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菊粉外切酶的异源表达、纯化及酶学性质

食品与发酵工业 2019年第4期45卷 25-30页

作者：马俊安启坤唐文竹大连工业大学生物工程学院辽宁大连116034

将菊粉降解菌Paenibacillus sp. Lfos16的菊粉外切酶基因克隆至表达载体p ET-28a (+),转入Escherichia. coli BL21(DE3)中实现了异源表达。利用镍柱亲和层析纯化重组菊粉外切酶,并进行SDS-PAGE检测。重组菊粉外切酶的表观分子质量为87 k... 详细信息

将菊粉降解菌Paenibacillus sp. Lfos16的菊粉外切酶基因克隆至表达载体p ET-28a (+),转入Escherichia. coli BL21(DE3)中实现了异源表达。利用镍柱亲和层析纯化重组菊粉外切酶,并进行SDS-PAGE检测。重组菊粉外切酶的表观分子质量为87 k Da,经纯化后,重组菊粉外切酶的比酶活为348.30 U/mg。重组菊粉外切酶作用菊粉和蔗糖的酶活分别为259.37 U/m L和592.16 U/m L,I/S值为0.438,且重组酶水解菊粉的主要产物为果糖。重组菊粉外切酶最适作用温度为40℃,且当温度低于30℃时酶活较稳定;最适作用pH为6。Ag^+、Cu^(2+)、Mn^(2+)、Zn^(2+)、Hg^(2+)、Fe^(3+)具有显著抑制作用。重组菊粉外切酶对菊粉的K_m为19. 28 mg/m L,Vmax为0.18 mg/(min·m L)。

关键词：类芽孢杆菌菊粉外切酶克隆酶学性质

应用蛋白组学技术研究壳寡糖对水稻幼苗抗寒性能的诱导机理

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质谱学报 2023年第6期44卷 832-844,I0004页

作者：于宇璇李倞霆张晴晴孙珍唐文竹大连工业大学生物学院辽宁大连116034

水稻幼苗对低温有极高的敏感性,将壳寡糖作为一种新型生物农药应用于水稻生长并帮助其抵御低温胁迫势在必行。本实验选取明恢63水稻,通过模拟水稻幼苗从正常生长到遭遇低温再到复性的全过程,测定水稻幼苗对应时期的生理生化指标,采用灵... 详细信息

水稻幼苗对低温有极高的敏感性,将壳寡糖作为一种新型生物农药应用于水稻生长并帮助其抵御低温胁迫势在必行。本实验选取明恢63水稻,通过模拟水稻幼苗从正常生长到遭遇低温再到复性的全过程,测定水稻幼苗对应时期的生理生化指标,采用灵敏度高、选择性强且效率高的非标记定量技术对水稻幼苗的差异蛋白进行鉴定分析并研究其代谢通路,探究壳寡糖对水稻幼苗抗击低温胁迫的诱导机理,并针对光合作用途径和淀粉蔗糖代谢进行讨论。结果表明,壳寡糖可以调控水稻中的蛋白丰度,抵抗低温胁迫对光合作用的影响,使表达的蛋白丰度提高,同时促进蔗糖分解、淀粉积累转化为葡萄糖供体,用于水稻生长代谢。本研究可为抗寒水稻的选育提供实践指导,为水稻抗寒、新型生物农药的研发利用提供科学依据。

关键词：水稻幼苗低温胁迫生理生化蛋白组学非标记定量

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蔗糖异构酶催化生产异麦芽酮糖研究进展

微生物学通报 2012年第9期39卷 1314-1322页

作者：唐文竹陈放李宪臻大连工业大学生物工程学院辽宁大连116034

作为蔗糖的一种异构体,异麦芽酮糖具有许多独特的生理功能,例如非致龋齿性、益生元特性、适合糖尿病人使用以及对大多数细菌和酵母的抗性等,因而受到广泛关注。异麦芽酮糖主要是通过蔗糖异构酶催化蔗糖转化形成,反应中同时生成的海藻酮... 详细信息

作为蔗糖的一种异构体,异麦芽酮糖具有许多独特的生理功能,例如非致龋齿性、益生元特性、适合糖尿病人使用以及对大多数细菌和酵母的抗性等,因而受到广泛关注。异麦芽酮糖主要是通过蔗糖异构酶催化蔗糖转化形成,反应中同时生成的海藻酮糖以及少量的葡萄糖和果糖,给工业生产带来困扰。简要论述异麦芽酮糖的特性、生理功能及其生产中存在的问题,重点论述蔗糖异构酶催化蔗糖转化的机理,为异麦芽酮糖在食品工业中的开发利用提供参考。

关键词：异麦芽酮糖蔗糖异构酶催化机理

秸秆生物炭对土壤功能微生物生长及吸附的影响

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沈阳农业大学学报 2017年第4期48卷 411-417页

作者：安启坤唐文竹大连工业大学生物工程学院辽宁大连116034

生物炭具有多孔结构和较大的比表面积能够为许多土壤微生物的生长、繁殖提供有利的条件。生物炭通过促进土壤功能微生物的生长及活性,从而间接提高作物产量,在农业领域有着广阔的应用前景。为了研究秸秆生物炭对12种不同土壤功能微生物... 详细信息

生物炭具有多孔结构和较大的比表面积能够为许多土壤微生物的生长、繁殖提供有利的条件。生物炭通过促进土壤功能微生物的生长及活性,从而间接提高作物产量,在农业领域有着广阔的应用前景。为了研究秸秆生物炭对12种不同土壤功能微生物的影响,在培养基中添加0.6%的生物炭后,利用MTT法测定微生物生长曲线的变化,同时在一定浓度的菌悬液中加入0.6%的生物炭,室温振荡1h后,测定生物炭对微生物的吸附率。结果表明,秸秆生物炭对不同的细菌的生长影响不同,对于部分细菌存在明显生长促进作用,其中对胶质芽孢杆菌1.217的促进作用最明显,培养12h后其最大生长量可提高3.6倍;对于巨大芽孢杆菌1.217、短小芽孢杆菌04306以及褐球固氮菌01077,加入生物炭培养14~20h后最大生长量可提高1.5倍左右;巨大芽胞杆菌01667加入生物炭培养12h后,其最大生长量也可提高1.3倍;而对于另外一部分细菌,生物炭对其生长基本没有影响或有较小的抑制作用。同时,生物炭水洗后,对不同细菌的影响与水洗前基本一致,对于巨大芽孢杆菌1.217、短小芽孢杆菌04306、绿色北里孢菌02567、苏云金芽孢杆菌04311、蜡状芽孢杆菌04289、巨大芽孢杆菌01667和短小芽孢杆菌01736,生物炭水洗前后对其生长影响差别不大。另外,秸秆生物炭对部分微生物具有一定的吸附作用,其中吸附效果最为明显的是蜡状芽胞杆菌4289和胶质芽胞杆菌1.153,吸附率分别为54.40%和48.10%。这些研究结果证明生物炭能够改变土壤功能微生物的生长状况,但是对于不同的微生物,生物炭的作用效果不同。

关键词：生物炭土壤微生物生长吸附

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纤维素真酶在纤维素降解中的潜在价值研究

安徽农业科学 2011年第4期39卷 1895-1896页

作者：张慧陈放唐文竹李宪臻大连工业大学生物工程学院辽宁大连116034

探讨纤维素降解的因素及最新的降解方法,为纤维素的有效利用提供参考依据。

关键词：纤维素纤维素酶纤维素降解晶体结构

利用代谢组学方法分析不同糖化条件对酿酒酵母代谢途径以及啤酒中风味物质形成的分析

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现代食品科技 2023年第11期39卷 235-241页

作者：郭永昊李倞霆孙珍唐文竹大连工业大学生物工程学院辽宁大连116034

在啤酒发酵过程中,麦汁的好坏会直接影响啤酒的品质。为了探究不同的糖化工艺对发酵后酒品质的影响,运用代谢组学的方法,分析了不同糖化条件对麦汁成分造成的差异,从代谢水平上解释了啤酒发酵过程中不同糖化工艺产生的麦汁对酿酒酵母代... 详细信息

在啤酒发酵过程中,麦汁的好坏会直接影响啤酒的品质。为了探究不同的糖化工艺对发酵后酒品质的影响,运用代谢组学的方法,分析了不同糖化条件对麦汁成分造成的差异,从代谢水平上解释了啤酒发酵过程中不同糖化工艺产生的麦汁对酿酒酵母代谢途径的影响。通过对质谱检测后所得的数据经过进行主成分分析和偏最小二乘判别分析,确定了不同糖化工艺产生的麦汁会影响酿酒酵母的氨基酸代谢、有机酸代谢以及脂质和脂肪酸代谢等代谢途径;主要涉及精氨酸的生物合成,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸生物合成,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,D-氨基酸的代谢,赖氨酸降解,以及脂肪酸生物合成等途径,这些途径对啤酒风味有较大影响,研究结果为啤酒中风味物质的调控提供了一定的理论指导。

关键词：代谢组学糖化啤酒风味通路分析多元分析

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应用多组学技术研究褐藻胶寡糖提高水稻幼苗抗寒性能的机理

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北京大学学报(自然科学版) 2024年

作者：何雅清钱湘玉于宇璇孙珍唐文竹大连工业大学生物工程学院江苏省南京市江北新区生物医药公共服务平台

选取日本晴水稻作为研究对象，模拟水稻幼苗从正常生长到遭遇低温再到复性的全过程，结合水稻幼苗生理生化指标的测定，发现施加褐藻胶寡糖不仅提高水稻幼苗抵御低温胁迫的能力，还提高其SOD， POD和CAT活性以及根系活力; 同时， ... 详细信息

选取日本晴水稻作为研究对象，模拟水稻幼苗从正常生长到遭遇低温再到复性的全过程，结合水稻幼苗生理生化指标的测定，发现施加褐藻胶寡糖不仅提高水稻幼苗抵御低温胁迫的能力，还提高其SOD， POD和CAT活性以及根系活力; 同时，在水稻幼苗受到低温胁迫时，褐藻胶寡糖能促进其产生更多的可溶性糖，并有效地抑制丙二醛含量的增加。采用非标记定量技术，对差异蛋白和差异代谢物进行鉴定分析，并研究其代谢通路。其中，差异表达蛋白进行GO注释后，实验组富集到的条目更多; 通过KEGG富集得到前10条关键性通路。通过UPLC-Q-TOF-MS对水稻幼苗进行代谢组学分析，发现小分子差异代谢物主要为胺类，其次为羧酸和生物碱等。研究结果阐明褐藻胶寡糖提高水稻幼苗抗寒性能的机理，为理解水稻幼苗抗寒性能防御机制及褐藻胶寡糖的研发利用提供科学依据。

关键词：水稻幼苗褐藻胶寡糖抗寒性能蛋白质组学代谢组学

添加生物炭土壤中总DNA最佳提取方法的筛选

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沈阳农业大学学报 2017年第4期48卷 467-471页

作者：孟庆阳唐文竹大连工业大学生物工程学院辽宁大连116034

获得高纯度的总DNA是进行土壤微生物宏基因组学研究的基础,也是分析生物炭作为土壤改良剂对土壤菌群结构影响的关键。由于生物炭对DNA中磷酸骨架的吸附作用,从添加生物炭的土壤中提取总DNA较为困难。为了寻找合适的提取混有生物炭的土壤... 详细信息

获得高纯度的总DNA是进行土壤微生物宏基因组学研究的基础,也是分析生物炭作为土壤改良剂对土壤菌群结构影响的关键。由于生物炭对DNA中磷酸骨架的吸附作用,从添加生物炭的土壤中提取总DNA较为困难。为了寻找合适的提取混有生物炭的土壤总DNA的方法,本研究分别采用*** DNA Kit法(方法 1)、改良的*** DNA Kit法(方法 2)、SDS-玻璃珠法(方法 3)、Mo-Bio Power Soil DNA Isolation Kit法(方法 4)和改良的Mo-Bio Power Soil DNA Isolation Kit法(方法 5)对两种类型的混有生物炭的土壤样品进行总DNA的提取,并对提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳分析以及浓度和纯度的测定。结果表明:5种方法均可从土壤中提取到DNA,并且DNA大小一致,条带也比较单一。同时,采用不同的方法从两种混合土样中提取的DNA浓度范围为3.22~37.80μg·g-1干土,且土样1的DNA提取量明显大于土样2的DNA提取量。但是不同方法提取到DNA的产量和质量存在明显差异,其中方法 3提取的DNA得率最高,两种土样分别为37.80μg·g-1干土和10.78μg·g-1干土,但是该方法提取的DNA纯度最低,两种土样DNA的A260/A230值仅为0.664和0.684,A260/A280值小于1.6,说明提取产物中存在严重的蛋白质和腐殖酸的污染,不能直接用于PCR扩增。而方法 2虽然提取的DNA得率相对较低,但纯度最高,两种土样的A260/A280值分别为1.854和1.844,A260/A230值分别为1.857和1.663,说明蛋白质和腐殖酸的去除较彻底,并且该方法是在商品化的试剂盒基础上进行的改进,操作简单、省时,重复性好。这些研究结果证明方法 2即改良的*** DNA Kit提取方法,提取到的DNA纯度最高,是较为理想的混有生物炭土壤的DNA提取方法,可以满足构建宏基因组文库的要求。

关键词：生物炭土壤微生物 DNA提取宏基因组

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壳寡糖对黑豆芽营养成分及抗氧化活性的影响

食品与发酵工业 2023年第17期49卷 187-193页

作者：蒋丹丹王延康唐文竹雷鑫亭李宪臻大连工业大学生物工程学院辽宁大连116034 大连医诺生物股份有限公司辽宁大连116620

发芽可以改善黑豆的营养成分并降低抗营养因子含量。为研究不同分子质量和不同浓度的壳寡糖在黑豆发芽过程中对黑豆芽品质的影响,将分子质量为1500和3000 Da的两种壳寡糖分别配制成质量浓度为0.001、0.01、0.1、1μg/mL的溶液后,浸泡处... 详细信息

发芽可以改善黑豆的营养成分并降低抗营养因子含量。为研究不同分子质量和不同浓度的壳寡糖在黑豆发芽过程中对黑豆芽品质的影响,将分子质量为1500和3000 Da的两种壳寡糖分别配制成质量浓度为0.001、0.01、0.1、1μg/mL的溶液后,浸泡处理黑豆,然后测定萌发后黑豆芽的生产性能,并利用分光光度法和液相色谱法测定黑豆芽中主要营养成分含量以及抗氧化活性。结果表明,壳寡糖可以刺激黑豆萌发并提高黑豆芽的产量,促进可溶性蛋白的生成,降低黑豆芽中抗营养因子植酸的含量。同时,壳寡糖还可以提高黑豆芽中抗氧化物质(维生素C、总多酚、总黄酮和各组分多酚、黄酮)的含量,从而提升黑豆芽对DPPH自由基、·OH和H_(2)O_(2)的清除率。其中分子质量为1500 Da、质量浓度为0.01μg/mL的壳寡糖处理黑豆效果最好,获得的黑豆芽品质最高。研究旨在为壳寡糖作为添加剂应用于黑豆芽生产提供一定的理论支持。

关键词：黑豆芽壳寡糖营养成分抗氧化活性添加剂

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