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华东地区家鸭中N1亚型禽流感病毒NA基因的遗传进化分析

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病毒学报 2009年第2期25卷 131-136页

作者：仇保丰刘武杰唐应华彭大新刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

为了解华东地区家鸭内禽流感病毒的遗传进化情况,对2002-2006年分离自华东地区家鸭的3种主要N1亚型的禽流感病毒：2株H1N1、10株H3N1和14株H5N1,共26株病毒的NA基因进行了遗传进化分析。结果表明,华东地区家鸭中的N1亚型的禽流感病毒正... 详细信息

为了解华东地区家鸭内禽流感病毒的遗传进化情况,对2002-2006年分离自华东地区家鸭的3种主要N1亚型的禽流感病毒：2株H1N1、10株H3N1和14株H5N1,共26株病毒的NA基因进行了遗传进化分析。结果表明,华东地区家鸭中的N1亚型的禽流感病毒正处于不断进化状态中。14株H5N1禽流感病毒均在NA的茎部缺失20个氨基酸（49-68位）,而其他N1亚型的禽流感病毒的NA都未见发生此缺失。H3N1病毒可能与H1N1病毒发生了NA基因的重排,但是目前还没有直接证据表明华东地区家鸭中H5N1禽流感参与了基因重排。

关键词：家鸭禽流感病毒 NA基因遗传进化分析

水禽流感病毒分离株A/Duck/Yangzhou/233/02(H6N2)膜蛋白基因遗传进化分析

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微生物学报 2005年第4期45卷 491-495页

作者：张评浒刘晓文钱忠明唐应华刘秀梵薛峰郝贵杰扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

采用常规的血清学收验和特异性RT-PCR方法对华东地区家养水禽中流感病毒的带毒状况进行两年多的监测,分离鉴定出多株H6亚型禽流感病毒。对其中的一株A/Duck/Yangzhou/233/02(H6N2)(简称DkYZ23302)(H6N2)的表面膜蛋白基因进行了序列测定... 详细信息

采用常规的血清学收验和特异性RT-PCR方法对华东地区家养水禽中流感病毒的带毒状况进行两年多的监测,分离鉴定出多株H6亚型禽流感病毒。对其中的一株A/Duck/Yangzhou/233/02(H6N2)(简称DkYZ23302)(H6N2)的表面膜蛋白基因进行了序列测定,并与GenBank中收录的其它序列进行了比较,遗传进化结果表明DkYZ23302的血凝素基因(HA)与近年香港分离的鸭源毒株DkHK346199(H6N1)、中国台湾鸡源毒株CkTaiwanna398的亲缘关系最近;而神经氨酸酶基因(NA)遗传进化分析结果表明DkYZ23302(H6N2)的NA基因起源于禽源H9N2亚型流感病毒,这可能是不同亚型禽流感病毒在水禽体内发生基因重配的结果。DkYZ23302(H6N2)的HA推导的氨基酸剪切位点序列为P-Q-I-E-T-R-D,为典型低致病性禽流感病毒的特征序列,与对SPF鸡的致病力试验相吻合。

关键词：病毒分离株进化分析基因遗传低致病性禽流感病毒 RT-PCR方法 GenBank 神经氨酸酶基因 H9N2亚型遗传进化膜蛋白基因血凝素基因致病力试验华东地区分离鉴定序列测定亲缘关系中国台湾 NA基因分析结果特征序列

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混合感染的多种亚型禽流感病毒的纯化与鉴定

微生物学报 2010年第1期50卷 107-112页

作者：仇保丰刘武杰胡顺林唐应华彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

【目的】研究混合感染的多种亚型禽流感病毒的纯化和鉴定方法。【方法】用鸡胚终点稀释法和鸡胚终点稀释法结合特异性血清中和法分别对2-3种已知亚型禽流感病毒的混合感染样品进行纯化,并对纯化结果用RT-PCR和血凝抑制试验进行鉴定。用... 详细信息

【目的】研究混合感染的多种亚型禽流感病毒的纯化和鉴定方法。【方法】用鸡胚终点稀释法和鸡胚终点稀释法结合特异性血清中和法分别对2-3种已知亚型禽流感病毒的混合感染样品进行纯化,并对纯化结果用RT-PCR和血凝抑制试验进行鉴定。用建立的方法对214份禽流感病毒阳性样品进行了纯化和鉴定。【结果】用鸡胚终点稀释法对样品稀释、传代6-7次可使病毒达到纯化,但用鸡胚终点稀释法结合特异性血清中和法对样品稀释、传代4-5次即可达到病毒纯化。用RT-PCR和血凝抑制试验两种方法同时鉴定病毒的纯化效果,可明显提高准确性。用本方法从214份样品中纯化出涵盖13种亚型的禽流感病毒233株。【结论】鸡胚终点稀释法及其结合特异性血清中和法均能对禽流感病毒进行纯化,但是鸡胚终点稀释法结合特异性血清中和法更具有针对性,也更有效。另外,对纯化结果的鉴定需采取多种手段。

关键词：禽流感病毒混合感染纯化鉴定

大剂量泮托拉唑联合奥曲肽在消化性溃疡并消化道出血中的应用

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大剂量泮托拉唑联合奥曲肽在消化性溃疡并消化道出血中的应用

J亚群禽白血病病毒SUJ及兔IgGFc基因在腺病毒表达系统中的融合表达

2016年《中国医院药学杂志》学术年会

作者：唐应华广西宜州市工人医院消化内科

目的探讨采用大剂量泮托拉唑联合奥曲肽治疗消化性溃疡并消化道出血的临床效果。方法将自2012年1月至2015年1月期间收治的150名发生消化性溃疡并消化道出血的患者随机分为实验组和对照组,每组各75人。实验组实施大剂量泮托拉唑联合奥曲... 详细信息

目的探讨采用大剂量泮托拉唑联合奥曲肽治疗消化性溃疡并消化道出血的临床效果。方法将自2012年1月至2015年1月期间收治的150名发生消化性溃疡并消化道出血的患者随机分为实验组和对照组,每组各75人。实验组实施大剂量泮托拉唑联合奥曲肽治疗,对照组采取常规剂量泮托拉唑联合奥曲肽治疗。观察比较两组患者的整体治疗效果,并分别记录并比较两组所用止血时间、输血量、不良反应发生率及住院时间。结果采用大剂量泮托拉唑联合奥曲肽治疗的患者临床总有效率为92.00%,明显高于对照组(84.00%)。实验组的平均止血时间为(20.02±4.96)h,明显低于对照组(35.23±8.21)h;实验组的平均输血量为(1.37±0.32)U,明显少于对照组[(2.21±0.33)U;实验组的平均住院时间为(5.5±1.0)d,明显短于对照组(8.1±2.2)d。两组治疗后再出血情况相当,差异无明显统计学意义(P>0.05)。2组患者不良反应发生率相当,差异无统计学意义,且不良反应不明显,对症治疗后很快消失。结论对消化性溃疡并消化道出血患者采用大剂量泮托拉唑联合奥曲肽治疗,能够有效快速止血,缩短患者住院时间,改善患者临床状况,具有较高的综合疗效,值得在临床推广应用。

关键词：大剂量泮托拉唑奥曲肽消化性溃疡消化道出血

来源： cnki会议评论

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江苏农业学报 2016年第4期32卷 848-853页

作者：梅梅钱科唐应华秦爱建侯继波江苏省农业科学院江苏南京210014 扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室江苏扬州225009 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 江苏省出入境检验检疫局江苏南京210001

为获得J亚群禽白血病病毒(ALV-J)囊膜蛋白gp85和兔IgGFc的融合蛋白,通过腺病毒表达系统融合表达ALV-J SUJ和兔IgGFc(r IgGFc)基因。将pc DNA3.1-SUJ-r IgGFc用XhoⅠ、KpnⅠ进行双酶切,获得SUJ-r IgGFc基因,将其克隆至p Shuttle-CMV质粒... 详细信息

为获得J亚群禽白血病病毒(ALV-J)囊膜蛋白gp85和兔IgGFc的融合蛋白,通过腺病毒表达系统融合表达ALV-J SUJ和兔IgGFc(r IgGFc)基因。将pc DNA3.1-SUJ-r IgGFc用XhoⅠ、KpnⅠ进行双酶切,获得SUJ-r IgGFc基因,将其克隆至p Shuttle-CMV质粒,构建穿梭载体p Shuttle-CMV-SUJ-r IgGFc,重组质粒转化含p Adeasy-1的BJ5183-AD-1感受态细胞,获得重组腺病毒质粒p Ad-SUJ-r IgGFc,最后转染人293T细胞。表达的融合蛋白可被ALV-J单克隆抗体JE9以及羊抗兔IgG识别,重组蛋白的分子量大小约9.5×104,且与JE9及羊抗兔IgG都有很好的反应性;免疫共沉淀试验结果显示融合蛋白可与DF1细胞膜蛋白混合物反应并获得差异蛋白。该融合蛋白可与ALV-J宿主细胞蛋白发生特异性反应。

关键词： J亚群禽白血病病毒 gp85基因兔IgGFc 腺病毒融合表达

无血清微载体培养Vero细胞增殖传染性法氏囊病毒

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江苏农业科学 2016年第2期44卷 244-246页

作者：吴培培冯磊唐应华褚轩王伟峰侯继波江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏南京210014

为了获得用生物反应器无血清培养基微载体悬浮培养Vero细胞增殖传染性法氏囊病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)的工艺参数,通过驯化Vero细胞适应无血清微载体悬浮培养后,再优化传染性法氏囊病毒在此细胞上的增殖工艺参数,包... 详细信息

为了获得用生物反应器无血清培养基微载体悬浮培养Vero细胞增殖传染性法氏囊病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)的工艺参数,通过驯化Vero细胞适应无血清微载体悬浮培养后,再优化传染性法氏囊病毒在此细胞上的增殖工艺参数,包括初始细胞密度、微载体浓度、IBDV的感染复数(MOI)、接种时间和病毒收获时间。结果表明:获得适应无血清培养的细胞株——V0株,建立细胞库。获得3 L反应器中培养V0细胞增殖IBDV工艺参数,其初始接种密度为3×105cell/m L、微载体浓度为3 g/L、细胞培养1 d后按MOI为0.2接种IBDV,接毒后120 h收获病毒,可达最高病毒效价109.307TCID50/m L。本研究获得的Vero细胞、IBDV以及各项工艺参数为后续大规模悬浮培养制备法氏囊疫苗提供了生物材料和技术支持。

关键词：无血清培养 Vero细胞传染性法氏囊病毒(IBDV) 微载体生物反应器增殖工艺

鸡血清4型禽腺病毒与HH9亚型禽流感病毒亚型禽流感病毒、新城疫病毒混合感染的鉴定

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中国家禽 2017年第22期39卷 59-62页

作者：梅梅陆吉虎张雪花唐应华侯继波江苏省农业科学院动物免疫工程研究所江苏南京210014 国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

试验对临床疑似血清4型禽腺病毒与H9亚型禽流感、新城疫混合感染鸡的病例进行了病毒分离与鉴定。通过接种鸡胚、血凝和血凝抑制试验、琼脂扩散试验、PCR鉴定,确定该病例为三种病毒混合感染。动物回归试验证明,1 000 ELD_(50)病毒量对2日... 详细信息

试验对临床疑似血清4型禽腺病毒与H9亚型禽流感、新城疫混合感染鸡的病例进行了病毒分离与鉴定。通过接种鸡胚、血凝和血凝抑制试验、琼脂扩散试验、PCR鉴定,确定该病例为三种病毒混合感染。动物回归试验证明,1 000 ELD_(50)病毒量对2日龄SPF鸡致死率达到100%,剖检病变呈现典型心包积液-肝炎综合征,而H9亚型禽流感和新城疫病变特征不明显,说明混合感染中血清4型禽腺病毒病变非常典型,H9亚型禽流感和新城疫则呈现非典型病变。

关键词：血清4型禽腺病毒 H9亚型禽流感病毒新城疫病毒混合感染鉴定

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鸡传染性法氏囊病的诊断和防治

兽医导刊 2009年第7期 17-19页

作者：唐应华何家惠江苏省农科院国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

传染性法氏囊病是由传染性法氏囊病毒（IBDV）引起幼龄鸡的急性、高度接触性、并引起免疫抑制的传染病。我国将其列为二类疫病。该病最早于1957年发现予美国的特拉华州甘布罗地区肉鸡群中，又称甘布罗病。我国学者周蛟于1982年在北京从... 详细信息

传染性法氏囊病是由传染性法氏囊病毒（IBDV）引起幼龄鸡的急性、高度接触性、并引起免疫抑制的传染病。我国将其列为二类疫病。该病最早于1957年发现予美国的特拉华州甘布罗地区肉鸡群中，又称甘布罗病。我国学者周蛟于1982年在北京从进口鸡群中分离出该病毒。目前，该病已遍及世界各地，给养鸡业造成了很大的经济损失。

关键词：鸡传染性法氏囊病传染性法氏囊病毒防治诊断免疫抑制二类疫病经济损失肉鸡群

肾型传染性支气管炎病毒的鉴定和结构蛋白的表达

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中国兽医科学 2011年第10期41卷 1034-1040页

作者：唐应华吴培培宫玉珍王永伟于漾张道华何家惠侯继波江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心中国农业科学院南京兽用生物制品研究中心江苏南京210014

对分离自江苏省某发病蛋鸡群中1株病毒(Ck/Jiangsu/DS10/2008,DS10)进行了生物学特性鉴定。同时利用RT-PCR扩增该病毒的S基因、M基因和E基因并进行测序,与GenBank中其他参考株构建进化树,进行比对分析,研究其遗传进化关系。另将S基因、... 详细信息

对分离自江苏省某发病蛋鸡群中1株病毒(Ck/Jiangsu/DS10/2008,DS10)进行了生物学特性鉴定。同时利用RT-PCR扩增该病毒的S基因、M基因和E基因并进行测序,与GenBank中其他参考株构建进化树,进行比对分析,研究其遗传进化关系。另将S基因、M基因和E基因克隆至杆状病毒表达系统pFastBac 1载体并转染Sf9细胞进行表达,用间接免疫荧光鉴定其表达,用琼扩试验验证表达产物的反应性。经生物学特性鉴定,DS10病毒为嗜肾型传染性支气管炎病毒(IBV)。遗传进化分析表明,各基因之间的遗传进化关系无明显相关性。间接免疫荧光检测表明,S蛋白、M蛋白和E蛋白在Sf9细胞中得到表达。琼扩试验证实,S基因和M基因的表达产物具有良好的反应性,而E蛋白未发现与阳性血清反应所产生的特异沉淀线,表明所表达的S蛋白和M蛋白具有良好的生物学活性,E蛋白可能因其自身分子质量小,在病毒中的含量较少相关。研究结果提示,现有传染性支气管炎疫苗对流行株保护效果不佳,表达的S蛋白。

关键词：传染性支气管炎病毒 S基因 M基因 E基因杆状病毒表达系统