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柑橘褐斑病菌AaSIP2和AaSNF4基因生物学功能初步研究

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柑橘褐斑病菌AaSIP2和AaSNF4基因生物学功能初步研究

作者：唐飞艳西南大学

学位级别：硕士

柑橘褐斑病（Alternaria brown spot,ABS）是由橘致病型链格孢菌（Alternaria alternata pathotype tangerine）导致的重要柑橘真菌病害之一。橘致病型链格孢菌主要危害敏感寄主的嫩叶、嫩梢和果实,严重时可造成柑橘品质下降,大量减产,... 详细信息

柑橘褐斑病（Alternaria brown spot,ABS）是由橘致病型链格孢菌（Alternaria alternata pathotype tangerine）导致的重要柑橘真菌病害之一。橘致病型链格孢菌主要危害敏感寄主的嫩叶、嫩梢和果实,严重时可造成柑橘品质下降,大量减产,导致柑橘产业损失惨重。目前柑橘褐斑病菌的基因组测序工作已经完成,有助于深入探究柑橘褐斑病菌的致病机理。蔗糖非发酵（Sucrose non-fermenting 1,SNF1）蛋白激酶复合体是一个对真菌生长发育和致病力至关重要且高度保守的异源三聚体蛋白,包含1个催化亚基α,2个调节亚基β、γ。前期研究表明,柑橘褐斑病菌的α亚基Snf1在碳源利用和致病性方面具有重要作用,另外2个亚基的生物学功能未曾报道。为了研究SNF1蛋白激酶复合体其他亚基在柑橘褐斑病菌中的功能,本研究通过BLASTP搜索,在柑橘褐斑病菌Z7菌株的基因组中找到酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）的β、γ亚基的同源基因Aa SIP2和Aa SNF4。利用生物信息学分析、实时荧光定量PCR、基因敲除技术和表型分析等方法,初步分析Aa SIP2和Aa SNF4在柑橘褐斑病菌生长发育及致病过程中的作用。获得的主要结果如下:1.根据柑橘褐斑病菌Z7菌株基因组注释信息可知:Aa SIP2 ORF长1 800 bp,编码600个氨基酸;Aa SNF4 ORF长1 086 bp,编码362个氨基酸。理化性质分析显示Aa Sip2蛋白的分子量为64.43 KD,PI为6.1,不稳定系数为53.90,总体平均疏水性为-0.734,为稳定的亲水蛋白;Aa Snf4蛋白的分子量为40.71 KD,PI为6.1,不稳定系数为35.01,总体平均疏水性为-0.162,为不稳定的亲水蛋白。二级结构分析表明,Aa Sip2蛋白主要以无规则卷曲为主,没有β-转角;而Aa Snf4蛋白主要以a-螺旋和无规则卷曲为主。Aa Sip2和Aanf4蛋白的氨基酸序列中均没有预测到跨膜结构域和信号肽,推测这两个蛋白不属于跨膜蛋白和分泌蛋白。亚细胞定位分析显示,Aa Sip2和Aa Snf4主要定位在细胞质,推测这两个蛋白可能主要在细胞质中发挥作用。系统发育分析表明,Aa Sip2和Aa Snf4蛋白与小麦黄斑叶枯病（Pyrenophora tritici-repentis）的蛋白在同一条分支上,表明它们的同源性最高,而与其他真菌的同源性较低。2.利用Split-marker基因敲除技术和PEG介导的原生质体遗传转化法,经潮霉素筛选、PCR及Southern blot验证,得到Aa SIP2和Aa SNF4基因敲除菌株。同时通过***的高效同源重组机制构建基因功能回补质粒,转化突变体原生质体,经抗生素G418和PCR筛选,得到回补菌株CP-Si-4和CP-Sn-3。3.利用实时荧光定量PCR,分析Aa SIP2和Aa SNF4在致病过程和不同的碳源培养条件下的表达情况。研究结果表明,在柑橘褐斑菌侵染寄主的整个过程中,Aa SIP2和Aa SNF4基因持续表达,推测Aa SIP2和Aa SNF4基因均在柑橘褐斑病菌致病过程中发挥一定作用。此外,Aa SIP2和Aa SNF4基因在不同碳源培养条件下表达也有差异,在以麦芽糖为唯一碳源时表达量最高,蔗糖次之,Na AC最低,说明这2个基因在柑橘褐斑病菌选择性利用碳源方面具有一定作用。4.分析柑橘褐斑病菌野生型、基因突变体和回补菌株的表型差异,结果显示:Aa SIP2和Aa SNF4的缺失影响突变体的孢子形态、萌发及产孢,ΔAa Sip2和ΔAa Snf4的孢子变长,产孢量显著下降,孢子萌发速度明显减缓。ΔAa Sip2和ΔAa Snf4对糖和Ca Cl2、KCl胁迫更敏感;同时生长速度在不同单一碳源的MM培养基上受到不同程度抑制,尤其是在麦芽糖和蔗糖培养基上影响较大;突变体对寄主的致病能力也显著降低。

关键词：柑橘褐斑病菌 AaSIP2 AaSNF4 基因功能

黑龙江省中等职业学校专业设置现状与调整对策

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职业技术教育 2011年第35期32卷 5-9页

作者：唐飞艳曹晔河北科技师范学院职业技术教育研究所河北秦皇岛066004

从黑龙江省部分中职学校专业设置和招生计划来看,黑龙江省中等职业学校专业设置与本省产业结构基本是相适应的,已形成以加工制造、信息技术、农林牧渔、医药卫生为主体的专业结构,专业设置聚集度较高,复合型专业开始增多。但由于城乡之... 详细信息

从黑龙江省部分中职学校专业设置和招生计划来看,黑龙江省中等职业学校专业设置与本省产业结构基本是相适应的,已形成以加工制造、信息技术、农林牧渔、医药卫生为主体的专业结构,专业设置聚集度较高,复合型专业开始增多。但由于城乡之间产业结构、经济社会发展水平等存在差异,因此在城乡职业教育专业设置上存在一定差异。依据"十二五"期间黑龙江省经济社会发展规划,建议黑龙江省进一步加强涉农专业建设,调整优化专业结构,加快新兴专业建设,职业学校也要进一步加大校企合作和联合办学力度。

关键词：黑龙江中等职业学校专业设置产业结构专业结构校企合作

柑橘褐斑病菌AaSIP2基因生物学功能初步研究

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园艺学报 2018年第12期45卷 2358-2370页

作者：唐飞艳孔向雯吕韦玮唐科志西南大学柑桔研究所中国农业科学院柑桔研究所重庆400712

蔗糖非发酵(Sucrose non-fermenting 1,SNF1)蛋白激酶复合体是1个对真菌生长发育和致病力发挥重要作用且高度保守的异源三聚体蛋白,包含1个催化亚基α,两个调节亚基β、γ。前期研究表明,α亚基Snf1在柑橘褐斑病菌碳源利用和致病力方面... 详细信息

蔗糖非发酵(Sucrose non-fermenting 1,SNF1)蛋白激酶复合体是1个对真菌生长发育和致病力发挥重要作用且高度保守的异源三聚体蛋白,包含1个催化亚基α,两个调节亚基β、γ。前期研究表明,α亚基Snf1在柑橘褐斑病菌碳源利用和致病力方面具有重要作用。为了解SNF1复合体其他亚基在柑橘褐斑病菌中的功能,对柑橘褐斑病菌AlternariaalternataZ7菌株的蛋白序列进行搜索,鉴定到1个β亚基Sip2。通过基因敲除及回补技术,分析AaSIP2在柑橘褐斑病菌中生物学功能。结果显示,与野生型和回补菌株相比,AaSIP2缺失突变体产孢量降低且孢子萌发迟缓,对糖和KCl、CaCl_2胁迫更敏感;在不同单一碳源的MM培养基上生长速度受到不同程度抑制;对寄主的致病能力显著降低。初步证明AaSIP2参与调控柑橘褐斑病菌的产孢、孢子萌发、胁迫应答、碳源利用及致病性。

关键词：柑橘柑橘褐斑病菌蔗糖非发酵蛋白激酶 AaSIP2基因碳源利用致病性

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听说读写看，全方位爱“家”

读写算 2023年第12期 16-17页

作者：唐飞艳江苏省溧阳市外国语小学

本次作业设计的主题为“家”，作业类型包括基础性作业、实践性作业及综合性作业。2022年义务教育英语课程标准指出，语言学习过程是学习者发现、获取、概括和探究意义的过程，也是学生主动参与、获取和学习新知的过程。四年级学生在教...

本次作业设计的主题为“家”，作业类型包括基础性作业、实践性作业及综合性作业。2022年义务教育英语课程标准指出，语言学习过程是学习者发现、获取、概括和探究意义的过程，也是学生主动参与、获取和学习新知的过程。四年级学生在教师指导下能理解日常生活中熟悉的简单语言材料，开始产生语感；能用基本的、简短的语言与他人交流，描述身边熟悉的事物。根据课程标准的要求，在学习四年级上册第五单元Our new home时，围绕“家”这个主题，结合日常教学，笔者设计了音、词、句、

关键词：

柑橘褐斑病菌信号转导基因及活性氧解毒机制研究进展

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园艺学报 2016年第9期43卷 1699-1710页

作者：张倩唐飞艳孔向雯王洪秀唐科志西南大学柑桔研究所中国农业科学院柑桔研究所重庆400712

由链格孢菌(Alternaria alternata)引起的柑橘褐斑病(Alternaria brown spot,ABS)是严重为害柑橘的一种真菌病害。在柑橘褐斑病菌中已鉴定出多个信号转导基因,但大多围绕单基因生物学功能的研究,关于信号级联通路主要集中在病原菌解毒... 详细信息

由链格孢菌(Alternaria alternata)引起的柑橘褐斑病(Alternaria brown spot,ABS)是严重为害柑橘的一种真菌病害。在柑橘褐斑病菌中已鉴定出多个信号转导基因,但大多围绕单基因生物学功能的研究,关于信号级联通路主要集中在病原菌解毒活性氧(reactive oxygen species,ROS)方面。研究发现除毒素ACT外,柑橘褐斑病菌对活性氧的高效解毒机制也是其致病所必需的。对柑橘褐斑病菌信号转导基因研究现状进行综述,分析其活性氧解毒相关通路及机制,旨在为进一步研究柑橘褐斑病菌分子致病机制提供参考。

关键词：柑橘褐斑病菌信号转导活性氧解毒机制

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柑橘褐斑病菌原生质体制备与再生条件的优化

植物保护学报 2018年第6期45卷 1431-1432页

作者：孔向雯唐飞艳吕韦玮张倩唐科志西南大学柑桔研究所/中国农业科学院柑桔研究所重庆400712

交链格孢菌Alternaria alternata是一种死体营养型真菌,可侵入宽皮柑橘及其杂交种,引起柑橘褐斑病,该病害可在柑橘整个生长期中发生,引起落叶落果,导致柑橘大幅减产,严重影响柑橘的产量和品质。柑橘褐斑病菌的主要致病因子为ACT毒素,AC... 详细信息

交链格孢菌Alternaria alternata是一种死体营养型真菌,可侵入宽皮柑橘及其杂交种,引起柑橘褐斑病,该病害可在柑橘整个生长期中发生,引起落叶落果,导致柑橘大幅减产,严重影响柑橘的产量和品质。柑橘褐斑病菌的主要致病因子为ACT毒素,ACT毒素可引起细胞死亡,也会诱导寄主快速地发生过敏性坏死反应(Kazuya et al.,2014)。

关键词：宽皮柑橘褐斑病菌原生质体制备再生条件过敏性坏死反应优化链格孢菌致病因子

柑橘褐斑病菌AaSIP2基因生物学功能初步研究

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柑橘褐斑病菌AaSIP2基因生物学功能初步研究

柑橘褐斑病菌原生质体制备与再生条件的优化研究

中国植物病理学会第十一届全国会员代表大会暨2018年学术年会

作者：唐飞艳孔向雯吕韦玮唐科志西南大学柑桔研究所中国农业科学院柑桔研究所

酿酒酵母的SNF1蛋白激酶是哺乳动物的AMPK激酶同源物,通过调控转录因子和相关酶活性来维持碳源代谢平衡和细胞能量稳态。SNF1是一个异源三聚体蛋白,包含一个催化亚基α,两个调节亚基β、γ,其中β亚基包含3个亚型,分别由SIP1、SIP2、GA... 详细信息

酿酒酵母的SNF1蛋白激酶是哺乳动物的AMPK激酶同源物,通过调控转录因子和相关酶活性来维持碳源代谢平衡和细胞能量稳态。SNF1是一个异源三聚体蛋白,包含一个催化亚基α,两个调节亚基β、γ,其中β亚基包含3个亚型,分别由SIP1、SIP2、GAL83基因编码。目前柑橘褐斑病菌中尚无β亚基的生物学功能研究。本研究中,我们对柑橘褐斑病菌Z7菌株的蛋白序列进行搜索,确定Z7菌株中只有一个β亚基Sip2。通过基因敲除及回补技术,分析AaSIP2基因在柑橘褐斑病菌生长发育及致病过程中的作用。表型分析显示,与野生型相比,突变体气生菌丝稀疏,分生孢子产量降低且孢子萌发迟缓,对糖、盐胁迫更敏感,生长速度在不同单一性碳源的MM培养基上受到不同程度抑制,致病力显著降低。本研究初步证明AaSIP2基因参与调控柑橘褐斑病菌的菌丝生长、产孢、孢子萌发、胁迫应答、碳源利用及致病性。

关键词：柑橘褐斑病菌 AaSIP2基因基因敲除表型分析

来源： cnki会议评论

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柑橘褐斑病菌原生质体制备与再生条件的优化研究

产业互联网平台企业如何构建数字包容生态？——以赋能与信任共演破解数字鸿沟

中国植物病理学会第十一届全国会员代表大会暨2018年学术年会

作者：孔向雯唐飞艳吕韦玮张倩唐科志西南大学/中国农业科学院柑桔研究所

大量、稳定原生质体的获得是真菌遗传转化的基础。本实验以柑橘褐斑病菌野生型菌株Z7为供试材料,从菌龄、细胞壁裂解酶种类和配比、酶解时间、渗透压稳定剂种类和浓度以及再生培养基等方面对原生质体制备及再生条件进行了优化研究。试... 详细信息

大量、稳定原生质体的获得是真菌遗传转化的基础。本实验以柑橘褐斑病菌野生型菌株Z7为供试材料,从菌龄、细胞壁裂解酶种类和配比、酶解时间、渗透压稳定剂种类和浓度以及再生培养基等方面对原生质体制备及再生条件进行了优化研究。试验结果表明,将柑橘褐斑病菌菌株摇培36h,以0.7mol/L的NaCl为渗透压稳定剂,在1%的Kitalase作用下30℃、150r/min酶解2.5h,获得的原生质体在TB培养基上再生效果最好。

关键词：柑橘褐斑病菌原生质体制备再生

来源： cnki会议评论

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经济管理 2025年

作者：舒辉唐飞万敏琍江西财经大学工商管理学院

数字技术的快速发展，催生了产业互联网平台的涌现和迭代，产业互联网平台表现出“综合型→垂直型→联盟型”的演化趋势。本文采用单案例研究方法，以产业互联网平台企业“第一枪”为例，对其构建数字包容生态的过程和机制进行了探究。... 详细信息

数字技术的快速发展，催生了产业互联网平台的涌现和迭代，产业互联网平台表现出“综合型→垂直型→联盟型”的演化趋势。本文采用单案例研究方法，以产业互联网平台企业“第一枪”为例，对其构建数字包容生态的过程和机制进行了探究。研究发现：数字包容生态的构建过程可分为打造平台嵌入的包容性基础架构、重构产业升级的包容性共创环境、延拓产间协同的包容性链群体系三个阶段。各个阶段在情境触发和网络嵌入的激励机制下，推动企业、产业和产业间三个层次的包容性增长以及数字包容生态的渐进式发展。其中，赋能和信任共演下的网络嵌入行动是包容性建设的必要条件，主要表现为：平台企业通过平台连接赋能、产业链接赋能和联盟协同赋能实现结构嵌入，并推动计算信任到关系信任再向制度信任跃迁的关系嵌入，形成双向能量供给的驱动反馈机制。最终，数字包容生态从内至外呈现出“平台包容基建—产业包容环境—链群包容体系”的层次嵌套模型，能有效实现线上线下、供给需求以及产业内外的动态平衡。研究结果不仅丰富了数字包容生态建设的理论研究，而且为中小企业和传统产业破解数字鸿沟难题提供了可行路径。

关键词：产业互联网平台企业数字包容生态平台赋能信任数字鸿沟