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猪胸膜肺炎放线杆菌感染小鼠所致炎症中TLR-4信号通路涉及细胞焦亡

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微生物学报 2015年第5期55卷 650-656页

作者：胡佩佩黄复深牛俊超唐昭山湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128

【目的】探讨革兰氏阴性菌胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus Pleuropneumoniae,APP)感染小鼠致肺病变的分子细胞机制,以改善猪传染性胸膜肺炎的防治。【方法】滴鼻法感染小鼠,观察肺部眼观病变,石蜡切片HE染色观察肺组织病变。RT-PCR和q... 详细信息

【目的】探讨革兰氏阴性菌胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus Pleuropneumoniae,APP)感染小鼠致肺病变的分子细胞机制,以改善猪传染性胸膜肺炎的防治。【方法】滴鼻法感染小鼠,观察肺部眼观病变,石蜡切片HE染色观察肺组织病变。RT-PCR和q PCR方法检测小鼠肺部的Caspase-1、Caspase-3、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18、TLR-4表达量的变化。【结果】小鼠在感染后48h内死亡,解剖后观察小鼠肺部有严重出血和炎症。实验组小鼠肺组织IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α的表达水平显著增加;TLR-4的表达量显著上调;肺部组织Caspase-1的表达水平明显升高,而Caspase-3的表达水平未见明显变化。【结论】TLR-4信号通路可能参与APP感染引起的肺部炎症的发生,APP感染后激活TLR-4信号通路使有关细胞释放炎症因子,引起的肺部炎症。炎症可能涉及Caspase-1参与的细胞焦亡。

关键词：猪传染性胸膜肺炎小鼠病理学分子和细胞机制 TLR-4信号通路细胞焦亡

不同胁迫博落回根中生物碱含量变化及相关基因表达量分析

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分子植物育种 2018年第4期16卷 1307-1312页

作者：余林岚程辟唐其周利王伟唐昭山曾建国湖南农业大学园艺园林学院长沙410128 湖南美可达生物资源股份有限公司长沙410331 国家中药材生产(湖南)技术中心长沙410128 湖南农业大学兽用中药资源与中兽药创制国家地方联合工程研究中心长沙410128

本研究通过对PEG6000模拟干旱以及机械受损等方法胁迫博落回,采用HPLC方法检测博其根中原阿片碱、别隐品碱、血根碱、白屈菜红碱的含量,结果 30%PEG6000模拟干旱以及机械受损均可使博落回根中终产物生物碱血根碱、白屈菜红碱含量上升,... 详细信息

本研究通过对PEG6000模拟干旱以及机械受损等方法胁迫博落回,采用HPLC方法检测博其根中原阿片碱、别隐品碱、血根碱、白屈菜红碱的含量,结果 30%PEG6000模拟干旱以及机械受损均可使博落回根中终产物生物碱血根碱、白屈菜红碱含量上升,中间产物原阿片碱、别隐品碱含量下降;且血根碱、白屈菜红碱合成基因DBOX、P6H表达量上调;用实时荧光定量RT-PCR检测生物碱合成相关基因的表达量,血根碱、白屈菜红碱合成基因DBOX、P6H表达量上调。适当干旱以及机械受损有利于博落回根中血根碱、白屈菜红碱积累,为其在干旱、石漠化地区种植以及在种植过程中结合家畜喂养提供理论依据。

关键词：博落回干旱胁迫生物碱含量基因表达量

博落回愈伤抗除草剂Bar基因的转化以及抗性功能的检测

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分子植物育种 2018年第4期16卷 1127-1132页

作者：余林岚唐其程辟黄鹏周利唐昭山曾建国湖南农业大学兽用中药资源与中兽药创制国家地方联合工程研究中心长沙410128 湖南美可达生物资源股份有限公司长沙410331 湖南农业大学园艺园林学院长沙410128 国家中药材生产(湖南)技术中心长沙410128

本研究成功建立了一个全新的以博落回愈伤为外植体的遗传转化体系。该遗传体系将抗草丁膦的Bar基因整合到pcambia2301质粒,构建植物载体,通过农杆菌介导转染博落回愈伤,选用Bar基因为筛选标记,采用PPT进行筛选,对转染的愈伤和组培苗用PC... 详细信息

本研究成功建立了一个全新的以博落回愈伤为外植体的遗传转化体系。该遗传体系将抗草丁膦的Bar基因整合到pcambia2301质粒,构建植物载体,通过农杆菌介导转染博落回愈伤,选用Bar基因为筛选标记,采用PPT进行筛选,对转染的愈伤和组培苗用PCR、RT-PCR、GUS染色等方法验证为阳性,获得了抗除草剂的博落回植株。该遗传体系相比以叶片为外植体、抗生素为筛选标记的遗传体系,更能加快转化时间,缩短转化周期,而且假阳性更低,对于博落回生物学研究具有一定帮助。

关键词：博落回愈伤 Bar 遗传转化体系

猪APP rOmpP2诱导小鼠抗攻击感染的免疫保护力研究

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农业生物技术学报 2017年第2期25卷 299-306页

作者：胡佩佩杨婷婷黄复深唐昭山张宇航湖南农业大学动物医学院

猪传染性胸膜肺炎(porcine contagious pleuropneumoni,PCP)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)感染猪(Sus scrofa)引起的一种接触性呼吸道疾病,是世界养猪业的五大疫病之一。为检测猪APP重组外膜蛋白P2(recombinant outer membrane protein P2,rOmpP2)的免疫保护作用,本研究根据Gen Bank中已报道的APP Omp P2基因序列设计引物对,以APP的基因组为模板PCR扩增Omp P2,测序后在NCBI登录(登录号:KM357903),并进行生物信息学分析,该基因由1 131 bp组成,编码一个含376个氨基酸的蛋白质,为一外膜孔道蛋白,该编码蛋白在APP不同的血清型之间具有很高同源性。将rOmpP2亚克隆至p ET32a(+)载体,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达APP rOmpP2蛋白,经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测以及Western blot鉴定,结果表明,在42 k D处出现特异性条带,重组菌表达的rOmpP2能够被相应的阳性血清识别。动物保护实验采用BALB/c小鼠(Mus musculus)进行,免疫球蛋白G(immunoglobulin G,Ig G)抗体滴度采用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测。结果表明,铝佐剂+50μg rOmpP2、铝佐剂+30μg r Om P2及铝佐剂+10μg rOmpP2组中,小鼠的存活率分别为50%,30%和10%,佐剂组和生理盐水对照组全部死亡,存活小鼠精神状况慢慢恢复正常,并采食。rOmpP2皮下免疫注射可诱导小鼠产生免疫应答和较高的抗攻击感染的免疫保护力。研究结果为进一步筛选猪传染性胸膜肺炎分子疫苗提供了基础资料。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌(APP) 重组外膜蛋白2(rOmpP2) 免疫保护效果

猪胸膜肺炎放线杆菌分裂体形成相关基因的分析

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中国兽医科学 2016年第5期46卷 591-596页

作者：唐昭山牛俊超黄复深邹剑锋胡佩佩李海明湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128 湖南农业大学分析测试中心湖南长沙410128

猪胸膜肺炎放线杆菌细胞分裂的形态利用扫描电镜进行观察。根据文献报道收集细菌细胞分裂体形成的相关基因信息;应用BLAST、Smart和Pfam软件和GenBank中的有关序列,分析参与猪胸膜肺炎放线杆菌分裂体形成相关基因;根据GenBank中已报道的... 详细信息

猪胸膜肺炎放线杆菌细胞分裂的形态利用扫描电镜进行观察。根据文献报道收集细菌细胞分裂体形成的相关基因信息;应用BLAST、Smart和Pfam软件和GenBank中的有关序列,分析参与猪胸膜肺炎放线杆菌分裂体形成相关基因;根据GenBank中已报道的DNA序列设计Fts基因家族基因的引物,以App血清1型基因组为模板经PCR扩增有关基因片段并测序,再通过序列比对进行同源性分析。结果,猪胸膜肺炎放线杆菌细胞分裂主要发生在细胞中部,参与分裂体形成的相关基因有24种,其中Fts家族基因包括FtsZ,FtsB、FtsL、FtsH、FtsW、ZipA、FtsE、FtsX、FtsQ和FtsA共10种,这些基因在不同的血清型有很高的同源性。但未发现与FtsZ聚合相关的MinC、MinD和MinE。结果表明,猪胸膜肺炎放线杆菌的细胞分裂主要发生在细胞中部,分裂体形成机制与其他细菌存在差异。

关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌分裂体形成相关基因 Fts基因家族扫描电镜

温度对小果博落回种子萌发的影响与血根碱合成基因表达分析

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分子植物育种 2019年第7期17卷 2159-2162页

作者：江若岚黄鹏汪鹏唐昭山曾建国刘薇湖南农业大学湖南省中兽药重点实验室长沙410128 湖南农业大学园艺园林学院长沙410128 湖南农业大学生命科学学院长沙410128 湖南省美可达生物资源有限公司长沙410005 中兽药与中兽药创制国家与地方联合工程研究中心长沙410128 湖南农业大学分析测试中心长沙410128

博落回属植物属于罂粟科,包括两个种:博落回Macleaya cordata (Willd.) R. Br.与小果博落回Macleaya microcarpa (Maxim.) Fedde.。博落回属植物中含有一些重要的药用活性成分。一些包含博落回提取物的产品广泛用于饲料添加剂和其他领... 详细信息

博落回属植物属于罂粟科,包括两个种:博落回Macleaya cordata (Willd.) R. Br.与小果博落回Macleaya microcarpa (Maxim.) Fedde.。博落回属植物中含有一些重要的药用活性成分。一些包含博落回提取物的产品广泛用于饲料添加剂和其他领域。当前对于博落回属植物资源的研究主要集中于博落回,而对小果博落回资源的研究较少。主要是由于小果博落回无菌苗较难获取,使得遗传转化等方面的研究很难进行。本研究在5个不同温度下筛选出小果博落回最优的萌发温度,并且分析了3个不同时期的小果博落回无菌苗中血根碱合成相关基因的表达情况。除此以外,还比较了同一时期的小果博落回与博落回的根、茎、叶组织中的血根碱合成相关基因的表达情况,为下一步小果博落回的资源开发提供了前期研究基础。

关键词：小果博落回种子萌发基因表达

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猪肝微粒体的制备与活性测定

黑龙江畜牧兽医 2013年第5期 136-138页

作者：田世杰刘兆颖唐昭山刘琪王婕敏朱若岑伍勇孙志良湖南农业大学动物医学院长沙410128 湖南农业大学东方科技学院长沙410128

为了获得高活性的猪肝微粒体用于药物代谢研究,试验采用钙沉淀法制备猪肝微粒体,考马斯亮蓝法测定肝微粒体蛋白浓度,可见光-紫外分光光度法测定肝微粒体细胞色素P450酶系含量。结果表明:猪肝微粒体的蛋白含量为(10.653±0.256)mg/g,细... 详细信息

为了获得高活性的猪肝微粒体用于药物代谢研究,试验采用钙沉淀法制备猪肝微粒体,考马斯亮蓝法测定肝微粒体蛋白浓度,可见光-紫外分光光度法测定肝微粒体细胞色素P450酶系含量。结果表明:猪肝微粒体的蛋白含量为(10.653±0.256)mg/g,细胞色素P450含量为(0.903±0.021)nmol/mg,细胞色素b5含量为(0.429±0.038)nmol/mg,氨基比林-N-脱甲基酶活性为(0.226±0.010)μmol/(***),红霉素-N-脱甲基酶活性为(0.055±0.008)μmol/(***),NADPH-细胞色素C还原酶活性为(4.658±1.170)nmol/(***)。说明钙沉淀法制备的猪肝微粒体具有较好的活性,所用的可见光-紫外分光光度法灵敏、可靠,重复性较好。

关键词：猪肝微粒体钙沉淀法可见光-紫外分光光度法细胞色素P450

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北京鸭对博落回散的耐受性试验

黑龙江畜牧兽医 2024年第7期 112-118,124页

作者：姚开兰董朕石达友李长虹唐昭山曾建国柳亦松湖南农业大学动物医学院长沙410128 湖南农业大学中兽药湖南省重点实验室长沙410128 华南农业大学兽医学院广州510642 湖南美可达生物资源股份有限公司长沙410331

为了探究北京鸭对博落回散的耐受性,为博落回散在饲料中的安全添加剂量提供数据支持,试验将210只1日龄北京鸭分为5组,对照组饲喂不添加任何药物的基础日粮,30,90,150,300 mg/kg组分别饲喂含30,90,150,300 mg/kg博落回散的基础日粮,连续... 详细信息

为了探究北京鸭对博落回散的耐受性,为博落回散在饲料中的安全添加剂量提供数据支持,试验将210只1日龄北京鸭分为5组,对照组饲喂不添加任何药物的基础日粮,30,90,150,300 mg/kg组分别饲喂含30,90,150,300 mg/kg博落回散的基础日粮,连续饲喂42 d,分别在14,28,42日龄早晨投料前称量北京鸭的体重,测定各组鸭在1~14、15~28、29~42、1~42日龄的生长性能;分别在14,28,42日龄采集血液,测定各组血常规与血清生化指标;42日龄时屠宰各组北京鸭,采集器官测定器官指数,进行病理解剖并观察组织病理学变化,评价北京鸭对不同剂量博落回散的耐受性。结果表明:与对照组相比,30,90,150 mg/kg组1~42日龄间的日增重和饲料转化率显著提高(P0.05);各组在14日龄时血常规与血清生化指标差异不显著(P>0.05);在28,42日龄时,30,90,150 mg/kg组白细胞数、红细胞数、血红蛋白含量与对照组差异不显著(P>0.05),300 mg/kg组与对照组差异显著(P<0.05);300 mg/kg组肝脏重和肝脏指数显著高于对照组(P<0.05)。90,150,300 mg/kg组均有1只北京鸭死亡,对照组有2只死亡;150 mg/kg组有1只北京鸭肝脏颜色偏黄,300 mg/kg组有4只北京鸭肝脏肿大、颜色偏黄,发生轻度脂肪变性、肝细胞肿大、胞浆内发现近圆形空泡等病理变化。说明在饲料中添加30~90 mg/kg的博落回散可安全有效地促进北京鸭生长,当添加量为300 mg/kg时,北京鸭表现不耐受,生长性能下降,饲料转化率降低,并表现出肝脏损伤。

关键词：北京鸭博落回散耐受性生长性能饲料转化率

黄芩防治畜禽呼吸道疾病的作用机制及产品应用综述

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湖南饲料 2022年第1期 40-42页

作者：陈燕乐唐昭山杨岸奇杨广民湖南美可达生物资源股份有限公司湖南长沙410331

在目前畜禽规模化、集约化养殖中,由于养殖密度加大,再加上很多地方应用全封闭的养殖场所,造成养殖场地空气流通缓慢,空气质量较差,呼吸道疾病成为畜禽的主要疾病之一。如果在养殖过程中防治失当,容易造成重大经济损失。呼吸道疾病的病... 详细信息

在目前畜禽规模化、集约化养殖中,由于养殖密度加大,再加上很多地方应用全封闭的养殖场所,造成养殖场地空气流通缓慢,空气质量较差,呼吸道疾病成为畜禽的主要疾病之一。如果在养殖过程中防治失当,容易造成重大经济损失。呼吸道疾病的病原性因素主要是细菌和病毒,而中药黄芩在抑菌、抗病毒、抗炎和抗氧化等方面均有较好防冶效果,在相关的药理药效方面积累了很多研究成果。对黄芩在呼吸道疾病相关领域的药理药效、临床应用及不良反应进行综述,为养殖行业更好地应用黄芩提供参考。

关键词：呼吸道疾病重大经济损失药理药效养殖场所养殖行业养殖密度病原性黄芩

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