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红色红曲菌M7色素合成相关基因MpigM和MpigN/O功能的初步研究

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红色红曲菌M7色素合成相关基因MpigM和MpigN/O功能的初步研究

作者：周彦怡华中农业大学

学位级别：硕士

红曲菌(Monascus spp.)属于食品发酵微生物,其发酵产品红曲,在我国有近2000年的应用历史。红曲色素(Monascus pigments,MPs)是红曲菌产生的天然色素,主要用做食品着色剂。由于具有天然、安全等特性,是近年来我国发展速度最快的食品着色... 详细信息

红曲菌(Monascus spp.)属于食品发酵微生物,其发酵产品红曲,在我国有近2000年的应用历史。红曲色素(Monascus pigments,MPs)是红曲菌产生的天然色素,主要用做食品着色剂。由于具有天然、安全等特性,是近年来我国发展速度最快的食品着色剂之一。关于MPs合成途径的研究开始于上世纪60年代初,但目前仍不清楚。从上世纪90年代中期开始,本实验团队开展了红曲菌分子生物学研究,于2010年完成1株红色红曲菌(M M7的全基因组测序与分析,克隆得到一个全长为51 kb,包括16个基因的合成MPs的基因簇,并对相关基因陆续开展了研究。本实验对MPs合成基因簇中的MpigM和MpigN/O基因的功能进行了初步研究。通过根癌农杆菌介导的转化(Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation,ATMT)方法,对该基因簇中MpigM和MpigN/O分别进行了敲除,得到突变菌株△MpigM和△MpigN/O,并对其生长、色素与桔霉素产生等进行了分析。具体结果如下:***和MpigN/O的敲除以潮霉素B抗性基因(hph)为筛选标记,分别与基因MpigM和MpigN/O的上下游序列构建敲除载体pCMPIGM和pCMPIGN/O,采用ATMT,对M ruber M7进行了转化,通过PCR和Southern blot对获得的转化子进行筛选验证,分离得到阳性敲除子△MpigM 和△MpigN/O。2.△MpigM和△MpigN/O的特性分析2.1 △MpigM和△MpigN/O在不同培养基上的生长特点将基因敲除菌株△MMpigM和△pigN/O与野生出发菌株M7分别点接于研究红曲菌常用的土豆葡萄糖固体培养基(Potato dextrose agarmedium,PDA)、甘油硝酸盐琼脂培养基(Glycerol(25%)nitrate agar medium,G25N)、察氏酵母提取物琼脂培养基(Czapek yeast extract agar medium,CYA)平板上,28℃培养,10 d,观察菌落和显微形态。结果显示,在以上各种培养基上△MpigM菌落的颜色均比M7的浅,而△MpigN/O的菌落则观察不到颜色。在生长速度方面,在以上各种培养基上,△MpigM的菌落直径与M7的没有明显区别。在PDA培养基上,△MpigN/O的菌落直径与M7差别不明显,而在CYA以及G25N培养基上,△MpigN/O的菌落直径约为M7的70%。显微观察发现,△MpigM和M7在PDA培养基上既可以产生分生孢子又可以产生闭囊壳,而△MpigN/O在PDA上只能观察到分生孢子,没有闭囊壳。M7在CYA和G25N培养基上主要产生大量分生孢子,△MpigM和△MpigN/O的观察结果与M7一致。以上结果表明,基因MpigM和MpigN/O都对菌株色素的产生有显著影响。MpigM的缺失对生长速度以及有性/无性繁殖无影响,而MpigN/O的缺失会减缓菌落的生长速度,影响菌株的有性繁殖,推测MpigN/O还是一个调控基因,可能参与MPs合成之外的其他过程,或是基因敲除的过程中产生了多拷贝菌株,使其他基因失活。2.2生物量的比较分别将M ruber M7和基因敲除菌株△MpigM和△MpigN/O的孢子悬液接种到土豆葡萄糖液体培养基(PDB)中,在28℃,100 r/min培养15 d,每隔2d取一次样,过滤分离发酵液和菌丝体,称量干燥后的菌丝体的重量,根据不同时间的发酵样品中菌丝体的干重,分析菌株液态发酵过程中生物量的变化。结果发现,△MpigM和△MpigN/O的生物量变化趋势与M7的相似,但M7的最大生物量可以达到4.7 mg/mL,而△MpigM和△MpigN/O的最大生物量分别为4.3 mg/mL和3.4 mg/mL。以上结果再次证明,基因MpigM对生长基本无影响,而基因MpigN/O除影响MPs合成外,还会影响菌株生长。2.3 △MpigM和△MpigN/O的MPs 成分分析分别将M7和△MpigM和△MpigN/O的孢子悬液接种到PDB培养基中,在28℃,100 r/min培养12 d,通过HPLC分别对发酵液和菌丝体的色素成分进行分析。结果显示,△MpigM的MPs成分中检测不到野生型菌株M7通常产生的几种MPs成分,主要只产生了四种黄色素,对其中含量较多的两种物质,经LC-MS等分析。结合相关研究报道,推断出这两种物质为Monasfluol A和Monasfluol B。而△MpigN/O的发酵液和菌丝体中没有发现MPs成分,但可以检测到MPs合成前体物M7pks-1。根据上述分析结果初步推断:MpigM编码的蛋白可能催化MPs结构中呋喃环的形成,而MpigN/O编码的蛋白可能负责化

关键词：红曲菌红曲色素红曲色素生物合成基因敲除

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暗纹东方鲀胚胎发育的观察

淡水渔业 2009年第6期39卷 22-27页

作者：莫根永胡庚东周彦锋广西北海市水产技术推广站广西北海536000 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心内陆渔业生态环境与资源重点开放实验室江苏无锡214081

采用连续观察法对暗纹东方鲀（TakifuguObscurus）人工授精的受精卵的发育进行观察，详细记录了暗纹东方纯胚胎发育各阶段的形态特征。结果显示：经人工催产所获得的暗纹东方纯受精卵为圆形，鹅黄色且透明，平均卵径为1．118—1．274mm... 详细信息

采用连续观察法对暗纹东方鲀（TakifuguObscurus）人工授精的受精卵的发育进行观察，详细记录了暗纹东方纯胚胎发育各阶段的形态特征。结果显示：经人工催产所获得的暗纹东方纯受精卵为圆形，鹅黄色且透明，平均卵径为1．118—1．274mm，受精卵在水温21oC±0．5℃下，受精3h10min后开始第1次卵裂，受精后40h30min开始形成器官，受精后131h15min开始孵出仔鱼。刚孵出的仔鱼全长（2．550±0．675）mm，肌节26—28对，卵黄囊大而侧扁，长径为（1．014±0．075）mm，短径为（0．904±0．095）mm。整个胚胎发育过程可划分为33个时期。

关键词：暗纹东方鲀(Takifugu Obscurus) 受精卵胚胎发育孵化

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眼球内猪囊尾蚴一例

中国实用眼科杂志 2008年第4期26卷 366-366页

作者：周彦华黑龙江省铁力林业局职工医院眼科黑龙江152500

患者男40岁不明原因左眼视力下降2月余，伴有眼前圆形黑影。经查：右眼视力5．0，左眼视力光感。左眼结膜无充血，角膜透明，晶状体透明，前房常深光反射（＋）KP：（-），瞳孔药物性散瞳约7mm×7mm，玻璃体腔内鼻下方可见一透明灰白色... 详细信息

患者男40岁不明原因左眼视力下降2月余，伴有眼前圆形黑影。经查：右眼视力5．0，左眼视力光感。左眼结膜无充血，角膜透明，晶状体透明，前房常深光反射（＋）KP：（-），瞳孔药物性散瞳约7mm×7mm，玻璃体腔内鼻下方可见一透明灰白色球形囊体，珍珠样色泽，金箔样反光环，囊壁光滑，大小约5．0PD，伴阵阵蠕动。在近囊体中心处可见一灰白色圆形斑点，囊尾蚴头节。

关键词：眼球内猪囊尾蚴视力下降不明原因右眼视力视力光感眼结膜透明晶状体

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薄荷油乙基纤维素微囊的制备

湖南中医学院学报 2003年第3期23卷 21-22页

作者：丁燕飞姚瑶陶昱斐周彦彬中南大学药学院湖南长沙410013

目的制备薄荷油微囊 ,降低药物挥发性。方法采用乳化—溶剂扩散法制备薄荷油微囊 ,观察其外形 ,并考察微囊的粒径分布及包封率。结果所得微囊呈球状 ,外观圆整且流动性好 ,微囊粒径大部分分布在 80～ 1 2 0 μm范围内 ,包封率可达 85 .8... 详细信息

目的制备薄荷油微囊 ,降低药物挥发性。方法采用乳化—溶剂扩散法制备薄荷油微囊 ,观察其外形 ,并考察微囊的粒径分布及包封率。结果所得微囊呈球状 ,外观圆整且流动性好 ,微囊粒径大部分分布在 80～ 1 2 0 μm范围内 ,包封率可达 85 .8%。结论该成囊方法简便易行 ,且重现性好。

关键词：薄荷油微囊乙基纤维食

小儿腹膜后畸胎瘤的CT与MRI表现特征及其诊断价值

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实用癌症杂志 2022年第3期37卷 501-504页

作者：王孝勇陈新亚周彦娟郑州大学附属儿童医院 450000

目的分析小儿腹膜后畸胎瘤的CT与MRI表现特征及诊断价值。方法随机选择小儿腹膜后畸胎瘤患儿62例,分别使用CT与MRI诊断。比较确诊情况、肿瘤位置正确检出情况,分析CT和MRI表现特征,判断联合诊断价值。结果CT确诊45例、MRI确诊49例、联... 详细信息

目的分析小儿腹膜后畸胎瘤的CT与MRI表现特征及诊断价值。方法随机选择小儿腹膜后畸胎瘤患儿62例,分别使用CT与MRI诊断。比较确诊情况、肿瘤位置正确检出情况,分析CT和MRI表现特征,判断联合诊断价值。结果CT确诊45例、MRI确诊49例、联合诊断确诊60例,CT+MRI联合确诊率高于单纯CT、单纯MRI(P0.05);在骶尾部、其他部位的正确检出率上差异比较有统计学意义(P囊性区呈现均匀T1和T2长信号;脂肪信号稍短T3信号,但T2信号延长;囊壁和间隔呈等T1信号和T2等信号;钙化病灶则为长T1信号和短T2信号。12例患儿出现囊实性改变,病理为成熟良性,表现为混杂密度和信号。STIR序列呈低信号改变,3例患儿内见脂肪信号。18例患儿肿瘤出现双底信号钙化改变。病灶直径13~189 mm,平均104 mm。联合诊断价值最高,明显高于单纯CT或MRI(P<0.05)。结论小儿腹膜后畸胎瘤的CT与MRI特征存在不同,联合应用能提升诊断价值。

关键词：小儿腹膜后畸胎瘤 CT MRI 诊断价值

细粒棘球蚴EgG1Y162-2与CTLA-4IgV-EgG1Y162-2蛋白结构预测及表位分析比较

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中国病原生物学杂志 2021年第5期16卷 546-551页

作者：赵商岐孔慧芳周彦霞李玉娇龚巧巧曹春宝丁剑冰周晓涛新疆医科大学基础医学院免疫学教研室新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院检验科

目的采用生物信息学的方法,应用相关软件对EgG1Y162-2和CTLA-4IgV-EgG1Y162-2蛋白的氨基酸序列进行分析,了解其理化性质及结构特点,预测并比较其抗原表位,为CTLA-4IgV-EgG1Y62-2蛋白作为包虫病表位疫苗的研究奠定基础。方法利用ProtPara... 详细信息

目的采用生物信息学的方法,应用相关软件对EgG1Y162-2和CTLA-4IgV-EgG1Y162-2蛋白的氨基酸序列进行分析,了解其理化性质及结构特点,预测并比较其抗原表位,为CTLA-4IgV-EgG1Y62-2蛋白作为包虫病表位疫苗的研究奠定基础。方法利用ProtParam在线软件分析EgG1Y162-2和CTLA-4IgV-EgG1Y162-2蛋白的理化性质;运用DNAstar中的protean软件与在线SOPMA软件预测EgG1Y162-2和CTLA-4IgV-EgG1Y162-2蛋白的二级结构;应用I-TASSER在线软件预测并比较EgG1Y162-2和CTLA-4IgV-EgG1Y162-2蛋白的三级结构,并使用BepiPred1.0,IEDB等软件对其T/B细胞抗原表位进行预测与分析。结果预测EgG1Y162-2蛋白由69个氨基酸组成,为稳定蛋白,具有亲水性。二级结构中的α螺旋、β-折叠、β-转角与无规则卷曲分别占7.69%、30.77%、15.38%和46.15%。预测的3条T细胞优势表位分别是1-18、21-43和47-62位氨基酸,2条B细胞优势抗原表位分别是9-28与57-69位氨基酸;CTLA-4IgV-EgG1Y162-2蛋白由208个氨基酸组成,稳定蛋白,具有亲水性。二级结构中的α螺旋、β-折叠、β-转角与无规则卷曲分别占13.46%、32.21%、7.69%和46.63%。预测的3条优势T细胞表位分别是143-154、165-177和183-199位氨基酸。2条B细胞优势抗原表位分别为151-167和197-205位氨基酸。结论EgG1Y162-2和CTLA-4IgVEgG1Y162-2蛋白均存在优势T抗原表位与B抗原表位,且T/B联合表位存在高度重合。说明CTLA-4IgV与EgG1Y162-2蛋白通过Linker序列连接后几乎未对EgG1Y162-2蛋白的优势表位产生影响。因此,将CTLA-4IgV基因与特异性抗原EgG1Y162-2基因进行融合表达可能会增强疫苗的免疫效果,这对囊型包虫病多价复合疫苗的研究具有重大意义。

关键词：细粒棘球绦虫生物信息学 EgG1Y162-2 CTLA-4IgV-EgG1Y162-2 抗原表位

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强直性脊柱炎骶髂关节病变48例CT分析

中国民康医学 2007年第12期19卷 500-500页

作者：周彦辽宁省抚顺市中医院放射科辽宁抚顺123000

目的:探讨强直性脊柱炎骶髂关节的CT特点,提高诊断强直性脊柱炎的水平。方法:回顾性分析40例经临床确诊的强直性脊柱炎患者的骶髂关节CT表现,并对其进行分析和总结。结果:强直性脊柱炎CT表现特点为骶髂关节面模糊,局限性侵蚀破坏,关节... 详细信息

目的:探讨强直性脊柱炎骶髂关节的CT特点,提高诊断强直性脊柱炎的水平。方法:回顾性分析40例经临床确诊的强直性脊柱炎患者的骶髂关节CT表现,并对其进行分析和总结。结果:强直性脊柱炎CT表现特点为骶髂关节面模糊,局限性侵蚀破坏,关节间隙改变,关节面下囊变和骨质硬化。结论:CT检查对强直性脊柱炎具有重要的诊断价值,有助于提高诊断的准确性。

关键词：骶髂关节强直性脊柱炎体层摄影术 X线计算机

子宫内膜间质肉瘤的临床与彩色多普勒超声特征

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福建医科大学学报 2022年第2期56卷 165-169页

作者：谢丽君刘新秀李海英魏巍丽周彦甘玲福建医科大学附属第一医院超声影像科福州350005 深圳大学数学与统计学院深圳518060

目的探讨子宫内膜间质肉瘤(ESS)的临床及超声表现。方法回顾性纳入2013年1月—2020年12月27例经病理证实为ESS的患者的临床和超声影像资料,以60例子宫肌瘤(UF)患者为对照组,分析两组患者的临床及超声特征。结果单因素分析显示:ESS组和U... 详细信息

目的探讨子宫内膜间质肉瘤(ESS)的临床及超声表现。方法回顾性纳入2013年1月—2020年12月27例经病理证实为ESS的患者的临床和超声影像资料,以60例子宫肌瘤(UF)患者为对照组,分析两组患者的临床及超声特征。结果单因素分析显示:ESS组和UF组患者的年龄分别为(48.5±9.9)岁和(41.1±9.5)岁,绝经率分别为48.1%和20.0%,异常阴道出血率分别为59.3%和13.3%;超声表现上,ESS组和UF组患者的瘤体最大径分别为(8.04±4.56)cm和(4.91±1.83)cm,边界不清概率分别为61.5%和12.2%,囊实性回声概率分别为44.4%和15.0%,血流分级Ⅱ~Ⅲ级分别占77.8%和30.0%,血流阻力指数(RI)分别为(0.46±0.09)和(0.61±0.05),以上差别均有统计学意义(P<0.05)。logistic多因素分析结果提示,年龄(OR=1.194)、阴道出血(OR=20.262)为ESS的危险因素(P<0.05),RI(OR=0.000)为ESS的保护因素(P<0.05)。受试者工作特征曲线分析结果提示,年龄、阴道出血、RI三者联合检查可鉴别ESS和UF。结论ESS临床易被误诊,恶性程度较高,充分认识其临床表现和超声特征,有助于提高鉴别诊断能力。

关键词：子宫内膜间质肉瘤彩色多普勒超声血流阻力指数子宫肌瘤

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猪生殖—呼吸道综合征病毒(PRRSV)E蛋白基因真核表达质粒的构建

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生物技术 1999年第2期9卷 1-3页

作者：仇华吉童光志周彦光郭宝清王柳张绍杰王玫刘宝全哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室内蒙古农牧学院东北农业大学

新近发现的ＰＲＲＳＶ是单股ＲＮＡ病毒，属于不久前成立的动脉炎病毒科。其基因组包括８个开放阅读框架（ＯＲＦ），其中ＯＲＦ５编码糖基化的囊膜（Ｅ）蛋白，是病毒的主要免疫保护性抗原之一。为了研制ＰＲＲＳ基因疫苗，扩增并克隆... 详细信息

新近发现的ＰＲＲＳＶ是单股ＲＮＡ病毒，属于不久前成立的动脉炎病毒科。其基因组包括８个开放阅读框架（ＯＲＦ），其中ＯＲＦ５编码糖基化的囊膜（Ｅ）蛋白，是病毒的主要免疫保护性抗原之一。为了研制ＰＲＲＳ基因疫苗，扩增并克隆了ＰＲＲＳＶ－１ａ株ＯＲＦ５，并将其亚克隆至真核表达载体ｐＣＲ３－Ｕｎｉ的ＣＭＶ启动子下游，构建成真核表达质粒。

关键词：猪生殖-呼吸道综合征病毒 E蛋白真核表达