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大肠埃希菌肠毒素B亚基对弓形虫速殖子SAG1-ROP2复合基因免疫效果的影响

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2010年第2期28卷 115-119页

作者：赵红何深一李婷赵广会周怀瑜赵群力山东大学医学院寄生虫学教研室济南250012

目的研究大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚基(LTB)对弓形虫速殖子SAG1-ROP2复合基因免疫效果的影响。方法构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-SAG1-ROP2和pEASY-E1-LTB。BALB/c小鼠88只,随机均分为4组,分别用PBS(A组)、pcDNA3.1空质粒(B组)、pcDNA3... 详细信息

目的研究大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚基(LTB)对弓形虫速殖子SAG1-ROP2复合基因免疫效果的影响。方法构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-SAG1-ROP2和pEASY-E1-LTB。BALB/c小鼠88只,随机均分为4组,分别用PBS(A组)、pcDNA3.1空质粒(B组)、pcDNA3.1-SAG1-ROP2质粒(C组),以及pcDNA3.1-SAG1-ROP2质粒和pEASY-E1-LTB质粒(D组)进行滴鼻免疫,每种质粒20μg/(只·次)。每组小鼠随机抽取15只,每周免疫1次,共4次,末次免疫后2周,测定其血清IgG和IgA抗体水平,气管和小肠黏膜冲洗液分泌型IgA(sIgA)水平,以及脾细胞培养上清中γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)水平;每组中余7只小鼠,每周免疫1次,共3次,末次免疫后4周,弓形虫速殖子腹腔接种感染(1×103/鼠),观察比较各组生存时间。结果成功构建pEASY-E1-LTB重组表达质粒。D组小鼠血清IgG(0.626±0.100)和IgA抗体水平(1.086±0.138),气管和小肠黏膜冲洗液sIgA水平(0.886±0.164),以及细胞因子IFN-γ[(2017±266)pg/ml]和IL-4水平[(203±31)pg/ml]均显著高于其他各组(均P<0.05)。感染弓形虫速殖子后,A、B、C和D组小鼠的生存时间中位数分别为3、4、6和10d,D组的生存时间长于其他各组(均P<0.05)。结论LTB能明显增强弓形虫速殖子SAG1-ROP2复合基因的免疫效果。

关键词：刚地弓形虫复合基因疫苗大肠埃希菌不耐热肠毒素黏膜免疫

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血吸虫病（基础）

山东卫生 2003年第12期 54-55页

作者：古钦民周怀瑜山东大学医学院寄生虫学教研室主任山东大学医学院讲师

血吸虫病是由血吸虫寄生于人体引起的一种人兽共患寄生虫病，该病传播广泛，危害严重。寄生人体的血吸虫主要有日本血吸虫、埃及血吸虫、曼氏血吸虫、间插血吸虫、湄公血吸虫等。我国只有日本血吸虫，近年来，由于血防队伍减少、经费严... 详细信息

血吸虫病是由血吸虫寄生于人体引起的一种人兽共患寄生虫病，该病传播广泛，危害严重。寄生人体的血吸虫主要有日本血吸虫、埃及血吸虫、曼氏血吸虫、间插血吸虫、湄公血吸虫等。我国只有日本血吸虫，近年来，由于血防队伍减少、经费严重不足以及大规模的农田水利基本建设和大量人口流动，致使这种古老的疾病仍在不断延续。

关键词：血吸虫病病原学免疫诊断流行病学治疗

刚地弓形虫14-3-3蛋白真核表达载体的构建与表达

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第6期30卷 438-441页

作者：孙敏何深一赵广会丛华周怀瑜赵群力孟敏山东大学医学院病原生物学研究所济南250012

目的构建并表达刚地弓形虫RH株14-3-3蛋白的真核表达载体。方法用生物信息学方法对弓形虫14-3-3蛋白的理化性质和结构进行预测。以弓形虫RH株总RNA为模板,逆转录PCR(RT-PCR)扩增目的基因片段,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.0,构建重组质粒... 详细信息

目的构建并表达刚地弓形虫RH株14-3-3蛋白的真核表达载体。方法用生物信息学方法对弓形虫14-3-3蛋白的理化性质和结构进行预测。以弓形虫RH株总RNA为模板,逆转录PCR(RT-PCR)扩增目的基因片段,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.0,构建重组质粒pcDNA3.0/14-3-3,经PCR、双酶切和测序鉴定正确后,用脂质体法转染人宫颈癌(HeLa)细胞,蛋白印迹(Western blotting)分析表达产物。结果根据14-3-3蛋白基因片段序列和氨基酸序列预测,该蛋白分子为酸性可溶性蛋白,主要以同源或异源二聚体存在,有5个氨基酸保守序列区。RT-PCR的扩增产物约为800 bp,构建的真核表达质粒pcDNA3.0/14-3-3插入片段经测序,片段长度为801 bp,与GenBank中刚地弓形虫14-3-3蛋白基因序列(登录号为AB012775.1)同源性为99%。Western blotting分析结果显示,在转染pcDNA3.0/14-3-3的细胞中,有14-3-3蛋白表达,相对分子质量(Mr)约为30 000,且表达量显著高于转染空质粒和未转染的细胞。结论构建了真核表达载体pcDNA3.0/14-3-3,并能在真核细胞内表达。

关键词：刚地弓形虫 14-3-3蛋白真核表达生物信息学

用含霍乱毒素A_2/B的载体在大肠杆菌中表达弓形虫主要表面抗原P30

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中国人兽共患病杂志 2003年第6期19卷 21-23,16页

作者：于瑾古钦民李瑛何深一王伟卞继峰周怀瑜赵群力丛华山东大学医学院病原生物学研究所济南250012 山东大学医学院分子生物学实验室

目的　克隆并表达含有弓形虫P30抗原及霍乱毒素A2 /B亚基基因的原核表达载体 ,为弓形虫疫苗的研究奠定基础。方法　应用PCR方法扩增出P30基因片段后 ,克隆入含有霍乱毒素A2 /B亚基基因的表达质粒pUAB0 2 4 ,在大肠杆菌JM10 9(DE3)中表... 详细信息

目的　克隆并表达含有弓形虫P30抗原及霍乱毒素A2 /B亚基基因的原核表达载体 ,为弓形虫疫苗的研究奠定基础。方法　应用PCR方法扩增出P30基因片段后 ,克隆入含有霍乱毒素A2 /B亚基基因的表达质粒pUAB0 2 4 ,在大肠杆菌JM10 9(DE3)中表达融合蛋白。通过SDS -PAGE电泳及Westernblotting进行检测鉴定。结果　电泳证明质粒构建正确 ,SDS -PAGE显示经IPTG诱导可以产生特异性条带 ,Westernblotting进一步证实该条带为P30 -CTA2 /B融合蛋白。结论　表达载体pUAB0 2 4 -P30可有效表达特异性的融合弓形虫抗原蛋白P30 -CTA2 B。

关键词：霍乱毒素 A2/B 载体大肠杆菌弓形虫表面抗原P30 弓形虫病基因表达

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青少年感染蠕形螨的调查研究

医学动物防制 2001年第12期17卷 639-640页

作者：周怀瑜赵群力山东大学医学院寄生虫学教研室济南250012

采用透明胶纸粘贴法对卫校508名中专学生进行面部人体蠕形螨感染情况的调查。结果表明有蠕形螨寄生者126人,总感染率为24.80％,男性感染率为49.02％,女性为22.10％,两者显著差异(P<0.01)。最易检出部位为鼻部(鼻尖、鼻沟)。结果还显示... 详细信息

采用透明胶纸粘贴法对卫校508名中专学生进行面部人体蠕形螨感染情况的调查。结果表明有蠕形螨寄生者126人,总感染率为24.80％,男性感染率为49.02％,女性为22.10％,两者显著差异(P<0.01)。最易检出部位为鼻部(鼻尖、鼻沟)。结果还显示面部皮损及有症状者的感染率为24.69％,显著高于正常人群(P<0.01)。

关键词：人体蠕形螨感染率致病性中专学生

2000～2009年济南市中小学生肠道寄生虫感染情况分析

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中国病原生物学杂志 2012年第12期7卷 930-932,941页

作者：赵群力张萍李新爱田庆新雷畅何琳娜周怀瑜山东大学医学院寄生虫学教研室山东济南250012 济南市二棉医院济南护理职业学院山东中医药大学附属医院山东省军区门诊部山东省胸科医院

目的了解济南市中小学生肠道寄生虫感染情况,为学校开展健康教育、制定寄生虫病防治对策和开展驱虫治疗提供科学依据。方法采用改良加藤厚涂法检测蛔虫、钩虫、鞭虫和华支睾吸虫虫卵,透明胶纸法检测蛲虫虫卵。结果肠道寄生虫总感染率为9... 详细信息

目的了解济南市中小学生肠道寄生虫感染情况,为学校开展健康教育、制定寄生虫病防治对策和开展驱虫治疗提供科学依据。方法采用改良加藤厚涂法检测蛔虫、钩虫、鞭虫和华支睾吸虫虫卵,透明胶纸法检测蛲虫虫卵。结果肠道寄生虫总感染率为9.16%,共查出5种寄生虫,其中蛔虫、鞭虫、钩虫、蛲虫、华支睾吸虫感染率分别为3.91%、2.05%、0.74%、2.00%和0.46%。城、乡中小学生寄生虫总感染率分别为5.50%和13.18%,差异有统计学意义(χ2=38.0585,P<0.05);男性华支睾吸虫感染率为0.85%,女性为0.09%,差异有统计学意义(χ2=5.1422,P<0.05)。结论 2000～2009年济南市中小学生肠道寄生虫感染率呈下降趋势,但农村感染率仍然偏高,建议把肠道寄生虫防治的重点放在农村,采取有效防治措施,降低人群感染率。

关键词：肠道寄生虫感染率中小学生

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弓形虫多价DNA疫苗免疫途径与效果评价

中国公共卫生 2006年第1期22卷 56-57页

作者：丛华古钦民周怀瑜李瑛何深一赵群力王静雯山东大学医学院病原生物研究所寄生虫学教研室济南250012 山东省医学科学院附属医院

目的观察弓形虫多价DNA疫苗经不同免疫途径对小鼠的免疫效果。方法通过基因重组技术构建弓形虫多价抗原与霍乱毒素融合基因的真核表达质粒pSAG1-2-CTA2/B;碱裂解法大量制备重组质粒经肌注、滴鼻途径免疫小鼠,每2周免疫1次,共3次,于免疫... 详细信息

目的观察弓形虫多价DNA疫苗经不同免疫途径对小鼠的免疫效果。方法通过基因重组技术构建弓形虫多价抗原与霍乱毒素融合基因的真核表达质粒pSAG1-2-CTA2/B;碱裂解法大量制备重组质粒经肌注、滴鼻途径免疫小鼠,每2周免疫1次,共3次,于免疫前和免疫后4周断尾取血测定IgG抗体和血清中的细胞因子干扰素(IFN-γ)、白介素(IL-4);取免疫小鼠脾脏测定T淋巴细胞增殖活性、自然杀伤细胞(NK细胞)活性及T细胞亚群。结果经肌注免疫的小鼠IgG抗体生成明显(P<0.05),经滴鼻免疫的小鼠细胞免疫水平明显增强(P<0.01)。同时经2种途径免疫的小鼠体液免疫和细胞免疫水平均明显增强(P<0.01),且免疫鼠生存率大大提高(P<0.05)。结论多种免疫途径结合可有效增强弓形虫多价DNA疫苗的免疫原性。

关键词：弓形虫 DNA疫苗免疫途径