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基于β-香树脂醇合成酶基因多态性的甘草酸生物合成的分子机制研究

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基于β-香树脂醇合成酶基因多态性的甘草酸生物合成的分子机制研究

作者：马永生北京中医药大学

学位级别：硕士

甘草是我国最常用的大宗药材之一,具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛和调和诸药等作用。由于国务院明令禁止采挖野生甘草,因此中药材市场上的商品甘草为栽培甘草。然而,本课题组前期调查研究表明栽培甘草中甘草酸含量普遍偏低... 详细信息

甘草是我国最常用的大宗药材之一,具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛和调和诸药等作用。由于国务院明令禁止采挖野生甘草,因此中药材市场上的商品甘草为栽培甘草。然而,本课题组前期调查研究表明栽培甘草中甘草酸含量普遍偏低,难以达到《中国药典》规定的最低标准（2.0%）,严重影响了栽培甘草的质量以及含甘草中成药的疗效。甘草酸（Glycyrrhizic acid,GA）是甘草中最为重要的活性成分,也是《中国药典》规定的甘草指标性成分之一,其为五环三萜类化合物,是经由甲羟戍酸（Mevalonic acid,MVA）途径,在众多关键酶的调控作用下合成的。其中,β-香树脂醇合成酶（β-amyrin synthase,β-AS）催化2,3-氧化鲨烯环化生成β-香树脂醇,是形成五环三萜骨架结构的关键酶,也是整条代谢途径中与甘草酸形成直接相关的重要酶。因此,对其编码基因开展研究,分析其基因多态性,有助于阐明甘草酸生物合成的分子机制,为提高栽培甘草的质量提供理论支持。功能基因多态性之所以会导致代谢产物的差异,主要存在两方面原因,一是基因的多态性导致了基因表达水平的差异,另一方面则是基因的多态性导致了其编码酶结构及功能的差异。因此,本论文提出了“功能基因-酶变异是甘草酸形成的分子机制”的假说,拟从功能基因和酶两个层面进行递进式分析。首先分析β-AS基因多态性,筛选甘草酸缺失及高水平积累所对应的特异β-AS基因型,并进一步对其进行基因表达分析以及编码酶体外诱导表达分析,以期全面解析甘草酸形成的分子机制。本论文对于优质甘草药材的分子育种具有重要的理论价值和实践意义,同时对于其他药用植物的同类研究也具有指导意义。本论文采用如下方法开展相应研究工作:利用HPLC法对不同产地的3种基原甘草进行了 18α-甘草酸与18β-甘草酸的含量测定;运用RT-PCR法克隆甘草β-AS基因,并对其多态性进行分析,筛选得到甘草酸高/低含量对应的特异β-AS基因型;利用qRT-PCR对各β-AS基因型进行相对表达量分析;以pPIC9K为载体,构建携带甘草特异β-AS基因型的毕赤酵母GS115酵母工程菌;利用甲醇对其进行诱导表达。本论文取得了以下研究结果:（1）18α-甘草酸与18β-甘草酸的含量测定结果:18β-甘草酸的含量在3种基原甘草样品间均存在显著性差异,其中乌拉尔甘草含量最高,光果甘草次之,而胀果甘草最低;18α-甘草酸含量在乌拉尔甘草与光果甘草间不存在显著性差异,而在乌拉尔甘草与胀果甘草、光果甘草与胀果甘草间均存在显著性差异,其中乌拉尔甘草18cα-甘草酸含量最高,光果甘草次之,而胀果甘草最低。此外,相关性分析结果显示,所有甘草样品中18α-甘草酸与18β-甘草酸含量之间均存在相关关系。根据以上含量测定结果确定了 18α-甘草酸缺失组、18α-甘草酸高含量组、18β-甘草酸低含量组、18β-甘草酸高含量组,对各组甘草样品进行进一步的β-AS基因多态性分析。（2）β-AS基因多态性分析结果:扩增得到13条甘草β-AS基因cDNA序列,共计11种单倍型,编码5种氨基酸序列类型。甘草β-AS基因编码区全长2289 bp,共编码762个氨基酸残基。18α-甘草酸缺失组及18β-甘草酸低含量组甘草样品在104 bp（G-C）及106 bp（G-C）均存在特异变异位点,分别导致氨基酸序列中35位上丝氨酸-苏氨酸（S-T）转变以及36位上丙氨酸-脯氨酸（A-P）转变,其中35-T+36-P为18α-甘草酸缺失组及18β-甘草酸低含量组所对应的特异β-AS氨基酸序列变异类型,而35-S+36-A则为18α-甘草酸高含量组及18β-甘草酸高含量组所对应的特异β-AS氨基酸序列变异类型。（3）β-AS基因相对表达量分析结果:在甘草不同样品间β-AS基因表达水平差异显著,就整体而言,18α-甘草酸高含量组甘草样品的β-AS基因相对表达水平要高于18α-甘草酸缺失组甘草样品,18β-甘草酸高含量组甘草样品的β-AS基因相对表达水平要高于18β-甘草酸低含量组甘草样品。从而说明18α-甘草酸与18β-甘草酸的高水平积累与β-AS基因的高水平表达具有正相关关系。（4）特异性β-AS基因毕赤酵母工程菌构建及表达分析:以pPIC9K为载体,构建了携带甘草特异性β-AS基因型的毕赤酵母 GS115 工程菌GS115-pPIC9K-BAS-3和GS115-pPIC9K-BAS-8,对其进行His+转化子筛选、遗传霉素G418筛选、Mut+型重组子筛选、PCR验证及测序验证,利用甲醇对验证正确的工程菌进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳进行检测,得到与甘草β-AS酶蛋白大小一致（87kDa）的产物,即诱导表达成功。本论文为解析甘草酸生物合成的分子机制、提高栽培甘草的质量奠定了基础,也为甘草的优

关键词：甘草甘草酸 β-AS 基因多态性相对表达毕赤酵母诱导表达

搅拌摩擦焊TU1无氧铜焊接接头组织特征与力学行为研究

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搅拌摩擦焊TU1无氧铜焊接接头组织特征与力学行为研究

作者：徐永生天津大学

学位级别：硕士

针对单晶硅区熔加热设备的TU1无氧铜焊接构件采用搅拌摩擦焊(Friction Stir Welding,FSW)进行对接接头焊接工艺试验研究,深入分析工艺参数及焊后热处理对焊缝成形、组织特征、力学性能及导电性能的影响趋势,为优化TU1无氧铜构件的FSW工... 详细信息

针对单晶硅区熔加热设备的TU1无氧铜焊接构件采用搅拌摩擦焊(Friction Stir Welding,FSW)进行对接接头焊接工艺试验研究,深入分析工艺参数及焊后热处理对焊缝成形、组织特征、力学性能及导电性能的影响趋势,为优化TU1无氧铜构件的FSW工艺及改善产品质量提供试验依据。研究表明:TU1无氧铜在焊接转速为300-1000 rpm、焊接速度为60-200mm/min、下压量为0.1-0.2 mm范围中均可获得焊缝成形良好、完全致密及无缺陷的FSW接头,焊缝区主要由搅拌区(Stirring Zone,SZ)、热影响区(Heat Affected Zone,HAZ)及母材区(Base Metal,BM),很难观察到热力影响区(Thermal-Mechanical Affected Zone,TMAZ)。当焊接转速小于300 rpm时SZ为细小等轴晶并包含少量孪晶组织特征,其平均晶粒尺寸为6.5μm,标准差为3.67μm,HAZ具有细小等轴晶与BM轧制晶粒的混合组织特征;当转速大于300 rpm时随着转速不断增加,SZ平均晶粒尺寸明显增大。对给定转速增加焊速可以减少SZ及HAZ晶粒尺寸,但焊速对晶粒尺寸的影响明显小于转速的影响。而HAZ宽度与参数(ω/υ)近似成正比关系,由此可见焊接转速是影响焊接热输入的关键参数。与TU1无氧铜原始BM比较接头的显微硬度、拉伸强度及延伸率均有所降低,其中SZ及HAZ显微硬度最低,并且随着焊接转速提高焊接热输入越大,导致接头显微硬度越低、并且硬度下降范围也越宽;当焊接转速及焊接速度分别为300 rpm及60 mm/min时焊接接头拉伸强度最高达到BM的91%。再结晶及回复导致的位错密度大幅度下降是SZ及HAZ产生软化的主要原因;而SZ的细晶强化作用及织构变化对其拉伸强度影响较小。接头焊缝区导电性能略有升高,约为1-2%,其它区域导电性能基本不变。经过250℃、300℃、500℃保温时间90 min、240 min退火热处理后焊缝区力学性能虽然降低,但是其组织特征逐渐均匀。EBSD分析表明:随着热处理温度及保温时间的延长接头组织发生回复及再结晶导致整体焊缝区组织及性能均匀化、拉伸强度降低,同时HAZ不再是焊接接头力学性能最薄弱的区域。

关键词： TU1无氧铜搅拌摩擦焊组织特征力学性能导电性能软化机制

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冻融胚胎移植结局的相关影响因素分析

中国妇幼保健 2012年第16期27卷 2490-2492页

作者：唐永梅韦继红韦立红牟联俊广西壮族自治区柳州市妇幼保健院生殖健康助孕中心 545001

目的:探讨与胚胎冻融及移植结局相关的因素,以提高冻融胚胎的移植妊娠率。方法:通过对676个冻融周期的胚胎解冻及移植结果进行分析,比较不同的受精方式、内膜准备方法、冷冻时的胚龄、冷冻胚胎解冻周期数对移植结局的影响。结果:不同受... 详细信息

目的:探讨与胚胎冻融及移植结局相关的因素,以提高冻融胚胎的移植妊娠率。方法:通过对676个冻融周期的胚胎解冻及移植结果进行分析,比较不同的受精方式、内膜准备方法、冷冻时的胚龄、冷冻胚胎解冻周期数对移植结局的影响。结果:不同受精方式的胚胎复苏存活率、卵裂球完整率、临床妊娠率及胚胎种植率比较差异无统计学意义(P>0.05)。不同的内膜准备方法、解冻次数的临床妊娠率及胚胎种植率比较差异无统计学意义(P>0.05)。D2胚胎与D3胚胎的胚胎存活率、完整率、种植率和妊娠率比较差异有统计学意义(P<0.05)。妊娠组的胚胎存活率和完整胚胎率与非妊娠组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:胚胎存活率和完整胚胎率对冻融胚胎的移植结局有影响,D2胚胎比D3胚胎有较高的存活率、完整率、种植率和妊娠率。

关键词：冻融胚胎移植妊娠率相关因素

《人民日报》中美贸易争端报道中的引导策略研究（2018-2019）

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《人民日报》中美贸易争端报道中的引导策略研究（2018-2019）

作者：王永生南京师范大学

学位级别：硕士

2018年3月22日,美国总统特朗普正式签署《总统备忘录》,宣布对中国部分出口商品大规模加征关税,以制裁中国的倾销行为。中国随之也宣布了一系列措施反制美国的贸易保护行为。中美贸易争端中夹杂着报道战和信息战,《人民日报》在中美贸... 详细信息

2018年3月22日,美国总统特朗普正式签署《总统备忘录》,宣布对中国部分出口商品大规模加征关税,以制裁中国的倾销行为。中国随之也宣布了一系列措施反制美国的贸易保护行为。中美贸易争端中夹杂着报道战和信息战,《人民日报》在中美贸易争端期间进行了大量的报道。作为中央机关报、主流媒体,《人民日报》需要向民众进行解释引导,这对于稳定人心,凝聚共识具有重要意义。本研究将从《人民日报》对中美贸易争端报道的新闻文本着手,以2018年3月22日特朗普签署《总统备忘录》为研究起点。因2020年受新冠疫情以及美国大选等多种因素的影响,媒体对中美贸易争端的关注相对减少。故本研究以2019年12月31日中美贸易争端达成暂时协议期间的报道为研究截止日期。本文首先对《人民日报》1949-2018年期间中美贸易争端的相关背景以及《人民日报》刊发相关报道进行了回顾梳理,并分析不同时期的引导策略。继而,本文采用质化与量化分析相结合的方法,从认知心理学角度分析《人民日报》在2018—2019年期间如何从认知、情绪与行为倾向三个方面对受众进行引导,探究《人民日报》在重大国际争端事件中的引导策略。研究发现,在认知引导方面,《人民日报》从渠道、题材、体裁与信源四个方向发力,为受众提供大量的高质量信息,引导受众对于中美贸易争端正确认知。在情绪引导方面,《人民日报》通过情绪感染将报道意向传递给受众,激发受众内心情绪共鸣,并把控情绪感染的力度,防止群体情绪极化,最后及时发表权威评论,阻止负面观点蔓延,积极引导正向情绪。在认知与情绪引导的基础上,《人民日报》积极对受众的行为倾向进行引导,推动受众正向解读信息,防止不良倾向转化为过激行为,并积极报道优秀企业示范行为,引导中小企业的行为倾向。最后,笔者着重对于《人民日报》报道中美贸易中的引导策略的启示进行了总结。整体来看,《人民日报》在中美贸易争端报道中表现客观,对于中美贸易争端进行了详尽的阐述,并以事实为依据,采用多种方式对受众积极引导有效的发挥了主流媒体的舆论引导作用。

关键词：《人民日报》中美贸易争端引导策略

α7nAChR介导的胆碱能抗炎通路在低强度迷走神经刺激抑制心房颤动中的作用

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α7nAChR介导的胆碱能抗炎通路在低强度迷走神经刺激抑制心房颤动...

作者：钱永生武汉大学

学位级别：硕士

目的探讨α7nAChR介导的胆碱能抗炎通路在低强度迷走神经刺激(LL-VNS)抑制心房颤动中的作用。方法18只健康比格犬随机分为假手术组(n=6)、LL-VNS组(n=6)和MLA+LL-VNS组(n=6)。所有犬均行右心房800次/分快速刺激制备急性心房颤动模型,于... 详细信息

目的探讨α7nAChR介导的胆碱能抗炎通路在低强度迷走神经刺激(LL-VNS)抑制心房颤动中的作用。方法18只健康比格犬随机分为假手术组(n=6)、LL-VNS组(n=6)和MLA+LL-VNS组(n=6)。所有犬均行右心房800次/分快速刺激制备急性心房颤动模型,于每h末监测心房及肺静脉ERP和房颤诱发情况。第3h末,假手术组给予GP注射生理盐水、LL-VNS组给予GP注射生理盐水加LL-VNS、MLA+LL-VNS组给予GP注射MLA加LL-VNS。所有犬分别于基线期、3h、6h采集静脉血检测IL-6、TNF-α和ACh水平,实验结束后取心房组织检测IL-6、TNF-α、ACh和NF-κB及STAT3蛋白表达情况。结果(1)右心房刺激3h后,3组犬心房及肺静脉ERP显著缩短,房颤诱发率和持续时间增加。3h至6h,假手术组心房及肺静脉ERP持续缩短,房颤诱发率和持续时间增加。LL-VNS组3h后ERP逐渐延长,实验终点房颤诱发率和持续时间与3h相比明显缩短(P<0.05)。MLA+LL-VNS组每h电生理指标变化与假手术组差异无统计学意义。(2)与假手术组相比,6h后LL-VNS组和MLA+LL-VNS组血清中炎性因子水平显著下降(pg/ml)[IL-6:(100.96±5.65)vs(119.33±6.60),P<0.05;(102.35±5.34)vs(119.33±6.60),P<0.05;TNF-α:(17.75±1.66)vs(22.12±1.95),P<0.05;(17.91±2.15)vs(22.12±1.95),P<0.05],血清 ACh 水平升高(μg/ml)[(150.79±12.77)vs(122.39±3.73),P<0.05;(145.09±4.93)vs(122.39±3.73),P<0.05]。(3)LL-VNS组心房组织中炎性因子水平较另两组显著降低(pg/ml)[IL-6:(192.38±7.10)vs(212.16±10.21),P<0.05;(192.38±7.10)vs(215.87±11.70),P<0.05;TNF-α:(26.03±3.56)vs(34.53±3.18),P<0.05;(26.03±3.56)vs(33.87±2.86),P<0.05],LL-VNS组和MLA+LL-VNS组心房组织中ACh水平较假手术组显著升高(μg/ml)[RA:(55.91±4.16)vs(30.69±3.18),P<0.05;(46.43±3.85)vs(30.69±3.18),P<0.05;LA:(49.22±3.69)vs(35.38±3.16),P<0.05;(40.42±2.42)vs(35.38±3.16),P<0.05]。(4)与假手术组和MLA +LL-VNS组相比,LL-VNS组心房组织中NF-κB蛋白水平显著减少(P<0.01),STAT3蛋白水平增加(P<0.05)。结论LL-VNS可抑制心房肌电重构及房颤的诱发和维持,其机制可能与α7nAChR介导的胆碱能抗炎通路有关。

关键词：心房颤动迷走神经胆碱能抗炎通路电重构炎性因子

纳米磁性Fe3O4粉体掺杂聚苯乙烯ICF靶丸材料制备

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原子能科学技术 2008年第9期42卷 816-820页

作者：宋丽贤卢忠远唐永建廖其龙易勇西南科技大学材料科学与工程学院四川绵阳621010 中国工程物理研究院四川绵阳621900

为实现惯性约束核聚变中无接触点打靶实验构想,探索在聚苯乙烯(PS)中掺杂纳米磁性粉体,以制备磁性靶丸。采用本体聚合工艺制备了Fe3O4/PS磁性靶丸复合材料,通过FTIR、TG-DSC、SEM、VSM等手段对该材料进行了分析表征。结果表明:Fe3O4/PS... 详细信息

为实现惯性约束核聚变中无接触点打靶实验构想,探索在聚苯乙烯(PS)中掺杂纳米磁性粉体,以制备磁性靶丸。采用本体聚合工艺制备了Fe3O4/PS磁性靶丸复合材料,通过FTIR、TG-DSC、SEM、VSM等手段对该材料进行了分析表征。结果表明:Fe3O4/PS靶丸复合材料的饱和磁化强度随磁性粉体含量的增加而增大;适量粉体的掺入提高了复合材料的拉伸强度和冲击强度,且随粉体含量的增加而增强;所制备的磁性靶丸复合材料悬浮时所需的外界磁场相对较弱,其磁性能满足磁悬浮的条件。

关键词：惯性约束聚变聚苯乙烯 Fe3O4掺杂磁性靶丸材料

利用半动力半几何学方法解算上海—武汉台站间基线长度

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地壳形变与地震 1998年第4期18卷 18-21页

作者：彭碧波吴斌夏治中郭唐永中科院测量与地球物理研究所中国地震局地震研究所

在人造卫星大地测量技术中，半动力半几何学方法满足了几何学法的严格同步的要求和动力法的高精度理论模型的要求，又有利于实时求解参数。讨论并研究了半动力半几何方法，以激光击中卫星的时刻为基准，利用ρ０－ρｃ来内插同步测距资... 详细信息

在人造卫星大地测量技术中，半动力半几何学方法满足了几何学法的严格同步的要求和动力法的高精度理论模型的要求，又有利于实时求解参数。讨论并研究了半动力半几何方法，以激光击中卫星的时刻为基准，利用ρ０－ρｃ来内插同步测距资料，直接求解基线长度，最后利用收集到的两圈同步ＬＡＧＥＯＳ卫星激光测距资料试算了上海—武汉台站间的基线长度，并对结果进行了讨论。

关键词：同步观测同步距离差基线激光测距几何学

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基于模糊理论的木材X射线图像分析与处理

基于模糊理论的木材X射线图像分析与处理

作者：李永生东北林业大学

学位级别：硕士

木材无损检测是一门新兴的、综合性的、非破坏木材内部结构的检测方法,在不损坏木材表面和结构的前提下,准确地检测出木材内部缺陷,是充分利用森林资源的重要手段,对科学用材、合理选材,有着重要的意义。本文利用X射线作为检测手段,进... 详细信息

木材无损检测是一门新兴的、综合性的、非破坏木材内部结构的检测方法,在不损坏木材表面和结构的前提下,准确地检测出木材内部缺陷,是充分利用森林资源的重要手段,对科学用材、合理选材,有着重要的意义。本文利用X射线作为检测手段,进行木材的无损检测,主要是利用了X射线的透射过物体之后产生的射线强度的差异来判断木材的缺陷所在,在木材的另一端利用图像接收装置对图像进行接收,将图像数字化处理后送入到计算机中存储。应用计算机数字图像处理技术和模糊理论对木材X射线图像进行处理,有效的对中空、腐朽缺陷的图像进行处理。本文处理的是对象是X射线数字化得到的数字图像,图像中含有大量的噪声,所以要对图像进行预处理。本文首先对木材X射线图像进行直方图均衡化、滤波、图像增强等预处理,使得处理后的图像的效果更佳,更便于后续的处理和分析。针对X射线在成像的过程中受到各种因素的影响,而使要分割的目标和背景之间一般有带有一定的相似性和不确定性,而且木材X射线图像对比度差的特点和固有的模糊性,模糊分析的应用更符合实际图像的特性,能得到较好的处理效果。最后讨论了木材X射线图像模糊处理,对木材中空和腐朽图像进行了模糊增强处理,并针对木材X射线图像对比度差的特点和固有的模糊性,重点讨论了模糊c-均值聚类(FCM)算法,将FCM应用到木材X射线图像的分割处理中,并在具体处理图像中进行验证,取得较好的分割效果。试验结果表明此方法检测木材内部缺陷效果明显。该方法同样适用于木材其他内部缺陷的检测,本文的研究为木材缺陷的研究和处理提供了一种新的理论应用方法。

关键词：无损检测木材X射线图像图像处理模糊增强 FCM

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增加农村公共物品的供给协调城乡经济发展

农业经济 2004年第8期 6-7页

作者：楚永生丁子信聊城大学商学院山东聊城252059

当前,我国农村发展远远落后于城市,农民收入远低于城市居民收入,第一产业的劳动生产率远低于全社会劳动生产率,是一个不争的事实.城乡经济发展的不均衡,原因是多方面的,其中公共物品供给的不均衡是非常重要的原因.据统计,2002年国家财... 详细信息

当前,我国农村发展远远落后于城市,农民收入远低于城市居民收入,第一产业的劳动生产率远低于全社会劳动生产率,是一个不争的事实.城乡经济发展的不均衡,原因是多方面的,其中公共物品供给的不均衡是非常重要的原因.据统计,2002年国家财政用于农业的仅为1457亿元,仅占财政总支出的7.7%.财政用于经济建设的支出为6674亿元,其中用于支援农村生产支出和农林水利气象等部门事业费918亿元、农业基本建设481亿元,仅占21%.同时,需要指出的是农业投入的"非农化"现象非常严重,导致用于农村经济发展的财政资金进一步减少.农村发展资金的匮乏和公共物品的供给障碍,会直接造成城乡经济发展的不平衡.1999年,城镇居民家庭人均收入与农村居民人均收入之比为2.65:1,2000年扩大为2.79:1,2001年进一步扩大为2.9:1.当前,我国的农村改革已进入以城乡协调发展为目标的结构性改革新阶段,消除农村公共物品供给障碍,增加农村公共物品的供给,协调城乡经济发展已成为当务之急.

关键词：农村公共物品供给机制城乡统筹协调发展中国农村财政农民收入农业投资社会保障体系