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α-芋螺毒素GI小鼠抗血清制备及抗毒活性研究

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α-芋螺毒素GI小鼠抗血清制备及抗毒活性研究

A型肉毒毒素轻链抑制剂CPI-1的衍生物的合成及活性评价

第十四届生物毒素毒理学术大会暨第一届生物毒素——从生存...

作者：余硕唐艺菲周良燚陈荣芳戴秋云军事科学院军事医学研究院生物工程研究所

芋螺毒素GI (ECCNPACGRHYSC-NH2)来自地纹芋螺(***),属于α-芋螺毒素,仅含13个氨基酸及2对二硫键,其作用靶标为肌肉型乙酰胆碱受体。GI是目前发现的毒性最强芋螺毒素之一,能导致中毒对象肌肉麻痹及呼吸抑制,对小鼠的LD为20～30μg/kg(...

芋螺毒素GI (ECCNPACGRHYSC-NH2)来自地纹芋螺(***),属于α-芋螺毒素,仅含13个氨基酸及2对二硫键,其作用靶标为肌肉型乙酰胆碱受体。GI是目前发现的毒性最强芋螺毒素之一,能导致中毒对象肌肉麻痹及呼吸抑制,对小鼠的LD为20～30μg/kg(腹腔注射)。目前临床上无药物及抗血清用于GI毒素中毒治疗。近期,我们开展芋螺毒素GI小鼠抗血清制备及抗血清的中和活性测定。首先采用戊二醛法化学偶联GI与牛血清蛋白

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A型肉毒毒素轻链抑制剂CPI-1的衍生物的合成及活性评价

第十四届生物毒素毒理学术大会暨第一届生物毒素——从生存适应到转化医学专题学术会议

作者：沈锦涛余硕周良燚余云舟戴秋云军事科学院军事医学研究院生物工程研究所

A型肉毒毒素(botulinum neurotoxin A,BoNT/A)是目前已知的毒性最强的生物毒素,由重链与轻链组成。重链介导毒素进入神经细胞,轻链为锌离子蛋白内切酶,特异性切割胞内SNARE家族蛋白,阻断乙酰胆碱递质释放,导致肌肉松弛或麻痹。肉毒中毒...

A型肉毒毒素(botulinum neurotoxin A,BoNT/A)是目前已知的毒性最强的生物毒素,由重链与轻链组成。重链介导毒素进入神经细胞,轻链为锌离子蛋白内切酶,特异性切割胞内SNARE家族蛋白,阻断乙酰胆碱递质释放,导致肌肉松弛或麻痹。肉毒中毒一般采用抗毒素治疗,但抗毒素仅能中和血液或体液中游离的毒素,对已进入细胞内的毒素无效。因肉毒毒素轻链进入神经细胞后难以出胞,持续水解SNARE家族蛋白,导致患者需经抗毒素治疗,但恢复很慢,甚至死亡。川楝素可抑制肉毒毒素进入神经细

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2种新型ω-芋螺毒素的合成及作用靶点鉴定

生物技术通讯 2019年第2期30卷 248-252页

作者：周良燚陈金琴余硕陈必链戴秋云福建师范大学生命科学院福建福州350117 军事医学研究院生物工程研究所北京100071

目的:合成2个来自泡芋螺的新型ω-芋螺毒素Bu1、Bu13,测定其作用靶标,为研制新型镇痛药提供先导化合物。方法:固相合成线性肽,然后在折叠液(0.5 mol/L乙酸铵、1 mmol/L谷胱甘肽、0.1 mmol/L氧化谷胱甘肽)中于4℃折叠24～48 h,富集纯化... 详细信息

目的:合成2个来自泡芋螺的新型ω-芋螺毒素Bu1、Bu13,测定其作用靶标,为研制新型镇痛药提供先导化合物。方法:固相合成线性肽,然后在折叠液(0.5 mol/L乙酸铵、1 mmol/L谷胱甘肽、0.1 mmol/L氧化谷胱甘肽)中于4℃折叠24～48 h,富集纯化得目标肽;利用膜片钳技术,测定其对N、P/Q及L型钙离子通道的抑制活性。结果:Bu1、Bu13对N型钙离子通道的半抑制浓度(IC50)分别为0.86、1.02μmol/L,抑制作用低于MⅦA(IC50=0.21μmol/L);10μmol/L Bu1、Bu13对P/Q型钙离子通道的抑制率分别为17.05%±1.34%、13.1%±2.69%,稍高于MⅦA(8.92%±2.12%);10μmol/L Bu1、Bu13对L型钙离子通道的抑制率分别为19.31%±6.22%、4.78%±0.77%,高于MⅦA(<5%)。结论:Bu1、Bu13选择性作用于N型钙离子通道,对P/Q、L型钙离子通道的抑制作用较低。

关键词：泡芋螺 ω-芋螺毒素膜片钳钙离子通道

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α芋螺毒素MI分支肽的合成及免疫原性研究

生物技术通讯 2019年第6期30卷 768-774页

作者：陈荣芳余硕周良燚张学荣戴秋云广西医科大学蛇毒研究所广西医科大学基础医学院广西南宁530021 军事医学研究院生物工程研究所北京100071

目的:为探索α芋螺毒素MI的解毒方法,研究MI分支肽抗原的合成方法、免疫原性及抗血清对MI的解毒活性。方法:采用固相多肽合成法合成含炔基MI线性肽及含叠氮赖氨酸分支肽,空气氧化得含炔基MI,通过铜[Cu(I)]催化叠氮-炔杂环加成反应合成... 详细信息

目的:为探索α芋螺毒素MI的解毒方法,研究MI分支肽抗原的合成方法、免疫原性及抗血清对MI的解毒活性。方法:采用固相多肽合成法合成含炔基MI线性肽及含叠氮赖氨酸分支肽,空气氧化得含炔基MI,通过铜[Cu(I)]催化叠氮-炔杂环加成反应合成多分支肽。多分支肽4次免疫BALB/c小鼠制备抗血清,ELISA法测定血清抗体滴度,然后MI与抗血清混合注射KM小鼠,测定抗血清的保护效果。结果:合成了MI八分支肽,N端连接的MI八分支肽的免疫原性差,10、20μg/只剂量组第4次免疫后的血清抗体滴度分别为1∶400及1∶6400;C端连接的MI八分支肽的免疫原性较高,10、20μg/只剂量组第4次免疫后的血清抗体滴度分别为1∶3200及1∶25600。各组200μL抗血清与20μg/kg MI混合后注射小鼠,小鼠均死亡,且死亡时间与对照组相比无显著差异。结论:C端连接的MI八分支肽比N端连接的八分肽免疫抗原性高,但两者的抗血清对MI无显著解毒活性。

关键词： α芋螺毒素八分支肽铜[Cu(I)]催化叠氮-炔杂环加成反应抗血清中和活性

α-芋螺毒素GI与破伤风毒素C融合蛋白的制备及其抗血清活性研究

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军事医学 2021年第8期45卷 598-602页

作者：余硕陈荣芳周良燚余云舟陈文文张敏张学荣戴秋云军事科学院军事医学研究院生物工程研究所北京100071 广西医科大学蛇毒研究所广西医科大学基础医学院南宁530021

目的制备α-芋螺毒素GI抗血清,为其中毒救治提供有效手段。方法构建包含α-芋螺毒素GI、PADRE和破伤风毒素C片段(TTC)融合蛋白的原核表达载体,原核表达GI-PADRE-TTC融合蛋白抗原,免疫BALB/c小鼠,获得抗血清。采用酶联免疫吸附实验(ELISA... 详细信息

目的制备α-芋螺毒素GI抗血清,为其中毒救治提供有效手段。方法构建包含α-芋螺毒素GI、PADRE和破伤风毒素C片段(TTC)融合蛋白的原核表达载体,原核表达GI-PADRE-TTC融合蛋白抗原,免疫BALB/c小鼠,获得抗血清。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清抗体滴度,并测定其对小鼠的抗毒活性。结果获得GITTC融合蛋白69.5 mg。GI-TTC融合蛋白免疫小鼠第5次免疫后血清对GI、GI-BSA的抗体滴度分别达到1∶102400及1∶204800。100、200μl融合蛋白抗血清对2.0×LD50的α-芋螺毒素GI中毒小鼠存活率分别为14.3%、25.0%,且小鼠死亡时间显著延长。结论α-芋螺毒素GI与破伤风毒素C片段的融合蛋白具有较好的免疫原性,其产生的抗血清对α-芋螺毒素GI具有一定中和活性。

关键词： α-芋螺毒素 GI 破伤风毒素C片段抗血清抗毒活性

干法压制包衣制备黄芩苷结肠靶向片及其处方工艺研究

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中国药学杂志 2023年第15期58卷 1391-1397页

作者：王荣杰杨晓燚周良良陈振华江西科技师范大学药学院江西省药物分子设计与评价重点实验室南昌330013

目的采用干法压制包衣法制备黄芩苷结肠靶向片。方法根据单因素考察结果,以结肠靶向片的释药时滞和8 h累积释放度为指标,采用Box-Behnken响应面法对结肠靶向片的包衣处方进行优化。通过体外释放研究,优选包衣处方并评价其结肠靶向性。通... 详细信息

目的采用干法压制包衣法制备黄芩苷结肠靶向片。方法根据单因素考察结果,以结肠靶向片的释药时滞和8 h累积释放度为指标,采用Box-Behnken响应面法对结肠靶向片的包衣处方进行优化。通过体外释放研究,优选包衣处方并评价其结肠靶向性。通过DDSolver软件进行释药模型拟合。结果确定最佳的包衣处方为包衣增重110 mg,微晶纤维素和乳糖比例1∶2,瓜尔胶和填充剂比例1∶1,制备的包衣片释药时滞约6.5 h,在人工胃液和小肠液中均无释放,8 h累积释放度可达90%。黄芩苷结肠靶向片的体外释放度拟合度顺序为Logistic模型>Korsmeyer-Peppas模型>Higuch模型,Logistic模型的拟优合度(Rsqr_adj)为0.9999,拟合度(AIC)为10.9742,因此该结肠靶向片的释药机制为S型的溶蚀过程。结论按Box-Behnken响应面法优选处方制备的黄芩苷压制包衣结肠靶向片,符合结肠靶向制剂的释药标准。

关键词：黄芩苷结肠靶向片 Box-Behnken设计干法压制包衣累积释放度