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一株产紫杉醇内生真菌YN6的分离及鉴定

中国生物化学与分子生物学报 2011年第10期27卷 961-967页

作者：张鹏刘博周蓬蓬王春兰江晨余龙江华中科技大学生命科学与技术学院资源生物与生物技术研究所武汉430074 华中科技大学生命科学与技术学院分子生物物理教育部重点实验室武汉430074 湖北省农业科学研究院经济作物研究所武汉430064

从云南红豆杉(Taxus yunnanensis)树皮内表皮中分离得到75株内生真菌,采用基于紫杉醇合成关键酶10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-O-乙酰基转移酶(10-deacetylbaccatinⅢ-10-O-acetyl transferase,DBAT)和C-13苯丙氨基侧链CoA乙酰基转移酶(C-13 phenylpropanoid side chain-CoAacyltransferase,BAPT)基因为标志分子的快速筛选方法获得一株可产紫杉醇的内生真菌YN6,并通过高效液相色谱法和质谱法对其紫杉醇进行分析.同时,通过对内生真菌YN6的形态特征分析以及18S rDNA序列分析将其初步鉴定为拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis sp.)真菌.拟盘多毛孢YN6的紫杉醇产量约为120～140μg/L,是目前已报道的紫杉醇产量较高的野生菌株之一.拟盘多毛孢YN6的发现为微生物发酵生产紫杉醇提供了潜在的优良种质资源.

关键词：云南红豆杉内生真菌紫杉醇拟盘多毛孢

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表面活性剂对被孢霉产花生四烯酸的影响

华中科技大学学报（自然科学版） 2003年第5期31卷 98-100页

作者：周蓬蓬秦文敏余龙江李家麟华中科技大学生命科学与技术学院华中师范大学化学系

筛选了对被孢霉产花生四烯酸 (AA)最佳的表面活性剂并确定了其最佳质量分数 ,发现 0 .3 %Tween2 0最有利于提高被孢霉的AA产量 ,并研究了 0 .3 %Tween 2 0对被孢霉发酵体系的KLa值、被孢霉生长、油脂和AA合成等的影响 .结果表明 :0 .3 %... 详细信息

筛选了对被孢霉产花生四烯酸 (AA)最佳的表面活性剂并确定了其最佳质量分数 ,发现 0 .3 %Tween2 0最有利于提高被孢霉的AA产量 ,并研究了 0 .3 %Tween 2 0对被孢霉发酵体系的KLa值、被孢霉生长、油脂和AA合成等的影响 .结果表明 :0 .3 %Tween 2 0可以提高被孢霉发酵体系的KLa值 ,虽然 0 .3 %Tween2 0对被孢霉生长和油脂合成没有明显的影响 ,但显著地提高了AA在油脂中的含量 ,从而最终提高AA产量 .尤其在第 7d,AA产量达 1 .61 g/L ,为对照组第 7d所得的 1 .3 1倍 .

关键词：表面活性剂花生四烯酸被孢霉

基于动力学模型的法夫酵母发酵生产虾青素的补料策略优化

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生物工程学报 2008年第11期24卷 1937-1942页

作者：鲁明波纪磊刘永胜周蓬蓬余龙江华中科技大学生命科学与技术学院生物技术系资源生物学与生物技术研究所武汉430074 浙江海翔药业股份有限公司台州318000

对法夫酵母的不同补料发酵方式进行了研究。基于底物抑制模型,提出了一种优化的两阶段补料策略,用于法夫酵母产虾青素的高密度发酵。在发酵的延迟期和对数生长期早期,糖浓度控制在25 g/L左右,在此条件下,生物量可以达到最大,且时间缩短... 详细信息

对法夫酵母的不同补料发酵方式进行了研究。基于底物抑制模型,提出了一种优化的两阶段补料策略,用于法夫酵母产虾青素的高密度发酵。在发酵的延迟期和对数生长期早期,糖浓度控制在25 g/L左右,在此条件下,生物量可以达到最大,且时间缩短。在对数生长期后期及稳定期,糖浓度控制在5 g/L,虾青素的合成时间可以有效延长。与传统的补料方式相比,采用此补料策略取得了较好的发酵效果。发酵终点细胞干重达到23.8 g/L,虾青素产量达到29.05 mg/L,分别比分批发酵提高了52.8%和109%。

关键词：补料发酵虾青素动力学模型两阶段发酵

过表达Dbtnbt基因提高中国红豆杉细胞的紫杉醇含量

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中国生物化学与分子生物学报 2014年第4期30卷 377-382页

作者：张鹏李书涛付春华周蓬蓬宋发军余龙江中南民族大学生命科学学院武汉430074 华中科技大学生命科学与技术学院资源生物与生物技术研究所武汉430074

本文通过克隆3'-N-去苯甲酰紫杉醇N-苯甲酰转移酶(3'-N-debenzoyltaxol Nbenzoyltransferase,DBTNBT)基因Dbtnbt,构建其表达载体p1303-SDbtnbtN,转化中国红豆杉细胞,经潮霉素抗性筛选获得转基因细胞系.转基因细胞分析结果表明,T-DNA及... 详细信息

本文通过克隆3'-N-去苯甲酰紫杉醇N-苯甲酰转移酶(3'-N-debenzoyltaxol Nbenzoyltransferase,DBTNBT)基因Dbtnbt,构建其表达载体p1303-SDbtnbtN,转化中国红豆杉细胞,经潮霉素抗性筛选获得转基因细胞系.转基因细胞分析结果表明,T-DNA及其包含的基因与宿主细胞染色体成功整合;转基因细胞中报告基因GusA-mgfp5正常表达;转基因细胞的Dbtnbt mRNA表达量是未转化细胞的1.33倍;转基因细胞的紫杉醇产量约为27.3μg/g,是未转化细胞的1.37倍.本研究结果表明,过表达Dbtnbt基因将中国红豆杉细胞的紫杉醇产量提高约37%.

关键词：红豆杉 3’-N-去苯甲酰紫杉醇N-苯甲酰转移酶(DBTNBT) 过表达紫杉醇

生物相容Fe_3O_4磁性纳米颗粒的合成及应用

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现代化工 2006年第Z1期26卷 322-326页

作者：李文兵周蓬蓬余龙江朱敏鲁明波华中科技大学生命科学与技术学院湖北武汉430074

总结了磁性Fe3O4纳米颗粒的制备方法,例如共沉淀法、高温热分解法、微乳液法、气、溶胶法及趋磁细菌合成法等,同时详细概述了生物相容磁性Fe3O4纳米微粒在生物活性物质的固定、修饰、分离、检测,靶向药物,癌症治疗及磁共振成像等生物医... 详细信息

总结了磁性Fe3O4纳米颗粒的制备方法,例如共沉淀法、高温热分解法、微乳液法、气、溶胶法及趋磁细菌合成法等,同时详细概述了生物相容磁性Fe3O4纳米微粒在生物活性物质的固定、修饰、分离、检测,靶向药物,癌症治疗及磁共振成像等生物医学方面的应用,并对前景进行了展望。

关键词：四氧化三铁磁性纳米颗粒生物相容材料生物技术

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双菌法处理味精废水的工艺研究

水处理技术 2003年第5期29卷 279-281页

作者：李为余龙江吴元喜周蓬蓬文淑萍华中科技大学生命科学与技术学院湖北武汉430074

采用假丝酵母和酿酒酵母双菌混合培养方法处理味精废水,其COD去除率明显高于单菌培养方法。对混合培养工艺进行研究,得到该双菌培养的最佳工艺条件为:接种龄为假丝酵母24h,酿酒酵母20h;接种比例为假丝酵母∶酿酒酵母=4∶1;总接种量为20%... 详细信息

采用假丝酵母和酿酒酵母双菌混合培养方法处理味精废水,其COD去除率明显高于单菌培养方法。对混合培养工艺进行研究,得到该双菌培养的最佳工艺条件为:接种龄为假丝酵母24h,酿酒酵母20h;接种比例为假丝酵母∶酿酒酵母=4∶1;总接种量为20%;接种顺序为酿酒酵母接种滞后于假丝酵母20h;培养时间为64h。

关键词：双菌法味精废水处理工艺研究双菌培养假丝酵母酿酒酵母

响应面法对红法夫酵母合成虾青素主要影响因素的优化

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工业微生物 2007年第1期37卷 63-66页

作者：何璞余龙江周蓬蓬汪文俊华中科技大学生命科学与技术学院武汉430074

在单因素试验确定了红法夫酵母生物合成虾青素培养基组份的基础上,用响应面法对其浓度进行优化。首先用分式析因设计评价了培养基的各组份对虾青素产量的影响,并找出主要影响因子为蔗糖和酵母粉,二者分别达到了极显著和显著水平。用最... 详细信息

在单因素试验确定了红法夫酵母生物合成虾青素培养基组份的基础上,用响应面法对其浓度进行优化。首先用分式析因设计评价了培养基的各组份对虾青素产量的影响,并找出主要影响因子为蔗糖和酵母粉,二者分别达到了极显著和显著水平。用最陡爬坡路径逼近最大响应区域后,运用旋转中心复合设计及响应面分析,确定了主要影响因子的最佳浓度。其中,蔗糖的最佳浓度为49.8g/L,酵母粉的浓度为9.6g/L。菌株在优化培养基中的虾青素产量为9861μg/L,比优化前增加了近1倍。

关键词：响应面法红法夫酵母虾青素优化

破壁条件对红发夫酵母类胡萝卜素提取率的影响

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中国饲料 2006年第4期 20-22,25页

作者：汪文俊周蓬蓬朱薿余龙江华中科技大学生命科学与技术学院武汉市430074

本研究先分别采用酸热法和酶法对红发夫酵母菌体进行破壁处理,然后对二者共存时的破壁条件进行了正交优化。结果表明,在60℃用2mol/L的盐酸处理6h效果最好,类胡萝卜素提取率达到85.32%,对虾青素的破坏率最小;用7mL溶菌酶在50℃处理6h效... 详细信息

本研究先分别采用酸热法和酶法对红发夫酵母菌体进行破壁处理,然后对二者共存时的破壁条件进行了正交优化。结果表明,在60℃用2mol/L的盐酸处理6h效果最好,类胡萝卜素提取率达到85.32%,对虾青素的破坏率最小;用7mL溶菌酶在50℃处理6h效果最好,类胡萝卜素提取率达到78.43%,对虾青素几乎没有破坏作用。酸和酶共存时破壁条件的优化结果表明,在50℃用2mol/L的盐酸和9mL的溶菌酶处理4h时类胡萝卜素提取率最高,达到95.62%,而且反应条件更温和、处理时间缩短、对类胡萝卜素破坏作用减小。在破壁后、菌体干燥前,用NaOH中和反应液中的盐酸使得终点pH值为3.0时效果最好,类胡萝卜素提取率提高到99.23%,表明经过处理的红发夫酵母菌体可以用作饲料添加剂。

关键词：类胡萝卜素虾青素破壁提取率红发夫酵母

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被孢霉产n-6多不饱和脂肪酸的分离纯化

华中师范大学学报（自然科学版） 2002年第3期36卷 341-344页

作者：周蓬蓬余龙江朱敏吴元喜李为李家麟华中科技大学生命科学与技术学院武汉430074 华中师范大学化学学院武汉430079

对高山被孢霉 (Mortierellaalpina)高产脂变异株M2 0 产生的含n 6PuFAs油脂的提取、精炼、浓缩进行了研究 .油脂的提取以乙醇和正已烷分步抽提效果较好 ,对纯化方法进行了改进 ,采用先皂化后脱胶除杂质的方法 .浓缩方法采用尿素包合法 ... 详细信息

对高山被孢霉 (Mortierellaalpina)高产脂变异株M2 0 产生的含n 6PuFAs油脂的提取、精炼、浓缩进行了研究 .油脂的提取以乙醇和正已烷分步抽提效果较好 ,对纯化方法进行了改进 ,采用先皂化后脱胶除杂质的方法 .浓缩方法采用尿素包合法 .油脂∶尿素 =1∶4的比例对该油脂浓缩较理想 ,提高了纯度和收率 ,使原油中仅含 2 0 %n 6多不饱和脂肪酸 (n 6PuFAs)提高到占总油脂的80 %以上 .

关键词：分离纯化高山被孢霉 n-6多不饱和脂肪酸尿素包合法人体前列腺素生理活性分类抽提