定坐骨神经和RSC96细胞中TRAF6和IRAK1 mRNA及蛋白表达。结果:动物实验中,与空白对照组比较,模型组miR-146a表达显著降低(P<0.01),IRAK1和TRAF6 mRNA及蛋白表达均显著升高(P<0.01);与模型组比较,木丹颗粒组miR-146a表达显著升高(P<0.01),IRAK1和TRAF6 mRNA及蛋白表达均显著降低(P<0.01)。细胞实验中,与25 mM组比较,150 mM组miR-146a表达显著降低(P<0.01),IRAK1和TRAF6 mRNA及蛋白表达均显著升高(P<0.01);与150 mM组比较,木丹颗粒含药血清组miR-146a表达显著升高(P<0.01),10%和1%木丹颗粒含药血清组IRAK1和TRAF6 mRNA及蛋白表达均显著降低(P<0.01、P<0.05),0.1%木丹颗粒含药血清组IRAK1 mRNA表达显著降低(P<0.05)。结论:木丹颗粒通过促进miR-146a的表达,抑制IRAK1和TRAF6的表达,从而调控TLR4相关通路,抑制炎症反应,防治糖尿病周围神经病变。

关键词：糖尿病周围神经病变雪旺细胞木丹颗粒 miR-146a TLR4通路动物实验

中成药说明书妊娠期风险分类调查及中药成分风险分析

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中国药学杂志 2022年第12期57卷 991-995页

作者：杜博冉史湘君冯欣阴赪宏姚伟洁贡磊磊王雅丽金清首都医科大学附属北京妇产医院/北京妇幼保健院北京100026 首都医科大学附属北京朝阳医院北京100020 北京市和平里医院北京100013 大安健康科技有限公司北京100044

目的通过对505种中成药说明书进行妊娠期风险调查,同时相关中药组分进行风险分析,分析妊娠风险尚不明确中成药的潜在风险,为进一步开展中成药妊娠期风险评估提供借鉴及参考。方法收集并调查505种中成药药物说明书的妊娠期风险分类描述,... 详细信息

目的通过对505种中成药说明书进行妊娠期风险调查,同时相关中药组分进行风险分析,分析妊娠风险尚不明确中成药的潜在风险,为进一步开展中成药妊娠期风险评估提供借鉴及参考。方法收集并调查505种中成药药物说明书的妊娠期风险分类描述,同时根据2020年版《中国药典》一部、《中药药物警戒》《中药药性论》及其他中药典籍中对涉及中成药中的中药组分进行分析,评估中药组分风险对于中成药妊娠期风险的影响。应用涉及中药妊娠分类,对尚不明确药物进行初步分析。结果所涉及505种中成药药品说明书中,妊娠风险尚不明确的药物共240种,妊娠风险描述中,禁用及忌用/不推荐使用的中成药约占总体的16.6%,慎用/权衡利弊约为20.79%、可用/在医师或药师指导下使用合计约占总体的15.05%。根据2020年版《中国药典》一部、《中药药物警戒》《中药药性论》及其他中药典籍的去重组合共涉及禁忌中药组分872种,敏感度为0.83(0.76~0.89),《中国药典》所涉及的禁忌中药组分最少共42种,其特异度为0.96(0.91~0.99)。妊娠期风险尚不明确的中成药中,涉及禁用成分(x类)及忌用成分(d类)占比约为19.17%,涉及成分安全(a类)、可用(b类)及慎用(c类)合计约占26.67%。结论目前中成药妊娠期风险分类体系尚不完善,通过中药成分风险分析能够有效对已有中成药妊娠期风险评估体系进行补充。

关键词：中成药妊娠风险中药组分潜在风险风险评估

养血安胎颗粒抑制外泌体中miR-16促进血管生成的作用研究

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环球中医药 2022年第5期15卷 745-751页

作者：姚伟洁杜博冉李潇冯欣首都医科大学附属北京妇产医院北京妇幼保健院药事部北京100006 首都医科大学中医药学院中医络病研究北京市重点实验室

目的探讨养血安胎颗粒调控血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)以促进血管生成的机制。方法使用miR-16 mimic及养血安胎含药血清干预人绒毛膜癌细胞(JEG-3),差速离心法收集JEG-3细胞分泌的外泌体,并与人脐... 详细信息

目的探讨养血安胎颗粒调控血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)以促进血管生成的机制。方法使用miR-16 mimic及养血安胎含药血清干预人绒毛膜癌细胞(JEG-3),差速离心法收集JEG-3细胞分泌的外泌体,并与人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)共培养,CCK-8法测定JEG-3细胞和HUVECs的细胞活力,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)法测定JEG-3细胞、外泌体和HUVECs中miR-16水平,蛋白免疫印迹法(western blot,WB)测定JEG-3细胞和HUVECs中VEGF和磷酸化血管内皮细胞生长因子受体2(phosphorylated VEGF receptor 2,p-VEGFR2)的蛋白表达。结果养血安胎含药血清能够增加JEG-3细胞的活力;转染miR-16 mimic后,JEG-3细胞、外泌体和HUVECs中miR-16水平增加,VEGF和p-VEGFR2蛋白表达降低,HUVECs细胞活力降低;养血安胎含药血清干预后,JEG-3细胞、外泌体和HUVECs中miR-16水平降低,VEGF和p-VEGFR2蛋白表达升高,HUVECs细胞活力升高。结论养血安胎颗粒抑制JEG-3细胞外泌体中miR-16水平,进一步抑制HUVECs中的miR-16水平,进而增加HUVECs中VEGF和p-VEGFR2的蛋白表达,促进血管生成。

关键词：养血安胎颗粒复发性自然流产血管生成外泌体 miR-16 血管内皮生长因子

糖络宁通过外泌体调控IRE1α诱导细胞凋亡的作用机制研究

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西部中医药 2023年第4期36卷 12-15页

作者：姚伟洁李潇冯欣许利平首都医科大学附属北京妇产医院北京妇幼保健院北京100006 首都医科大学中医药学院中医络病研究北京市重点实验室北京100069

目的:探讨糖络宁(以下简称TLN)通过外泌体对雪旺细胞(schwann cells,SCs)IRE1α诱导的细胞凋亡的调控作用。方法:将30只SD大鼠分为空白组、模型组和糖络宁组,每组10只。除空白组外,其余各组大鼠腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)... 详细信息

目的:探讨糖络宁(以下简称TLN)通过外泌体对雪旺细胞(schwann cells,SCs)IRE1α诱导的细胞凋亡的调控作用。方法:将30只SD大鼠分为空白组、模型组和糖络宁组,每组10只。除空白组外,其余各组大鼠腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导糖尿病模型。空白组及模型组灌胃给予蒸馏水,TLN组灌胃给予糖络宁溶液,12周后处死大鼠并收集血清。差速离心法分离血清中的外泌体,将SCs分为3组并分别与3组大鼠血清外泌体共培养。收集SCs,提取细胞中的总蛋白和总RNA,采用Western blot法测定TRAF2、p-JNK、Bcl-2、Bax、Cyto C和cleaved-Caspase-3的蛋白表达,采用RT-PCR法测定ASK1和Caspase-9的mRNA表达。结果:与空白组比较,模型组TRAF2、p-JNK、Bax、Cyto C和cleaved-Caspase-3的蛋白表达显著升高,Bcl-2的蛋白表达显著降低,ASK1和Caspase-9的mRNA表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,TLN组TRAF2、p-JNK、Bax、Cyto C和cleaved-Caspase-3的蛋白表达显著降低,Bcl-2的蛋白表达显著升高,ASK1和Caspase-9的mRNA表达显著降低(P<0.01)。结论:糖络宁能够通过外泌体抑制IRE1α-TRAF2-ASK1复合体,进而抑制JNK的磷酸化,然后分别抑制Bax表达,促进Bcl-2表达,以及抑制Cyto C、Caspase-9和Caspase-3的表达,从而抑制细胞凋亡。

关键词：糖络宁外泌体 IRE1α 细胞凋亡大鼠动物试验