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玉米蛋白粉中提取叶黄素的工艺研究

玉米蛋白粉中提取叶黄素的工艺研究

作者：周海胜浙江大学

学位级别：硕士

叶黄素(xanthophylls),是一种类“类胡萝卜素”族物质,包括黄体素(lutein),玉米黄质(zeaxanthin)等。叶黄素是一种性能优异的抗氧化剂,天然的叶黄素对人体具有区别于其它类胡萝卜素的特殊作用,如保护视力、降低白内障发生率等。目前,市... 详细信息

叶黄素(xanthophylls),是一种类“类胡萝卜素”族物质,包括黄体素(lutein),玉米黄质(zeaxanthin)等。叶黄素是一种性能优异的抗氧化剂,天然的叶黄素对人体具有区别于其它类胡萝卜素的特殊作用,如保护视力、降低白内障发生率等。目前,市场上的叶黄素产品均来自于天然物的提取。玉米蛋白粉(Corn Gluten Meal, CGM)是生产玉米淀粉的副产物,使用玉米蛋白粉作为提取叶黄素的原料,有着资源丰富、副产物再利用的优势。本文研究了玉米蛋白粉中叶黄素的提取和分离纯化技术。建立了叶黄素的反相高效液相色谱分析法,色谱条件为：色谱柱YMC-Carotenoid C303μm 4.6×150mm,流动相为甲醇：甲基叔丁基醚(MTBE):水=95：2：3,流速1.0mL/min,柱温30℃,检测波长为450nm/260nm双波长。建立了以蛋白酶水解预处理、有机溶剂浸提、液液萃取、柱层析、结晶等为主的叶黄素提取和分离工艺路线。各过程的最优工艺条件为：采用中性蛋白酶,酶浓度为2.5%,液固比为20mL/g,温度40℃,水解时间5h。获得叶黄素含量为0.3%左右的粗提物。然后用乙醚-粗提液-水(5：5：6)体系进行液液萃取,获得叶黄素收率为98%、含量达到1.0%左右的叶黄素粗制品。在静态吸附实验中,通过考察十种树脂对叶黄素萃取产物的静态平衡吸附量,发现树脂H吸附量相对较大。选用树脂H作为色谱柱固定相进行动态吸附及洗脱实验,以乙醇和水的混合溶剂为流动相进行洗脱,得到叶黄素含量为5.76%、回收率达97.2%的分离产物。将过柱后的产品在氯仿-正己烷溶剂中-4℃下低温结晶,得到纯度64%左右的叶黄素产品

关键词：叶黄素玉米蛋白粉蛋白酶水解大孔吸附树脂

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特异性标记胚胎干细胞分化的成血管细胞

安徽医科大学学报 2013年第5期48卷 545-549页

作者：李春周诗君翟志敏周海胜安徽医科大学附属省立医院儿科合肥230001 安徽医科大学第一临床学院合肥230032 安徽医科大学第二附属医院血液科合肥230601 安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室合肥230032

克隆小鼠flk1基因启动子和增强子,构建成血管细胞特异性表达GFP载体,并转染小鼠胚胎干细胞(ES)。将ES分化形成胚胎体(EB),观察EB中GFP表达,收集第4天的EB细胞进行流式细胞分析和分选,以获得GFP+细胞进行血细胞集落形成实验,以确定GFP标... 详细信息

克隆小鼠flk1基因启动子和增强子,构建成血管细胞特异性表达GFP载体,并转染小鼠胚胎干细胞(ES)。将ES分化形成胚胎体(EB),观察EB中GFP表达,收集第4天的EB细胞进行流式细胞分析和分选,以获得GFP+细胞进行血细胞集落形成实验,以确定GFP标记细胞造血分化潜能。结果显示,成功构建成血管细胞特异性表达GFP载体;转染的ES形成的EB中可见绿色荧光细胞。流式细胞分析结果发现,转基因组EB中的GFP+细胞(27.5%)与对照组EB中FLK1+细胞(28.1%)比较差异无统计学意义;GFP+和FLK1+细胞形成集落数比较差异无统计学意义。表明对ES分化产生的成血管细胞实现了特异性标记,为后续研究ES体外造血分化的分子机制奠定了基础。

关键词：胚胎干细胞成血管细胞造血细胞细胞分化细胞标记

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雷帕霉素对皮肤鳞癌细胞体外转移潜能的影响

中国药理学通报 2014年第4期30卷 550-554页

作者：郭思佳查晓军周海胜安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室安徽合肥230032

目的研究雷帕霉素(rapamycin,RAPA)在体外对上皮鳞癌细胞系A431的增殖、迁移以及侵袭能力的影响。方法体外培养人上皮鳞癌细胞A431,通过噻唑蓝(MTT)实验检测不同浓度的RAPA(5、10、20 nmol·L-1)对A431增殖的影响,并筛选出最适浓度。依... 详细信息

目的研究雷帕霉素(rapamycin,RAPA)在体外对上皮鳞癌细胞系A431的增殖、迁移以及侵袭能力的影响。方法体外培养人上皮鳞癌细胞A431,通过噻唑蓝(MTT)实验检测不同浓度的RAPA(5、10、20 nmol·L-1)对A431增殖的影响,并筛选出最适浓度。依此浓度分别通过划痕、Transwell试验检测A431的迁移和侵袭能力变化。经RAPA处理后,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测A431中骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的mRNA和蛋白的表达水平的变化。结果 MTT实验结果显示不同浓度RAPA对A431增殖有抑制作用,且表现浓度依赖性。RAPA作用于A431细胞48 h后,划痕实验及Transwell实验显示A431的迁移和侵袭能力受到明显抑制。RT-PCR和Western blot结果都显示RAPA处理的A431细胞中OPN的表达下调。结论 RAPA可降低鳞癌细胞A431的增殖、迁移以及侵袭能力,其机制可能与RAPA抑制OPN的表达有关。

关键词：雷帕霉素上皮鳞状细胞癌骨桥蛋白细胞增殖细胞迁移细胞侵袭

蛋白酶预处理对玉米蛋白粉中叶黄素提取的影响

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食品科学 2010年第20期31卷 52-57页

作者：周海胜蒋凌志黄梅浙江大学化学工程与生物工程学系浙江杭州310027

选用玉米蛋白粉为原料,通过蛋白酶预处理再进行有机溶剂提取的方式制备叶黄素。与玉米蛋白粉中叶黄素的非酶解直接提取法相比,原料玉米蛋白粉采用最佳蛋白酶水解工艺预处理后(中性蛋白酶,酶用量为14000U/g玉米蛋白粉,液固比为20:1(mL/g)... 详细信息

选用玉米蛋白粉为原料,通过蛋白酶预处理再进行有机溶剂提取的方式制备叶黄素。与玉米蛋白粉中叶黄素的非酶解直接提取法相比,原料玉米蛋白粉采用最佳蛋白酶水解工艺预处理后(中性蛋白酶,酶用量为14000U/g玉米蛋白粉,液固比为20:1(mL/g),温度40℃,水解时间5h),不但使叶黄素的提取量由非酶解直接提取的165.3μg/g提高到340.5μg/g,而且浸提时间由5h缩短为20min。

关键词：叶黄素玉米蛋白粉蛋白酶水解提取

基于分子伴侣策略提高NADPH依赖型醇脱氢酶的异源可溶性表达

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中国生物工程杂志 2020年第8期40卷 24-32页

作者：邓通周海胜吴坚平杨立荣浙江大学化学工程与生物工程学院生物工程研究所杭州310027

目的:生物催化的氧化还原反应广泛应用于手性化合物的制备,其中很多反应涉及辅酶NADPH的原位再生。以异丙醇为辅助底物,利用醇脱氢酶再生NADPH,具有比酶活高、副产物丙酮易于分离等优势,受到越来越多的关注。选择极具应用潜力的来源于Cl... 详细信息

目的:生物催化的氧化还原反应广泛应用于手性化合物的制备,其中很多反应涉及辅酶NADPH的原位再生。以异丙醇为辅助底物,利用醇脱氢酶再生NADPH,具有比酶活高、副产物丙酮易于分离等优势,受到越来越多的关注。选择极具应用潜力的来源于Clostridium beijerinckii的醇脱氢酶CbADH作为研究对象,针对其在大肠杆菌中的可溶性表达差、酶活低的瓶颈问题开展研究。方法:首先通过引入诱导型质粒p Gro7表达分子伴侣GroES-GroEL,将pET-28a(+)质粒表达CbADH的可溶性提高了3.57倍,酶活达到出发菌株的4.83倍。其次,考察了另外三种不同的分子伴侣表达策略:pET-28a(+)单质粒共表达、基因组强化表达GroES-GroEL和组成型改造pGro7/GroES-GroEL和pET-28a(+)/CbADH双质粒共表达。结果:组成型改造pGro7和pET-28a(+)双质粒共表达策略的效果最优,其CbADH的可溶性表达提高了8.07倍,酶活达到了21.79U/mg DCW,是出发菌株的9.43倍。结论:为CbADH的工业应用奠定了良好的基础,也为外源蛋白的可溶性表达提供了参考。

关键词：醇脱氢酶异源可溶性表达分子伴侣 NADPH

红色毛癣菌致皮下脓肿型Majocchi肉芽肿

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临床皮肤科杂志 2014年第1期43卷 24-26页

作者：张思平刘琼胡闻周海胜安徽省立医院皮肤科安徽合肥230001 安徽省立医院病理科安徽合肥230001 安徽医科大学生命科学学院.安徽合肥230000

目的:报告1例红色毛癣菌引起的皮下脓肿型Majocchi肉芽肿,并对国内报道的类似病例进行文献回顾。方法:对患者的临床资料、真菌学检查、分子生物学鉴定、组织病理及疗效进行分析,并对1998—2012年国内报道的16例红色毛癣菌肉芽肿进行分... 详细信息

目的:报告1例红色毛癣菌引起的皮下脓肿型Majocchi肉芽肿,并对国内报道的类似病例进行文献回顾。方法:对患者的临床资料、真菌学检查、分子生物学鉴定、组织病理及疗效进行分析,并对1998—2012年国内报道的16例红色毛癣菌肉芽肿进行分析比较。结果:患者为女性,23岁。患有特发性血小板减少性紫癜,长期应用糖皮质激素,左小腿出现结节、脓肿及溃疡4个月。溃疡表面分泌物真菌镜检菌丝阳性,真菌培养及分子生物学鉴定为红色毛癣菌。皮损组织病理可见真皮深层及皮下组织大片坏死,有较多中性粒细胞和少量多核巨噬细胞浸润,PAS染色可见菌丝。诊断为:红色毛癣菌皮下脓肿型Majocchi肉芽肿。伊曲康唑治疗3个月皮疹消退留有瘢痕,随访3个月无复发。文献回顾发现,红色毛癣菌肉芽肿病程长,大部分患者免疫功能正常,皮损多为结节、斑块,出现皮下脓肿较少见。应用伊曲康唑或特比萘芬治疗一般均有较好治疗效果。结论:红色毛癣菌致皮下脓肿型Majocchi肉芽肿较少见,及时足量应用伊曲康唑治疗,疗效确切。

关键词： Majocchi肉芽肿红色毛癣菌伊曲康唑

过量表达LMO2对成血管细胞增殖和造血分化的作用

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中国医学科学院学报 2013年第2期35卷 177-184页

作者：周海胜李春查晓军陈兵刘德培安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室合肥230032 安徽医科大学附属省立医院儿科合肥230001 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的利用小鼠胚胎干细胞进行体外造血细胞分化,研究LMO2蛋白在成血管细胞分化过程中的作用。方法构建小鼠成血管细胞特异性表达lmo2或绿色荧光蛋白的表达载体,分别转染小鼠胚胎干细胞。经过筛选获得细胞克隆进行自发分化以形成胚胎体。... 详细信息

目的利用小鼠胚胎干细胞进行体外造血细胞分化,研究LMO2蛋白在成血管细胞分化过程中的作用。方法构建小鼠成血管细胞特异性表达lmo2或绿色荧光蛋白的表达载体,分别转染小鼠胚胎干细胞。经过筛选获得细胞克隆进行自发分化以形成胚胎体。收集分化0～12 d的胚胎体细胞,检测造血细胞相关基因的表达;利用EB细胞进行细胞集落形成实验及血细胞集落形成单位实验,并统计集落形成数。结果成功构建了成血管细胞特异性表达目的基因的表达载体,转染目的基因的小鼠胚胎干细胞在其分化中产生的成血管细胞可特异表达目的基因。过量表达lmo2能够促进造血相关基因的表达,所产生细胞集落数是对照组的2倍,晚期造血分化的血细胞集落形成单位总数是对照组的2.5倍,其中红系集落单位数是对照组的3倍。结论在成血管细胞中过量表达LMO2,促进其细胞增殖及其造血细胞分化。

关键词： LMO2 胚胎干细胞成血管细胞增殖分化

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内地“世界杯经济”如火如荼

经济导报 2010年第23期 21-22页

作者：周海胜《经济导报》编辑部

6月，四年一届的世界杯在南非拉开帷幕，而在这之前围绕世界杯展开的各种“商战”已经打响。不知道你准备好没有，反正已经有商家正拿起刀子准备分切世界杯大蛋糕了。“谁会错遇世界杯呢？”无论你是超级球迷，还是超级为球迷，铺天盖... 详细信息

6月，四年一届的世界杯在南非拉开帷幕，而在这之前围绕世界杯展开的各种“商战”已经打响。不知道你准备好没有，反正已经有商家正拿起刀子准备分切世界杯大蛋糕了。“谁会错遇世界杯呢？”无论你是超级球迷，还是超级为球迷，铺天盖地的世界杯“浪潮”都始终让你置身于这场体育的饕餮盛宴中。

关键词：世界杯经济内地 “商战” 球迷商家

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深圳“大特区”浮出水面

经济导报 2010年第22期 13-14页

作者：周海胜《经济导报》编辑部

日前．在深圳市五届人大一次会议第二场记者会上，深圳市政府新闻办相关负责人正式向媒体公布了国务院对广东省《关于延伸深圳经济特区范围的请示》作出批复的消息。根据批复，从7月1日起，深圳经济特区范围扩大到深圳全市，将宝安、龙... 详细信息

日前．在深圳市五届人大一次会议第二场记者会上，深圳市政府新闻办相关负责人正式向媒体公布了国务院对广东省《关于延伸深圳经济特区范围的请示》作出批复的消息。根据批复，从7月1日起，深圳经济特区范围扩大到深圳全市，将宝安、龙岗两区纳入特区范围。扩容后的“大特区”面积将扩大5倍，接近香港面积（1103平方公里）的两倍。

关键词：深圳经济特区深圳市水面广东省国务院负责人市政府批复