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猪生长激素单克隆抗体的制备及应用

猪生长激素单克隆抗体的制备及应用

作者：夏青娟吉林农业大学

学位级别：硕士

猪生长激素(porcine growth hormone，pGH)又称猪促生长素(porcine somatotropin，pST)，是由猪脑垂体前叶以脉冲方式分泌的约191个氨基酸的肽类激素，是调节猪正常生长和发育的主要激素之一。它能促进葡萄糖吸收、核酸与蛋白质的合成... 详细信息

猪生长激素(porcine growth hormone，pGH)又称猪促生长素(porcine somatotropin，pST)，是由猪脑垂体前叶以脉冲方式分泌的约191个氨基酸的肽类激素，是调节猪正常生长和发育的主要激素之一。它能促进葡萄糖吸收、核酸与蛋白质的合成以及脂肪的分解，提高猪的生长速度，饲料报酬和瘦肉率。近年来随着杂交瘤技术的发展及pGH单克隆抗体的成功制备，为建立pGH ELISA测定技术提供了可能。酶联免疫吸附测定法(ELISA)由于具有无放射性污染、特异性强、灵敏度高、测定周期短、对实验室条件要求不高等许多优点，因而受到人们的普遍关注和重视。灵敏的ELISA检测方法的建立，为开展猪生长发育及生殖的GH调控及GH基因转移和表达的研究提供了一种行之有效的GH检测手段，对内分泌学的研究进程具有重要意义和应用价值。本试验采用猪生长激素(pGH)免疫家兔制备了抗血清，经饱和硫酸铵粗提得到兔抗pGH的IgG抗体，SDS-PAGE鉴定抗体的纯度，紫外分光光度计测定蛋白含量达到21mg／mL;选取BALB／c小鼠，以猪生长激素纯品为抗原，进行免疫，脾细胞与sp2／0细胞融合筛选杂交瘤细胞。获得了三株稳定分泌猪生长激素单克隆抗体的杂交瘤株，分别为3B、2D和2G。和本课题组以前保存的其他三株单抗(1A、1A和1B)同时进行效价、亲和力、Ig亚类及抗原识别位点等特性的鉴定，筛选出一株亲和力和效价都较好的单克隆抗体(1A)。双抗体夹心法采用一株抗pGH的单克隆抗体(1A)为包被抗体，以识别和结合待检标本中的pGH，兔抗pGH多抗可与pGH分子的另外表位结合，后加入HRP(辣根过氧化物酶)标记的山羊抗兔IgG作为酶标抗体，并催化底物显色，根据标准品OD值绘制标准曲线，在标准曲线上查出待检标本中的pGH含量，成功地建立了pGH的双抗体夹心ELISA法。标准品中pGH含量在15.62ng／mL～1.0μg／mL范围内，浓度对数与其OD值呈线性关系，最低检测限为7.81ng／mL。此方法具有快速、灵敏、特异的特点。本研究意在利用猪生长激素纯品去免疫BALB／c小鼠，进而构建具有稳定分泌猪生长激素单抗的杂交瘤株，再利用猪生长激素单克隆抗体建立一种快速、灵敏、特异的检测猪血液及组织中生长激素的方法，进行品种间比较，为动物的品种选育提供参考指标，并为其早期育种提供依据，还可以为猪生长激素节律性分泌的机理研究奠定理论和物质基础。

关键词：猪生长激素单克隆抗体多克隆抗体双抗体夹心ELISA

氢氧化铝佐剂与甲型肝炎病毒抗原吸附条件的优化及吸附产物免疫原性评价

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中国生物制品学杂志 2023年第12期36卷 1425-1429页

作者：王艺博夏青娟王昕雷徐涵禹白鸽郑书君徐艳玲长春生物制品研究所有限责任公司疫苗二室吉林长春130012

目的优化氢氧化铝Al(OH)_3佐剂与甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)抗原的吸附条件,并评价吸附产物的免疫原性。方法选取缓冲盐终摩尔浓度(0.01、0.02和0.04 mol/L)、pH(5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0)、氯化钠(NaCl)终摩尔浓度(0.07... 详细信息

目的优化氢氧化铝Al(OH)_3佐剂与甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)抗原的吸附条件,并评价吸附产物的免疫原性。方法选取缓冲盐终摩尔浓度(0.01、0.02和0.04 mol/L)、pH(5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0)、氯化钠(NaCl)终摩尔浓度(0.075、0.13、0.15、0.17、0.45、0.75、1.0 mol/L)、混合方式(稀释后混合、不稀释直接混合)及滴加顺序[HAV原液滴加至Al(OH)_3溶液、Al(OH)_3溶液滴加至HAV原液]进行单因素筛选。以Al(OH)_3吸附率为评价指标,通过正交试验对筛选出的因素进行优化。采用最优及次优组合条件制备的吸附产物经腹腔免疫NIH小鼠(雌雄各半),0.5 mL/只,每组10只,于免疫后28 d,经眼球或心脏采血,分离血清,HAV抗体定性检测试剂盒(ELISA法)检测HAV抗体水平,小鼠血清抗体阳转率评价吸附产物的免疫原性。结果单因素筛选结果表明,缓冲盐终摩尔浓度、pH、NaCl终摩尔浓度对吸附效果可产生明显影响(F分别为6.582、14.007、8.612,P均0.05),确定缓冲盐终摩尔浓度为0.01及0.02 mol/L,pH为5.5~7.0、NaCl终摩尔浓度为0.13~0.17 mol/L。正交试验确定影响吸附效果因素依次为:缓冲盐终摩尔浓度>pH>NaCl终摩尔浓度,最优组合为:pH 6.3+缓冲盐终摩尔浓度0.01 mol/L+NaCl终摩尔浓度0.15 mol/L,次优组合为:pH 5.8+缓冲盐终摩尔浓度0.02 mol/L+NaCl终摩尔浓度0.17 mol/L。最优及次优组合制备吸附产物免疫小鼠的血清抗体阳转率均为100%。结论优化条件制备的吸附产物具有良好的免疫原性,本研究为甲肝灭活疫苗研究奠定了基础。

关键词：甲型肝炎病毒氢氧化铝佐剂吸附条件免疫原性

4个猪种IGF-1基因核心启动子区的克隆及生物信息学分析

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吉林农业大学学报 2013年第5期35卷 587-590页

作者：马强秦洋夏青娟郝林琳刘松财于浩吉林大学动物科学学院长春130062 长春生物制品研究所长春130062

为了探索IGF-1基因的启动子结构特征对猪体长性状的影响,应用PCR方法从藏猪、巴马小型猪、野猪、军牧一号猪的基因组DNA中分别克隆测序了IGF-1基因启动子区序列,并结合生物信息学手段分析了不同品种猪之间启动子区转录因子结合位点数目... 详细信息

为了探索IGF-1基因的启动子结构特征对猪体长性状的影响,应用PCR方法从藏猪、巴马小型猪、野猪、军牧一号猪的基因组DNA中分别克隆测序了IGF-1基因启动子区序列,并结合生物信息学手段分析了不同品种猪之间启动子区转录因子结合位点数目和序列特征的差异,发现在IGF-1基因启动子区,巴马小型猪与藏猪、东北野猪、军牧一号猪相比,缺失CdxA、Nkx-2 2个转录因子结合位点,但比藏猪、东北野猪多了1个MZF1转录因子结合位点;藏猪、东北野猪与军牧一号猪相比,缺失1个MZF1转录因子结合位点,邻接法构建的分子进化树发现,藏猪与巴马小型猪亲缘关系最近,与东北野猪亲缘关系相对较近,但与军牧一号猪亲缘关系最远。结果表明:猪的IGF-1基因启动子结构在不同体长猪种上存在一定差异。

关键词：猪 IGF-1基因启动子区生物信息学

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数字视译眼动追踪:兴趣区与绩效

外语教学 2024年第4期 79-85页

作者：李夏青康志峰上海大学外国语学院复旦大学外国语言文学学院

本研究以体认口译学为研究理据,以所教授的2021—2022第一学期选修英语口译的90名(有效被试84名)本科生学生译员为研究对象,以多模态嵌入式眼动跟踪靶域(TD)兴趣区记录为研究方法,探究眼动跟踪兴趣区与英汉双向数字视译绩效的相关度以... 详细信息

本研究以体认口译学为研究理据,以所教授的2021—2022第一学期选修英语口译的90名(有效被试84名)本科生学生译员为研究对象,以多模态嵌入式眼动跟踪靶域(TD)兴趣区记录为研究方法,探究眼动跟踪兴趣区与英汉双向数字视译绩效的相关度以提高学生译员数字视译绩效。通过Eye Link 1000眼动实验对眼动跟踪TD占位兴趣区实验数据解析、E-Prime和SPSS统计计算以及TD占位兴趣区与绩效检验,得出以下结论:1)被试TD占位兴趣区所呈现颜色深度与被试平均注视时长成正比;2)兴趣区红色或橘红色的深度与平均绩效成反比;3)成绩较好的被试TD占位兴趣区相对分散,TD占位兴趣区呈浅红色或浅橘红色;4)成绩较差的被试TD占位兴趣区相对集中,TD占位兴趣区呈深红色或深橘红色。进而析出,数字视译语码转换、双语技能转换、认知心理等因素是影响学生译员英汉双向数字视译绩效的主要因素。鉴于此,采取相应的数字视译语码转换策略、熟练双语技能转换策略、认知灵动与情绪抑制策略等来增强学生译员英汉双向数字视译绩效。该研究对数字视译增效具有一定的参考价值。

关键词：体认口译学眼动追踪数字视译兴趣区绩效

电凝法制作C57/BL6J小鼠局灶性脑缺血模型的评价

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南方医科大学学报 2024年第1期44卷 100-107页

作者：康赟赟唐东宁张健夏青天津中医药大学实验针灸学研究中心天津301617 天津中医药大学医学技术学院天津301617

目的通过改良电凝法制作小鼠局灶性大脑中动脉阻塞(MCAO)模型的方法、筛选适用于模型小鼠的评价指标,为开展脑缺血相关的长期研究提供模型参考。方法选用C57/BL6J雄性小鼠46只,随机分为模型组(n=34)和对照组(n=12)。采用凝血器永久性凝... 详细信息

目的通过改良电凝法制作小鼠局灶性大脑中动脉阻塞(MCAO)模型的方法、筛选适用于模型小鼠的评价指标,为开展脑缺血相关的长期研究提供模型参考。方法选用C57/BL6J雄性小鼠46只,随机分为模型组(n=34)和对照组(n=12)。采用凝血器永久性凝断小鼠右侧大脑中动脉制备大脑中动脉闭塞模型。通过激光散斑血流成像仪监测造模前、造模后20min、造模后1d的脑血流灌注量;通过Longa评分、mNSS评分、平衡木行走实验、圆筒实验、转角实验评价小鼠造模后1、7、14d的神经功能;采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测量缺血灶梗死范围,以评估模型是否成功及各指标之间的相关性。Western blotting检测缺血侧皮质中质纤维酸性蛋白(GFAP)、脑源性神经营养因子(BDNF)、双肾上腺皮质激素(DCX)蛋白表达。结果激光散斑血流成像仪监测显示,大脑中动脉电凝灼烧后缺血侧的脑血流量明显降低;与假手术组相比,模型组造模后1、7、14d的Longa评分和mNSS评分明显升高(P<0.05);平衡木行走实验结果显示,与假手术组相比,模型组造模后1、7、14d评分均降低(P<0.05);圆筒实验结果显示,与术前相比,造模后1、7、14d模型组的前肢使用不对称性均增加(P<0.05);转角实验结果显示,与术前相比,造模后1、7、14d模型组的侧向指数均有提高(P<0.05)。TTC染色显示,假手术组大脑组织无损伤,模型组的梗死灶在手术侧大脑的感觉运动皮层区和尾壳核。Westernblotting结果显示,与假手术组相比,模型组缺血侧脑皮层中GFAP的蛋白表达水平呈高表达,模型组1d(P<0.05)、模型组7d(P<0.01)、模型组14d(P<0.01)的GFAP蛋白表达水平升高;DCX的蛋白表达水平在造模后1、7、14d升高(P<0.05);BDNF的蛋白表达水平升高,模型组1d的BDNF蛋白表达水平在缺血后显著升高(P<0.05)。结论将电凝位置由MCA与大脑下静脉交界的远端位置改为MCA与嗅束交界内侧2mm段部位可以成功制备小鼠MCAO模型,该模型可用于脑缺血后急慢期神经功能修复机制及神经可塑性等方面的研究。

关键词：电凝法大脑中动脉脑缺血小鼠评价指标

新规格冻干甲型肝炎减毒活疫苗的免疫原性及安全性评价

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中国生物制品学杂志 2022年第6期35卷 654-658页

作者：徐艳玲王艺博侯丽娟李勇岳立广夏青娟申文晋张春云范明源刘令九邹勇长春生物制品研究所有限责任公司吉林长春130012 天津药物研究院新药评价有限公司天津300301

目的评价新规格(复溶后0.5 mL/剂)冻干甲型肝炎减毒活疫苗(简称甲肝减毒活疫苗)的免疫原性和安全性。方法将3批甲肝减毒活疫苗试验疫苗(复溶后0.5 mL/剂)和市售甲肝减毒活疫苗(复溶后1.0 mL/剂)分别经腹腔免疫小鼠,免疫28 d后,经心脏采... 详细信息

目的评价新规格(复溶后0.5 mL/剂)冻干甲型肝炎减毒活疫苗(简称甲肝减毒活疫苗)的免疫原性和安全性。方法将3批甲肝减毒活疫苗试验疫苗(复溶后0.5 mL/剂)和市售甲肝减毒活疫苗(复溶后1.0 mL/剂)分别经腹腔免疫小鼠,免疫28 d后,经心脏采血,分离血清,检测血清中甲型肝炎病毒抗体滴度;将上述6批疫苗经大鼠皮下注射给药,观察给药28 d内大鼠体重变化,并于28 d时进行大体剖检;将上述6批疫苗经家兔皮下注射给药,观察家兔的体重变化;剖检后观察背部给药部位及其周围皮肤和肌肉的刺激反应,并进行组织病理学检查。结果免疫6批疫苗的小鼠血清抗体阳转率均为100%,两种疫苗间血清抗体平均滴度差异无统计学意义(P>0.05)。给药后28 d,各组大鼠未见死亡及异常反应,体重呈增长趋势;各主要脏器未见肉眼可见的病理改变。给药对各组家兔体重无影响,也未发现全身毒性反应;注射部位皮肤未见充血、红肿等刺激反应;给药部位皮肤、皮下及肌肉各层结构清晰,形态正常,间质均未见异常。结论新规格甲肝减毒活疫苗(复溶后0.5 mL/剂)具有良好的免疫原性和安全性。

关键词：冻干甲型肝炎减毒活疫苗规格免疫原性安全性

“城市更新+文旅”的城市孤岛空间多维拓扑结构与功能重塑研究——以广州市黄埔古村为例

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干旱区资源与环境 2024年第1期38卷 69-74页

作者：唐夕汐夏青田里广东第二师范学院管理学院广州510303 云南大学工商管理与旅游管理学院昆明650500

从列斐伏尔都市社会理论、德勒兹褶子说、阿特金Q分析等理论动力源出发来分析城市孤岛与周边现代化城市排斥与包容的辩证关系,并构建了城市孤岛“C-B”空间4维拓扑结构集合。采用观察法、半结构访谈法、文本分析法等数据获取方法,从历... 详细信息

从列斐伏尔都市社会理论、德勒兹褶子说、阿特金Q分析等理论动力源出发来分析城市孤岛与周边现代化城市排斥与包容的辩证关系,并构建了城市孤岛“C-B”空间4维拓扑结构集合。采用观察法、半结构访谈法、文本分析法等数据获取方法,从历时性拓扑演化的过程中,提炼出黄埔古村“村港一体”的拓扑不变量;从共时性的角度聚焦第四次拓扑结构,探索出“城市更新+文旅”的空间功能重塑模式是黄埔古村为代表的城市孤岛有效实施新时代空间转型发展的具体路径之一。

关键词：城市孤岛空间多维拓扑结构功能重塑城市更新文旅发展

重复性联盟组合重构对焦点企业绩效的影响研究

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研究与发展管理 2024年第1期36卷 94-107页

作者：韩炜刘夏青西南政法大学商学院重庆401120

焦点企业与曾经有合作经历的既有联盟伙伴建立联盟以撬动新资源的做法,越来越多地被缺乏联盟经验与联盟资源的企业所采用,并作为其重构联盟组合的一种重要方式。在已有研究较多关注其静态构造的背景下,本文聚焦企业具有重复性特征的联... 详细信息

焦点企业与曾经有合作经历的既有联盟伙伴建立联盟以撬动新资源的做法,越来越多地被缺乏联盟经验与联盟资源的企业所采用,并作为其重构联盟组合的一种重要方式。在已有研究较多关注其静态构造的背景下,本文聚焦企业具有重复性特征的联盟组合重构对焦点企业绩效的影响,以及领导班子断裂带强度和组织冗余的边界约束作用。利用2010—2016年在创业板挂牌上市、与同一个伙伴建立2个以上联盟从而形成重复性联盟组合的上市公司联盟数据,实证检验重复性联盟组合重构对焦点企业绩效的影响。研究结果显示,重复性联盟组合重构与焦点企业绩效之间存在倒U形曲线关系;企业领导班子断裂带强度强化重复性联盟组合重构影响焦点企业绩效的倒U形关系;组织冗余弱化重复性联盟组合重构影响焦点企业绩效的倒U形关系。研究结论深层次解读了联盟组合重构作用于焦点企业绩效提升的规律,增强了对联盟组合“重构—绩效”作用的理论边界解释,揭示了重复性联盟组合重构发挥有效性的机理,深化了联盟组合“重构—绩效”作用的研究情境。

关键词：联盟组合重构企业绩效断裂带强度组织冗余

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鹿茸多肽的生物学活性研究

吉林农业大学学报 2006年第3期28卷 285-288页

作者：郝林琳刘松财夏青娟章倩倩侯锋张永亮吉林大学农学部畜牧兽医学院长春130062 吉林农业大学动物科技学院长春130118

采用醇沉法从新鲜马鹿茸中提取出活性多肽。该多肽为一系列分子量低于17kD的多肽混合物，Western blotting检测到其含有胰岛素样生长因子-1（IGF-1）。Bradford法定量总多肽约为1～2mg／g鲜重，RIA法定量IGF-1为300～400pg／g鲜重。小... 详细信息

采用醇沉法从新鲜马鹿茸中提取出活性多肽。该多肽为一系列分子量低于17kD的多肽混合物，Western blotting检测到其含有胰岛素样生长因子-1（IGF-1）。Bradford法定量总多肽约为1～2mg／g鲜重，RIA法定量IGF-1为300～400pg／g鲜重。小鼠腹腔连续注射多肽6d后，对其促生长、免疫调节、抗氧化、抗疲劳等生物学活性进行了研究。结果表明：小鼠体重较对照组有增加趋势（P〉0．05）；腹腔注射1，4，8mg／kg鹿茸多肽组小鼠玫瑰花环成环率分别高于对照组（生理盐水）33．3％，34．2％，39．6％，差异显著（P〈0．05）。注射8mg／kg鹿茸多肽的小鼠血清溶血素OD值与对照组差异极显著（P〈0．01）。实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率分别比对照组高22．1％，25．8％，26．5％，差异显著或极显著（P〈0．05或P〈0．01），说明鹿茸多肽具有免疫调节作用，且呈剂量依赖性。注射4，8mg／kg鹿茸多肽组老年小鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）活性分别升高51．1％，59．2％，血清丙二醛（MDA）含量分别下降14．9％，16．7％，与对照组差异显著（P〈0．05），说明鹿茸多肽对老年小鼠有较强的抗氧化作用。小鼠负重游泳实验中，注射小鼠存活时间比对照组延长了21．67min（P〈0．05），说明鹿茸多肽具有抗疲劳作用。

关键词：鹿茸多肽生物学活性免疫调节抗氧化超氧化物歧化酶丙二醛