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慢病毒介导磷酸二酯酶7A基因沉默细胞株的构建及三磷酸腺苷结合盒转运体A1的表达变化

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中国现代医学杂志 2016年第3期26卷 1-8页

作者：向乐唐菀泽张志珍马卫列广东医学院生物化学与分子生物学教研室广东东莞523808

目的利用慢病毒介导构建磷酸二酯酶7A(PDE7A)基因沉默人单核巨噬细胞(THP-1)株,并分析沉默细胞株的三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的表达变化。方法以PDE7A基因为靶点,设计合成3段sh RNA片段,与慢病毒载体Pmi Rzip连接,构建重组质粒... 详细信息

目的利用慢病毒介导构建磷酸二酯酶7A(PDE7A)基因沉默人单核巨噬细胞(THP-1)株,并分析沉默细胞株的三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的表达变化。方法以PDE7A基因为靶点,设计合成3段sh RNA片段,与慢病毒载体Pmi Rzip连接,构建重组质粒。测序鉴定后进行病毒包装,感染THP-1细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(q PCR)进行分析,确定最佳干扰片段。嘌呤霉素筛选得到PDE7A基因沉默稳转细胞株。q PCR和Western blot检测鉴定所构建的细胞株,将其诱导成为泡沫细胞后鉴定ABCA1基因的表达。结果转染sh RNA1、sh RNA2、sh RNA3细胞的PDE7A相对表达量分别为(0.480±0.028)、(0.561±0.016)和(0.377±0.013),故选择sh RNA3作为干扰PDE7A基因的最佳片段。采用1.4 g/L嘌呤霉素成功筛选出PDE7A沉默细胞株,q PCR和Western blot检测PDE7A基因的干扰效率,其抑制效率>70%。将其诱导成巨噬泡沫细胞后,Western blot检测显示,ABCA1的表达量增加40%。结论成功构建PDE7A sh RNA慢病毒干扰载体,并筛选出PDE7A基因沉默的THP-1细胞株,且ABCA1的表达量增加。

关键词：磷酸二酯酶7A RNA干扰慢病毒三磷酸腺苷结合盒转运体A1

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氧化芍药苷对泡沫细胞胆固醇流出的影响

中国现代医学杂志 2017年第16期27卷 6-11页

作者：唐菀泽马卫列丁航向乐张志珍广东医科大学生物化学与分子生物学教研室广东东莞523808

目的分析氧化芍药苷对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响。方法 THP-1细胞加入160 nmol/L佛波酯(PMA)24 h,再加入50μg/ml乙酰化低密度脂蛋白(ac-LDL)建立泡沫细胞模型,CCK-8法测定氧化芍药苷的细胞毒性,同位素标记法测定各处... 详细信息

目的分析氧化芍药苷对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响。方法 THP-1细胞加入160 nmol/L佛波酯(PMA)24 h,再加入50μg/ml乙酰化低密度脂蛋白(ac-LDL)建立泡沫细胞模型,CCK-8法测定氧化芍药苷的细胞毒性,同位素标记法测定各处理组泡沫细胞胆固醇流出率。共聚焦显微镜观察泡沫细胞内脂肪分化相关蛋白(ADFP)表达变化,Western blot分析泡沫细胞中ADFP、三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)和过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)蛋白表达变化。结果成功建立THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞模型。氧化芍药苷毒性分析表明,质量浓度在200.0μg/ml以下无细胞毒性。150.0μg/ml与200.0μg/ml氧化芍药苷处理泡沫细胞,胆固醇流出率分别为(10.317±0.508)%与(11.265±0.713)%,与apo A-1组相比,差异有统计学意义(P<0.05),均高于apo A-1组。氧化芍药苷处理的泡沫细胞内ADFP荧光明显减弱。Western blot分析泡沫细胞ADFP表达量降低28%。氧化芍药苷处理组PPARα表达量增加51%,ABCA1表达量增加45%。结论实验表明氧化芍药苷可通过上调PPARα增加ABCA1表达,进而促进泡沫细胞胆固醇流出。

关键词：氧化芍药苷 THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出

苯甲酰芍药苷增强ABCA1表达促进胆固醇流出

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中国医药导报 2020年第10期17卷 8-12页

作者：陈晓佳唐菀泽马卫列丁航张志珍广东医科大学基础医学院广东东莞523808 深圳市人民医院脊柱外科深圳市骨科研究所广东深圳518020

目的探讨白芍醇提物苯甲酰芍药苷(BP)对THP-1细胞胆固醇流出的影响。方法实验分ac-LDL组、apoA-1组和apoA-1+BP组。THP-1细胞加入160 nmol/L佛波酯(PMA)24 h,再加入50μg/mL乙酰化低密度脂蛋白(ac-LDL)建立泡沫细胞模型。液体闪烁计数... 详细信息

目的探讨白芍醇提物苯甲酰芍药苷(BP)对THP-1细胞胆固醇流出的影响。方法实验分ac-LDL组、apoA-1组和apoA-1+BP组。THP-1细胞加入160 nmol/L佛波酯(PMA)24 h,再加入50μg/mL乙酰化低密度脂蛋白(ac-LDL)建立泡沫细胞模型。液体闪烁计数法测定泡沫细胞胆固醇流出率;酶化学反应检测细胞总胆固醇浓度;定量PCR(qPCR)检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达;Western blot分析ABCA1、固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)、肝X受体α(LXRα)蛋白表达变化。结果成功建立THP-1泡沫细胞模型。apoA-1+BP组泡沫细胞胆固醇流出率高于apoA-1组,差异有高度统计学意义(P <0.01)。apoA-1+BP组泡沫细胞内总胆固醇含量低于apoA-1组,差异有高度统计学意义(P <0.01)。apoA-1+BP组泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达量均高于apoA-1组,差异有统计学意义(P <0.05或P <0.01)。apoA-1+BP组泡沫细胞LXRα蛋白表达水平高于apoA-1组,差异有高度统计学意义(P <0.01)。apoA-1+BP组SREBP1、SREBP2蛋白表达量低于apoA-1组,差异有高度统计学意义(P <0.01)。结论 BP可通过LXRα-ABCA1通路促进胆固醇流出。

关键词：苯甲酰芍药苷胆固醇流出泡沫细胞

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高脂模型长爪沙鼠生化指标变化

现代医药卫生 2015年第24期31卷 3704-3705页

作者：唐菀泽向乐林东子刘慧明覃燕梅丁航广东医学院生物化学与分子生物学教研室广东东莞523808 东莞市慢性病防治院检验科广东523008

目的观察高脂饲料喂养14周的长爪沙鼠生化指标变化。方法选取雄性长爪沙鼠20只,随机分为高脂饲料组和对照组,每组10只。对照组喂养普通饲料,高脂饲料组喂养含1.0%胆固醇、20.0%猪油的高脂饲料。14周后颌下静脉丛采血,检测血糖(GLU)、三... 详细信息

目的观察高脂饲料喂养14周的长爪沙鼠生化指标变化。方法选取雄性长爪沙鼠20只,随机分为高脂饲料组和对照组,每组10只。对照组喂养普通饲料,高脂饲料组喂养含1.0%胆固醇、20.0%猪油的高脂饲料。14周后颌下静脉丛采血,检测血糖(GLU)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)等。结果高脂饲料组长爪沙鼠血清TC、LDL-C、TG、HDL-C水平[分别为(14.27±2.97)、(4.72±1.94)、(3.04±1.22)、(3.43±0.90)mmol/L]明显高于对照组[分别为(1.72±0.22)、(0.19±0.09)、(1.53±0.49)、(1.46±0.25)mmol/L],差异均有统计学意义(P0.05)。结论高脂饲料喂养能明显升高长爪沙鼠血脂水平,导致长爪沙鼠高脂血症。

关键词：疾病模型,动物沙鼠亚科血清实验室技术和方法生化指标

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一种简便的骨动态参数计量方法

生物骨科材料与临床研究 2021年第1期18卷 9-12页

作者：彭松林王尚王振民龙灿玲唐菀泽贺小琴陈高扬深圳市人民医院(暨南大学第二临床医学院南方科技大学第一附属医院)脊柱外科广东深圳518020

目的探索操作方法简便、耗时少且对切片仪器要求不高的大鼠股骨硬组织切片方法。方法选取12只两月龄SD雌性大鼠,随机分组为假手术组和双侧卵巢切除组(每组各6只),构建骨质疏松模型。在取材前第9天和第2天腹腔注射钙黄绿素(25 mg/kg)。... 详细信息

目的探索操作方法简便、耗时少且对切片仪器要求不高的大鼠股骨硬组织切片方法。方法选取12只两月龄SD雌性大鼠,随机分组为假手术组和双侧卵巢切除组(每组各6只),构建骨质疏松模型。在取材前第9天和第2天腹腔注射钙黄绿素(25 mg/kg)。取材后采用4%中性多聚甲醛固定并进行microCT扫描和硬组织冰冻切片观察骨量情况。结果卵巢切除组大鼠骨量明显少于假手术组,且股骨经蔗糖梯度脱水后冰冻切片完整,荧光显微镜下能明显观察到2条荧光带且卵巢切除组条带宽度明显小于假手术组。结论利用常规冰冻切片机借助透明胶带的黏附作用可对大鼠股骨进行冰冻切片,能有效提高骨组织切片完整度,此办法操作简单快捷,对仪器要求不高,便于常规实验室的普及应用。

关键词：冰冻切片硬组织切片骨质疏松骨动态学参数

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腺苷酸环化酶对泡沫细胞胆固醇流出的影响

广东医学院学报 2015年第6期33卷 653-656,660页

作者：丁航唐菀泽向乐马卫列覃燕梅刘慧明张志珍广东医学院生物化学与分子生物学教研室广东东莞523808

目的观察腺苷酸环化酶AC1和AC4对泡沫细胞胆固醇流出的影响。方法以人AC1和AC4基因为靶点,设计合成sh RNA寡核苷酸片段,插入慢病毒载体p GMLV-SC1,构建重组慢病毒载体。用构建的AC-sh RNA慢病毒感染THP-1细胞,q PCR检测干扰载体对AC1和... 详细信息

目的观察腺苷酸环化酶AC1和AC4对泡沫细胞胆固醇流出的影响。方法以人AC1和AC4基因为靶点,设计合成sh RNA寡核苷酸片段,插入慢病毒载体p GMLV-SC1,构建重组慢病毒载体。用构建的AC-sh RNA慢病毒感染THP-1细胞,q PCR检测干扰载体对AC1和AC4基因的干扰效果。慢病毒感染泡沫细胞后,采用液体闪烁计数法测定apo A-1介导的泡沫细胞胆固醇流出率。结果测序结果表明,AC1和AC4基因的sh RNA寡聚核苷酸序列已成功插入慢病毒载体。荧光观察显示,两种慢病毒的感染效率达80%。q PCR分析表明,AC1-sh RNA和AC4-sh RNA干扰载体对靶基因有明显的抑制效果(P<0.01),其抑制效率分别为83.9%和80.1%。AC1和AC4-sh RNA慢病毒感染泡沫细胞后,胆固醇流出明显降低(P<0.01)。结论本实验初步证实AC1和AC4可降低泡沫细胞胆固醇流出,提示其可能在胆固醇代谢中起作用。

关键词：腺苷酸环化酶泡沫细胞胆固醇

长链非编码RNA作为绝经后妇女诊断骨质疏松标志物的可行性研究

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骨科 2022年第1期13卷 52-56页

作者：彭松林王尚王振民龙灿玲唐菀泽贺小琴陈高扬深圳市人民医院脊柱外科广东深圳518020

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)NONHSAT005760.2在绝经后骨质疏松妇女和骨量正常妇女外周血中的表达差异,以及其在人骨髓间充质干细胞(h-BMSCs)成骨分化过程中的作用。方法收集2019年全年在我院体检病人样本,选取3... 详细信息

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)NONHSAT005760.2在绝经后骨质疏松妇女和骨量正常妇女外周血中的表达差异,以及其在人骨髓间充质干细胞(h-BMSCs)成骨分化过程中的作用。方法收集2019年全年在我院体检病人样本,选取30例骨密度T值≥-1 SD妇女纳入骨量正常组,30例T值≤-2.5 SD的妇女纳入骨质疏松组。病人年龄为55~70岁,平均为60岁。抽取两组病人少量外周血并提取外周血单个核细胞(PBMC)中的RNA进行lncRNA高通量测序,通过大数据分析和实时荧光定量PCR(qPCR)检测外周血PBMC细胞中lncRNA的差异表达情况。qPCR检测差异表达的lncRNA在h-BMSCs成骨分化过程中的差异表达量。结果与骨量正常组相比,骨质疏松组病人外周血中lncRNA(NONHSAT005760.2)含量明显上调(P<0.01),同时在hBMSC诱导成骨分化过程中,NONHSAT005760.2的表达量随着诱导时间延长而降低。结论NONHSAT005760.2在骨质疏松病人外周血中高表达,而在成骨分化过程中含量显著下降,表明其与骨质疏松密切相关,有望成为骨质疏松症的分子标志物。

关键词：长链非编码RNA 绝经后骨质疏松高通量测序分子标志物

面向异构社交网络的空-频域自适应图神经网络

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计算机科学与探索 2025年第01期 169-186页

作者：张岚泽顾益军彭竞杰中国人民公安大学信息网络安全学院

传统GNN基于同构性假设对近邻节点实现低通滤波功能完成邻域相似信息的聚合嵌入。但在异构图中分属不同类别的节点彼此多建立联系，而相同类别的节点在图拓扑位置上距离较远。这一特点给注重近端邻域信息聚合的传统GNN带来“远端节点信... 详细信息

传统GNN基于同构性假设对近邻节点实现低通滤波功能完成邻域相似信息的聚合嵌入。但在异构图中分属不同类别的节点彼此多建立联系，而相同类别的节点在图拓扑位置上距离较远。这一特点给注重近端邻域信息聚合的传统GNN带来“远端节点信息聚合缺失”与“同构性假设失灵”的问题。因此设计融合空域与频域自适应嵌入机制的异构图神经网络（DA-HGNN）以解决上述问题。针对问题一，设计“远端空域嵌入模块”，旨在通过高阶随机游走迁移概率筛选并聚合远端相似节点，补充“消息传递的跨邻域自适应性”；针对问题二，设计“近端频域嵌入模块”，构建滤波器分离节点高频与低频信号，并设计频域导向型注意力机制对上述信息进行频域偏好的自适应融合，从而减少“同构性假设失灵”所引入的噪声。在四个公开异构图数据集中取得最优实验结果，准确率上平均提高6.41个百分点。在灵敏度分析和消融实验中阐述了超参数的选择机制和各模块的实际性能，并验证了在异构网络中“节点结构相似性”“节点属性向量相似性”以及“节点同构性”三者之间仍呈现正相关关系这一结论。在异构真实数据集中验证了欺诈检测效果，AUC指标提升4.4个百分点。

关键词：异构图图神经网络图表示学习同构性假设失灵

基于分位数回归的服务时长区间预测及鲁棒手术指派方法

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控制与决策 2025年第1期 317-326页

作者：张新泽张舒政王昱高哲明东北大学工商管理学院东北大学信息科学与工程学院

手术部是医院的核心部门,合理制定手术计划有助于医疗资源的高效配置,对提升医疗服务质量至关重要.手术时长的不确定性为手术调度带来了挑战,为了应对手术时长的不确定性,基于历史手术数据,应用方差膨胀因子减少患者特征之间共线性.基... 详细信息

手术部是医院的核心部门,合理制定手术计划有助于医疗资源的高效配置,对提升医疗服务质量至关重要.手术时长的不确定性为手术调度带来了挑战,为了应对手术时长的不确定性,基于历史手术数据,应用方差膨胀因子减少患者特征之间共线性.基于分位数回归刻画手术时长区间,构建患者特征驱动的手术时长不确定集;在此基础上,考虑术后重症监护室床位资源限制,建立鲁棒手术指派模型,决策开放的手术室和患者的手术日期,最后基于真实数据测试方法的有效性.实验结果显示,通过调节模型参数,所提出模型在降低运营成本和减少手术室加班时间方面优于确定性模型;与随机规划模型相比,在牺牲较少加班时长情况下,降低了总运营成本,并在求解时间上具有优势.

关键词：手术指派鲁棒优化数据驱动优化不确定性分位数回归下游资源容量

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