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细粒棘球蚴致敏反应机制和分子靶标的生物信息学分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2022年第3期40卷 319-323页

作者：西力扎提·库来西王春生王佳玲李孟房志远王思嘉周静茹先依旦·阿不拉江乌尔格力叶建荣新疆医科大学第一附属医院麻醉科乌鲁木齐830054 新疆医科大学研究生学院乌鲁木齐830054

目的基于生物信息学分析细粒棘球蚴致敏反应机制和分子靶标。随机分为3组,每组3只,分别为感染未致敏组、感染致敏组、健康对照组。感染未致敏组小鼠经腹腔注射原头节悬液(0.2 ml/鼠),90 d后腹腔注射生理盐水(0.2 ml/鼠);感染致敏组小鼠... 详细信息

目的基于生物信息学分析细粒棘球蚴致敏反应机制和分子靶标。随机分为3组,每组3只,分别为感染未致敏组、感染致敏组、健康对照组。感染未致敏组小鼠经腹腔注射原头节悬液(0.2 ml/鼠),90 d后腹腔注射生理盐水(0.2 ml/鼠);感染致敏组小鼠经腹腔注射原头节悬液(0.2 ml/鼠),90 d后腹腔注射粗制囊液致敏(0.2 ml/鼠),健康对照组小鼠注射等量生理盐水。注射后1 h,取各组小鼠的脾组织提取RNA进行转录组测序,通过生物信息学分析找到差异表达基因,使用edgeR(以RNA-Seq by expectationMaximization RSEM进行定量)软件进行表达差异显著性分析,用String数据库和Cytoscape软件对差异基因作网络互作分析,并将得分设置为>500;使用cytoHubba获取节点的度(degree)筛选degree大于3的节点作展示;使用DAVID在线富集分析工具进行分析,分析结果使用R语言ggplot2进行可视化。结果感染致敏组与健康对照组有743个基因差异表达,其中568个上调表达基因和175个下调表达基因。感染未致敏组与健康对照组中有554个基因差异表达,其中393个上调表达基因和161个下调表达基因。感染致敏组与健康对照组有458个特有表达基因,感染未致敏组与健康对照组有269个特有表达基因,三组有285个共有表达基因。感染致敏组与健康对照组特有的458个基因GO富集结果显示,147个参与生物学进程,10个参与细胞成分,43个参与分子功能。共有的基因GO富集结果显示,56个参与生物学进程,23个参与细胞成分,25个参与分子功能。感染未致敏组与健康对照组特有的基因GO富集结果显示,51个参与生物学进程,13个参与细胞成分,18个参与分子功能。感染致敏组与健康对照组特有基因的功能主要集中于炎症反应、免疫应答等,共有基因的功能主要集中于神经肽信号通路、白细胞介素-1(IL-1)细胞反应等;感染未致敏组与健康对照组特有基因的功能主要集中于核小体组装、细胞外调节蛋白激酶1(ERK1)和ERK2级联的正调节等。感染致敏组与健康对照组特有基因被富集到细胞因子-细胞因子受体相互作用、JAK-STAT信号通路等32个通路;共有基因富集到磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B信号通路、补体与凝血级联反应等9个通路。感染未致敏组与健康对照组特有基因富集到酪氨酸代谢,亚油酸代谢等12个通路。感染致敏组和健康对照组特有基因PPI分析结果中,位于核心位置的包括IL-10、IL-6、前列腺素内过氧化物合酶2、CC趋化因子亚族-1、CXC趋化因子亚族-1/2/3等;感染未致敏组和健康对照组位于核心位置的包括17号染色体、19号染色体的基因、细胞色素P3a25等。感染致敏组和对照组,感染未致敏和健康对照组共有基因则包括IL-13、20号染色体、基质金属蛋白酶抑制剂-1、精氨酸酶1、触珠蛋白、纤溶酶原、17号染色体的基因等。结论炎症反应在棘球蚴致敏过程中发挥重要的作用;IL-6高表达促进炎症发生,IL-10作为抗炎因子对抗机体的炎症反应的发生;IL-13可能是棘球蚴感染后机体产生免疫耐受的关键基因;ERK信号通路可能在棘球蚴生长过程中起免疫调节作用,细胞因子-细胞因子受体相互作用通路和磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B信号通路与棘球蚴致敏显著相关。

关键词：棘球蚴生物信息分析白细胞介素-6/白细胞介素-10 分子靶标

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捻转血矛线虫与胃癌细胞共培养系统建立

中国兽医学报 2020年第8期40卷 1479-1484,1584页

作者：杨怡张红丽周静茹陈学秋杜爱芳浙江大学动物科学学院动物预防医学研究所浙江省动物预防医学重点实验室浙江杭州310058 浙江省动物疫病预防控制中心浙江杭州311199

为研究宿主感染捻转血矛线虫的早期免疫应答,本试验使用细胞小室建立了捻转血矛线虫-胃癌细胞气液界面共培养系统。捻转血矛线虫在共培养系统中以弦运动和圆运动的方式生活。细胞远红外荧光染色结果显示,线虫以细胞蛋白为食维持基本营养... 详细信息

为研究宿主感染捻转血矛线虫的早期免疫应答,本试验使用细胞小室建立了捻转血矛线虫-胃癌细胞气液界面共培养系统。捻转血矛线虫在共培养系统中以弦运动和圆运动的方式生活。细胞远红外荧光染色结果显示,线虫以细胞蛋白为食维持基本营养,进食的方式可能为叮咬胃癌细胞后吸食。脱鞘幼虫在体外培养系统中生长发育速度缓慢,共培养0,4,7 d时的虫体长度分别为(981.5±24.3),(1113.9±24.4),(1157.0±47.6)μm,其中7 d时与宿主感染4 d体内的虫体大小相似。捻转血矛线虫和细胞在共培养系统中互相胁迫,随着共培养时间的增加,线虫呈现活力下降和蜷缩状的生理状态,同时贴壁细胞逐渐从胶原板脱落并进入坏死状态。相较于共培养0 d时,共培养4 d时胃癌细胞(MGC)坏死的比例由12.91%增加到53.25%,胃腺癌细胞(BGC)坏死的比例由2.63%增加到24.81%。线虫还能诱导细胞表达大量的IL-33,MGC与线虫共培养4,7 d时IL-33的表达量分别上升至共培养0 d时的2.520,4.180倍;BGC与线虫共培养4,7 d时IL-33的表达量分别上升至共培养0 d时的1.732,5.150倍,这与宿主早期感染时IL-33的高表达一致。本试验为阐明捻转血矛线虫早期感染时宿主的免疫应答分子机制提供了新方法。

关键词：捻转血矛线虫胃癌细胞 IL-33 早期免疫

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冠心病患者不同载脂蛋白水平和血脂关系研究

华南国防医学杂志 2015年第4期29卷 312-315页

作者：周静茹孟翠丽邢台医学高等专科学校生物化学教研室河北邢台054000

冠心病是临床上常见的心血管疾病,其发病机理与患者体内脂蛋白水平失衡有关[1]。载脂蛋白(apolipoprotein,apo)是指脂蛋白中的蛋白质组份,也是维持脂蛋白结构和功能的关键性组份。不同种类的载脂蛋白具有不同的生理功能,已有研究证实载... 详细信息

冠心病是临床上常见的心血管疾病,其发病机理与患者体内脂蛋白水平失衡有关[1]。载脂蛋白(apolipoprotein,apo)是指脂蛋白中的蛋白质组份,也是维持脂蛋白结构和功能的关键性组份。不同种类的载脂蛋白具有不同的生理功能,已有研究证实载脂蛋白水平与心脑血管疾病及多种内科疾病存在一定的相关性[2-3]。因此有学者将载脂蛋白水平作为冠心病患者临床症状的考察指标[4]。

关键词：冠心病载脂蛋白血脂相关性

捻转血矛线虫Hc-FAR-4蛋白的表达特性及其与配体结合能力分析

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中国农业科学 2019年第17期52卷 3059-3068页

作者：韦海典陈学秋黄艳时恒枝周静茹吴飞杜爱芳杨怡浙江大学动物科学学院/浙江省动物预防医学重点实验室

【目的】捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)寄生在牛羊等反刍动物的皱胃中,引起的捻转血矛线虫病在我国呈全国性流行。文章通过研究脂肪酸与视黄醇结合相关蛋白Hc-FAR-4的表达特性及配体结合能力,以了解其在捻转血矛线虫生长、发育、... 详细信息

【目的】捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)寄生在牛羊等反刍动物的皱胃中,引起的捻转血矛线虫病在我国呈全国性流行。文章通过研究脂肪酸与视黄醇结合相关蛋白Hc-FAR-4的表达特性及配体结合能力,以了解其在捻转血矛线虫生长、发育、繁殖过程中的作用。【方法】对Hc-far-4进行克隆、并且构建原核表达载体p ET-30a-Hc-far-4,p ET-30a-Hc-far-4重组质粒经过PCR与双酶切鉴定准确无误之后转化到E. coli BL21感受态细胞中,用0.1 mmol·LIPTG(isopropyl-β-d-thiogalactoside)进行重组蛋白的诱导表达。收集重组蛋白r Hc-FAR-4,利用荧光分析法,研究r Hc-FAR-4蛋白与DAUDA、视黄醇、油酸的结合能力。配体结合试验是依据荧光物质retinol与脂肪酸类似物DAUDA在极性和非极性溶液中,在某一波长的激发光激发下,所发出的荧光光谱随之变化的特性,判断r Hc-FAR-4蛋白是否具有与DAUDA、retinol结合的能力。再在体系中加入非荧光长链脂肪酸油酸,根据荧光光谱的变化情况判定油酸能否分别与DAUDA、retinol竞争目的蛋白的脂肪酸结合位点,间接说明目的蛋白能否与非荧光脂肪酸油酸结合。同时制备鼠源多克隆抗体,利用ELISA技术检验免疫后小鼠的抗体效价,抗体效价合适即可收集小鼠血清。收集的血清用于免疫组织荧光(IHF)试验,探究Hc-FAR-4的表达部位,从而推测其功能。该试验过程为:对捻转血矛线虫进行石蜡包埋,石蜡切片,抗原修复,3%的BSA于4℃封闭过夜,自制鼠源多克隆抗体作为一抗孵育1 h; Alexa Fluor?488 nm羊抗鼠Ig G作为二抗避光孵育1 h,DAPI染色30 min,激光共聚焦显微镜检查染色情况。利用荧光定量PCR技术分析Hc-far-4在捻转血矛线虫各个主要阶段的表达特性。【结果】成功克隆目的基因Hc-far-4,测序结果与Sanger数据库中捻转血矛线虫far-4基因序列(>HCISE00908800.t1)相似度为99.9%;重组质粒p ET-30a-Hc-far-4在E. coli BL21中成功表达,在诱导8 h后达到峰值。经过ELISA检测,结果显示制备的鼠源多克隆抗体效价达到1﹕1 024 000—1﹕2 048 000,可用于后续试验。Western Blot鉴定结果显示r Hc-FAR-4重组蛋白带有His标签,并且条带大小为25 k D,结果符合预期。制备的鼠源多克隆抗体经过Western Blot鉴定,能够与天然Hc-FAR-4蛋白结合,说明该抗体可用于IHF试验。配体结合试验结果表明r Hc-FAR-4蛋白具有结合脂肪酸与视黄醇的能力。荧光定量PCR分析表明,Hc-far-4在四期幼虫中的转录水平最高;IHF试验表明,Hc-FAR-4主要表达在捻转血矛线虫的肠壁、性腺中。综上推测Hc-FAR-4蛋白主要在寄生生活阶段参与了转运脂肪酸与视黄醇,为捻转血矛线虫的生长发育与生殖提供营养物质。【结论】捻转血矛线虫FAR-4蛋白能够结合脂肪酸类似物DAUDA和视黄醇,但是与油酸的结合能力较弱,主要表达在肠壁,在性腺、角皮中也有少量表达,其基因在进行营寄生生活阶段时表达量达到峰值。

关键词：捻转血矛线虫 Hc-far-4 表达特性配体结合能力脂肪酸

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司法警务专业集群式实践教学基地管理与实践

辽宁高职学报 2017年第3期19卷 80-83页

作者：周静茹龚亭亭广东司法警官职业学院广东广州510520

司法警务专业"集群式"实践教学基地的建设内涵是以"校行政企"职业教育联盟为依托,校警合作,建立法院法警部门"集群式"实践教学基地、公安机关派出所"集群式"实践教学基地,建立共建互赢、协同实践育人机制。这一模式,能有效促进实践部门... 详细信息

司法警务专业"集群式"实践教学基地的建设内涵是以"校行政企"职业教育联盟为依托,校警合作,建立法院法警部门"集群式"实践教学基地、公安机关派出所"集群式"实践教学基地,建立共建互赢、协同实践育人机制。这一模式,能有效促进实践部门深度参与专业建设、专兼教师队伍建设、专业内涵建设、学生顶岗实习活动的有效实施。

关键词：高职教育司法警务专业 “集群式”实践基地

捻转血矛线虫锌金属蛋白酶NAS-31的表达特性及功能初步研究

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2021年第6期47卷 805-814页

作者：黄艳张惠童丹妮周静茹吴飞陈学秋杨怡马光旭杜爱芳浙江大学动物科学学院动物预防医学研究所杭州310058

捻转血矛线虫病由捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)寄生于反刍动物皱胃之中引起。为探究捻转血矛线虫锌金属蛋白酶NAS-31基因(Hc-nas-31)在虫体自由生活时期(特别是3期幼虫)中发挥的功能,本研究通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-ti... 详细信息

捻转血矛线虫病由捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)寄生于反刍动物皱胃之中引起。为探究捻转血矛线虫锌金属蛋白酶NAS-31基因(Hc-nas-31)在虫体自由生活时期(特别是3期幼虫)中发挥的功能,本研究通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测目的基因在捻转血矛线虫各发育阶段的转录水平,利用cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)、基因步移及融合PCR方法扩增并分析其基因结构;构建原核表达载体后转化至BL21感受态细胞中进行诱导表达;将纯化后的蛋白免疫新西兰大白兔以制备多克隆抗体;通过虫体间接免疫荧光分析Hc-NAS-31在捻转血矛线虫体内的表达特性并预测其功能。结果表明:Hc-nas-31在各时期虫体中均有转录,其中在3期幼虫中的转录水平最高;蛋白质印迹结果显示,制备的抗体能特异性结合Hc-NAS-31天然蛋白;间接免疫荧光分析发现,Hc-NAS-31蛋白主要表达于3期幼虫的上皮细胞合胞体内,在成虫中则分布于肠道、生殖腺(性腺)、肌肉组织及早期虫卵中。本实验明确了NAS-31在捻转血矛线虫中的表达特性,为进一步研究Hc-nas-31的生物学功能奠定了基础。

关键词：捻转血矛线虫捻转血矛线虫锌金属蛋白酶NAS-31基因转录水平表达特性

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草苁蓉中微量元素的测定

微量元素 1988年第4期 56-59页

作者：姚金玉卫永弟周静茹中国科学院长春应用化学研究所白求恩医科大学吉林省四平师范学院

列当科植物草苁蓉[Boschniakia rossica(chem et schlech.)Fedfsch. et Flerov],是我国长白山区1400～1800米高处生长的一种珍奇草药。民间称草苁蓉为“不老草”,认为它能使人精气不衰及长生不老,常作为奉献老人的珍品。据医书记载,该... 详细信息

列当科植物草苁蓉[Boschniakia rossica(chem et schlech.)Fedfsch. et Flerov],是我国长白山区1400～1800米高处生长的一种珍奇草药。民间称草苁蓉为“不老草”,认为它能使人精气不衰及长生不老,常作为奉献老人的珍品。据医书记载,该草药具有补肾壮阳、润肠和通便的功能。关于草苁蓉的化学成份国内外已有一些报导,但对其微量元素的含量的报导尚未见到。本文采用原子吸收光谱法,对该草中微量元素的含量进行了研究,测试

关键词：中微量元素 HGA 普通石墨管斜坡时间样品分析试样分析工作曲线