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应用化工 2024年第8期53卷 1992-1996,2009页

作者：陈丽军李渺魏娴柏松贵州理工学院化学工程学院贵州贵阳550003 贵州工业职业技术学院贵州贵阳550008

采用紫外分光光度计法,评估了一些杀菌剂对猕猴桃溃疡病菌的抑制活性,将两种活性较好的杀菌剂进行复配后,以纳米氢氧化镁为药物载体,研究了纳米氢氧化镁载体对复配杀菌剂的负载情况,并评估了纳米氢氧化镁对复配药物的抗猕猴桃溃疡病菌... 详细信息

采用紫外分光光度计法,评估了一些杀菌剂对猕猴桃溃疡病菌的抑制活性,将两种活性较好的杀菌剂进行复配后,以纳米氢氧化镁为药物载体,研究了纳米氢氧化镁载体对复配杀菌剂的负载情况,并评估了纳米氢氧化镁对复配药物的抗猕猴桃溃疡病菌的影响,并对载体药物进行了田间应用效果研究。结果表明,测试的杀菌药剂都对猕猴桃溃疡病菌显示出一定的抑制活性,其中:复配药物-纳米氢氧化镁的抑菌活性最好,EC_(50)为23.50μg/mL,其次为复配药物,EC_(50)为42.11μg/mL。以纳米氢氧化镁作为药物载体,对药物的抗猕猴桃溃疡病菌有很好的协同作用,能提高药物的抑菌活性。另外,纳米氢氧化镁的含量对于载药量和包封率有显著影响。当氢氧化镁的含量从1 mg增加到3.5 mg时,载药量增加了43%,包封率增加了11%。此外,复配药物-纳米氢氧化镁载体剂对猕猴桃溃疡病有较好的田间防治效果,防效可达73.8%。

关键词：猕猴桃溃疡病复配增效纳米氢氧化镁杀菌剂田间防效

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基于转化相关重组克隆曲酸合成基因簇及其在黑曲霉中的异源整合表达

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微生物学通报 2024年

作者：赵宇欣谭宇洋高莹朱柏松张明怡曹威天津科技大学生物工程学院工业发酵微生物教育部重点实验室天津市工业微生物重点实验室

【背景】黑曲霉是一种重要的丝状真菌底盘细胞，然而对其进行大片段DNA的遗传操作存在工具缺乏、效率低下的问题。海量基因组数据中存在大量未被鉴定的次级代谢产物合成基因簇，因相应DNA分子量大而难以克隆，大部分基因与产物分子之间... 详细信息

【背景】黑曲霉是一种重要的丝状真菌底盘细胞，然而对其进行大片段DNA的遗传操作存在工具缺乏、效率低下的问题。海量基因组数据中存在大量未被鉴定的次级代谢产物合成基因簇，因相应DNA分子量大而难以克隆，大部分基因与产物分子之间的映射关系尚未被解析。【目的】开发一种适配黑曲霉的大片段DNA分子直接克隆的方法。以直接克隆米曲霉来源的曲酸合成基因簇(约30 kb)在黑曲霉底盘细胞中表达，实现曲酸的异源发酵。【方法】基于转化相关重组(transformation-associated recombination， TAR)克隆，构建适配黑曲霉转化的TAR捕获骨架载体pSEA-TAR；将曲酸合成基因簇上下游各1 kb同源DNA序列先后引入pSEA-TAR，中间以唯一的XhoⅠ相隔，得到曲酸合成基因簇捕获载体pSEA-KLR；随后，将NotⅠ/SbfⅠ消化后含有完整曲酸合成基因簇及上下游同源序列的米曲霉基因组与经XhoⅠ线性化的pSEA-KLR共同转化酿酒酵母VL6-48，通过营养缺陷筛选，获得成功捕获曲酸合成基因簇的重组子，提取质粒，电转化大肠杆菌扩增重组质粒；借助农杆菌介导黑曲霉转化，对获得的含有曲酸合成基因簇的黑曲霉转化子进行曲酸发酵，检测曲酸合成水平。【结果】获得了含有ARSH4/CEN6、TRP1、hph和LB/RB-T-DNA repeat的基于TAR克隆、适配黑曲霉表达的大片段DNA捕获载体pSEA-TAR。借助酿酒酵母高效的同源重组系统，通过同源重组获得含有曲酸合成基因簇的重组质粒pSEA-TAR-KA，捕获成功率为5.9%。对获得的含有曲酸合成基因簇的10株黑曲霉重组菌株KA1-KA10进行发酵分析发现均成功合成了曲酸，其中黑曲霉KA-2发酵7 d后曲酸水平最高，达到5.86 g/L。【结论】构建了适配黑曲霉的TAR克隆体系，用于大片段DNA高效捕获、重构和表达大型生物合成基因簇。以来源于米曲霉的曲酸合成基因簇捕获及在黑曲霉中成功实现曲酸合成验证了其有效性，进一步丰富了黑曲霉作为底盘细胞在重要化合物绿色生物制造中的作用。

关键词：转化相关重组(TAR)克隆大片段DNA 黑曲霉曲酸合成基因簇

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