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一种转移非特异性蛋白带的染色方法

生物化学与生物物理进展 1995年第4期22卷 382-383页

作者：夏另朝李金照陈燕中国科学院生物物理研究所

考马斯亮蓝是常用的聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳的染料，利用硝酸纤维素膜（ＮＣＦ）对染料的吸附作用，将低浓度的考马斯亮蓝（０．０２５％）染色液直接对ＮＣＦ上的转移蛋白带进行染色，经实验反复验证．它是一种较好的ＮＣＦ上转移非特... 详细信息

考马斯亮蓝是常用的聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳的染料，利用硝酸纤维素膜（ＮＣＦ）对染料的吸附作用，将低浓度的考马斯亮蓝（０．０２５％）染色液直接对ＮＣＦ上的转移蛋白带进行染色，经实验反复验证．它是一种较好的ＮＣＦ上转移非特异性蛋白带的染色方法．

关键词：蛋白转移染色法蛋白带

GDNF及BDNF对受损运动神经元的长期修复

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生物物理学报 1999年第3期15卷 489-494页

作者：夏另朝邱蓉张瑛邓巍李金照陈燕中国科学院生物物理研究所北京100101

为了研究胶质细胞源神经营养因子（ＧＤＮＦ）及脑源神经营养因子（ＢＤＮＦ）对切断轴突的新生运动神经元的长期维持存活及促进神经再生的作用，我们选用出生时单侧切断坐骨神经的雏鸡模型，用裸ＤＮＡ转染方法，在损伤神经附近... 详细信息

为了研究胶质细胞源神经营养因子（ＧＤＮＦ）及脑源神经营养因子（ＢＤＮＦ）对切断轴突的新生运动神经元的长期维持存活及促进神经再生的作用，我们选用出生时单侧切断坐骨神经的雏鸡模型，用裸ＤＮＡ转染方法，在损伤神经附近的肌肉中转染ＧＤＮＦｃＤＮＡ和ＢＤＮＦｃＤＮＡ的真核表达载体，观察在体表达的神经营养因子对损伤的修复作用。结果显示，在体表达的ＧＤＮＦ在８周内能使切断坐骨神经的腰脊髓运动神经元近９０％维持存活。切断的坐骨神经从断端向远体端再生，最长再生达９．５ｍｍ。表达两个因子比单独表达ＧＤＮＦ对运动神经元的存活无显著性差异。而两个因子协同作用对坐骨神经的再生更为有效，坐骨神经再生最长的可达１５．４ｍｍ。

关键词： GDNF BDNF 神经营养因子运动神经元损伤修复

脑源神经营养因子基因转染神经断端促进切断坐骨神经再生

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生物物理学报 1997年第3期13卷 448-452页

作者：李金照陈燕夏另朝邱蓉张瑛邓巍中国科学院生物物理研究所

为了研究体内表达的脑源神经营养因子（Ｂｒａｉｎ－ｄｅｒｉｖｅｄＮｅｕｒｏｔｒｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ，ＢＤＮＦ）对脊髓运动神经元存活及切断神经再生的作用，我们将人ＢＤＮＦｃＤＮＡ克隆到真核表达载体ｐＣＢ６中，使ＢＤＮＦ基... 详细信息

为了研究体内表达的脑源神经营养因子（Ｂｒａｉｎ－ｄｅｒｉｖｅｄＮｅｕｒｏｔｒｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ，ＢＤＮＦ）对脊髓运动神经元存活及切断神经再生的作用，我们将人ＢＤＮＦｃＤＮＡ克隆到真核表达载体ｐＣＢ６中，使ＢＤＮＦ基因在ＣＭＶ启动子控制下表达。在雏鸡出生后３小时内及第二天直接将ｐＣＢ－ＢＤＮＦｃＤＮＡ·ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ混合物注射到坐骨神经预切断位点附近肌肉内。第二天切断坐骨神经，神经切断１０天后进行实验检测，观察到，ＢＤＮＦｃＤＮＡ转染阻止了切断神经一侧的腰脊髓内（Ｌ４－Ｌ６）运动神经元的大量死亡。并显著的促进了切断坐骨神经的再生。这些结果表明直接注射含ＢＤＮＦｃＤＮＡ的质粒对损伤的神经进行基因治疗，具有良好的前景；ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导重组质粒进行基因转染是导入外源基因到体内的一个可行方法。

关键词：脑源神经营养因子基因治疗坐骨神经损伤再生

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结合珠蛋白试剂盒及其性能评价

结合珠蛋白试剂盒及其性能评价

神经营养因子GDNF编码顺序的克隆及表达产物的纯化

第七届全国医学生物化学与分子生物学和第四届全国临床应用生物化学与分子生物学联合学术研讨会暨医学生化分会会员代表大会

作者：夏另朝中生北控生物科技股份有限公司

目的通过对国产结合珠蛋白试剂(中生公司)的全性能评价,确认其满足临床使用要求,且与进口试剂测值可比。材料和方法在全自动生化分析仪上,参照EP17、EP5、EP6,对检测限、精密度和测定范围等性能进行评价。并使用来自北京医院和阜外医院... 详细信息

目的通过对国产结合珠蛋白试剂(中生公司)的全性能评价,确认其满足临床使用要求,且与进口试剂测值可比。材料和方法在全自动生化分析仪上,参照EP17、EP5、EP6,对检测限、精密度和测定范围等性能进行评价。并使用来自北京医院和阜外医院两家医院的400例病人标本,参照EP9文件对中生试剂和进口试剂的相关性进行评价。结果①中生试剂的空白吸光度在0.0377～0.0598之间,与进口试剂(0.04790D)相当;②中生试剂的空白检测限和最低检测限分别为0.013g/L和0.048g/L,接近进口试剂0.030g/L的最低检测限,表明该试剂盒检测灵敏度较高。③精密度评价:测定低值和高值病理样品的批内重复性变异系数分别为1.00%和0.79%,批间差亦在5%以内,均与进口试剂相当。检测低值和高值病理样本的室内不精密度CV分别为6.25%和4.69%;经卡方检验,χ分别为8.11和3.62,小于95%概率的χ临界值。④中生试剂的测定范围为0.30g/L-2.70 g/L,此范围内为二阶线性,平均线性偏差(ADL)满足小于5%的要求。⑤用中生试剂与进口试剂同时测定400例临床样本对比其相关性,得到的相关方程为Y=0.9733X+0.044;相关系数r为0.9964,二者相关性良好,在医学决定水平下系统误差的95%的置信区间为[0.09,0.19],小于允许误差[-0.40,0.40],系统误差符合临床要求。结论结合珠蛋白(HP)项目临床上主要用于诊断血管内溶血性疾病,如阵发性睡眠性血红蛋白尿症和吞豆病,以及先天性无结合珠蛋白血症等。另一方面,HP作为急性期时相反应蛋白,在心肌梗塞、肿瘤、炎症、创伤、感染等病理状态时,血液中的HP明显增多。同时HP的合成与降解均在肝脏,最新研究表明HP可辅助诊断肝脏疾病和判断疾病的预后。国产中生HP试剂以免疫透射比浊法为原理,有优良的临床使用性能,与进口试剂相关性良好,且上机使用更为方便,能够为临床诊断提供可靠、有效的参考数据。

关键词：结合珠蛋白精密度测定范围相关性

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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中国生物化学与分子生物学报 1998年第4期14卷 382-385页

作者：陈燕张瑛李金照邓巍夏另朝邱蓉中国科学院生物物理研究所中国科学院视觉信息加工开放实验室

根据基因库中的顺序，设计了胶质细胞源神经营养因子（ＧＤＮＦ）基因的ＰＣＲ引物，以此从人基因组ＤＮＡ中扩增并克隆了ＧＤＮＦ的编码序列，经ＤＮＡ测序确认后，该片段克隆到表达质粒ｐＥＴ－３ａ中，转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３... 详细信息

根据基因库中的顺序，设计了胶质细胞源神经营养因子（ＧＤＮＦ）基因的ＰＣＲ引物，以此从人基因组ＤＮＡ中扩增并克隆了ＧＤＮＦ的编码序列，经ＤＮＡ测序确认后，该片段克隆到表达质粒ｐＥＴ－３ａ中，转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）．培养的重组菌经ＩＰＴＧ诱导，在Ｔ７启动子调控下表达出ｈＧＤＮＦ蛋白．经电泳分析表明ＧＤＮＦ主要存在于细菌包涵体中．从培养菌中制备包涵体，经充分洗涤，溶解于含８ｍｏｌ／Ｌ尿素的变性缓冲液中．经ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱层析分离，梯度洗脱，以１５％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检查含ＧＤＮＦ的部分．将含单体ＧＤＮＦ部分进行复性，再次用ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子柱分离同源二体ＧＤＮＦ．最后经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ制备电泳纯化，纯度大于９５％．经Ｎ端测序表明序列正确．经测定，每升培养菌可得约１０ｍｇ纯化的ＧＤＮＦ．

关键词：神经营养因子 GDNF编码顺序 PCR法表达产物

胶质细胞源神经营养因子cDNA全序列的克隆及其生物学功能的研究

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中国生物化学与分子生物学报 1999年第3期15卷 372-377页

作者：段峰海张瑛夏另朝邱蓉邓巍李金照陈燕中国科学院生物物理研究所视觉信息加工开放实验室

为了研究ＧＤＮＦ在神经系统中的生物学功能，通过ＲＴ－ＰＣＲ方法从大鼠睾丸总ＲＮＡ中扩增出ＧＤＮＦｃＤＮＡ全序列，序列分析表明与ＧｅｎＢａｎｋ中的顺序完全相同．将ＧＤＮＦｃＤＮＡ以非融合方式连接在真核表达载体ｐＥＧＦＰ... 详细信息

为了研究ＧＤＮＦ在神经系统中的生物学功能，通过ＲＴ－ＰＣＲ方法从大鼠睾丸总ＲＮＡ中扩增出ＧＤＮＦｃＤＮＡ全序列，序列分析表明与ＧｅｎＢａｎｋ中的顺序完全相同．将ＧＤＮＦｃＤＮＡ以非融合方式连接在真核表达载体ｐＥＧＦＰ－ＮⅠ的绿色荧光蛋白的上游，在ＣＭＶ启动子控制下表达．通过绿色荧光蛋白报告基因的表达表明ＧＤＮＦｃＤＮＡ能在真核细胞ＨｅＬａ中很好表达．采用裸ＤＮＡ转染方法研究ＧＤＮＦ对损伤的坐骨神经的修复作用，在雏鸡出生后３ｈ切断其右侧坐骨神经，将ｐＥＧＦＰ－ＧＤＮＦ与Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ的混合物注射到坐骨神经切断位点附近肌肉内，５ｄ后追补一次．２０ｄ后进行实验检测，观察到ＧＤＮＦｃＤＮＡ的转染阻止了切断神经侧的腰脊髓内［Ｌ４－Ｌ６］运动神经元的大量死亡，并显著促进了切断坐骨神经的再生．

关键词： GDNF PT-PCR 坐骨神经 cDNA

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血清胱抑素C及其临床应用

血清胱抑素C及其临床应用