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核受体辅活化子的家族新成员——PNRC

生命的化学 2009年第4期29卷 468-471页

作者：王越陈彬胡晨周度金第三军医大学生物化学与分子生物学教研室第三军医大学学员旅8队重庆400038

富含脯氨酸的核受体辅调节蛋白(proline-rich nuclear receptor coregulatory protein,PNRC)是一种普遍存在的核受体辅活化子,它能以配体依赖和非依赖方式与多种核受体相互作用并增强它们介导的转录激活。此外,它还能与Grb2和RNApol Ⅲ... 详细信息

富含脯氨酸的核受体辅调节蛋白(proline-rich nuclear receptor coregulatory protein,PNRC)是一种普遍存在的核受体辅活化子,它能以配体依赖和非依赖方式与多种核受体相互作用并增强它们介导的转录激活。此外,它还能与Grb2和RNApol Ⅲ的RPC39亚基相互作用,参与生长因子/Ras信号通路和RNApol Ⅲ转录的调节。其在乳腺癌和癌旁正常组织中的表达差异使其有望成为治疗乳腺癌的新靶点。

关键词： PNRC 核受体辅活化子

核受体辅活化子PNRC与孤儿核受体SF1相互作用位点的鉴定

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中国生物化学与分子生物学报 2002年第1期18卷 38-43页

作者：陈彬陈敏陈健李渝萍周度金第三军医大学生物化学与分子生物学教研室重庆400038

为了阐明核受体辅活化子 (proline richnuclearreceptorcoactivatorprotein ,PNRC)在孤儿核受体类固醇生成因子 1(steroidogenicfactor1,SF1)基因表达调控中的作用 ,采用酵母双杂合分析、缺失突变技术和瞬时转染等研究方法鉴定了PNRC与... 详细信息

为了阐明核受体辅活化子 (proline richnuclearreceptorcoactivatorprotein ,PNRC)在孤儿核受体类固醇生成因子 1(steroidogenicfactor1,SF1)基因表达调控中的作用 ,采用酵母双杂合分析、缺失突变技术和瞬时转染等研究方法鉴定了PNRC与SF1的相互作用位点 .结果显示 ,PNRC中氨基酸 2 78～ 30 0区域是与SF1相互作用的位点 .该区域富含脯氨酸 ,其中有 1个SH3结合模体 (motif) ,单独的SH3模体不足以与SF1产生有效的相互作用 .瞬时转染分析表明 ,PNRC 2 70 32 7对野生型PNRC的辅激活功能具有负显性抑制效应 .研究结果表明 ,含SH3结合模体的PNRC 2 78 30

关键词：核受体辅活化子 PNRC 类固醇生成因子1 相互作用位点孤儿核受体SF1

严重烫伤后大鼠心肌与肝组织中钙调蛋白活性变化

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创伤杂志 1989年第1期5卷 27-29页

作者：周度金周长保董燕麟第三军医大学生化教研室

作者利用钙调蛋白对环核苷酸磷酸二酯酶的激活作用,观察了30%体表皮肤全层烫伤后大鼠肝脏与心肌中钙调蛋白活性的变化。结果表明,烫伤后24小时与72小时。心肌和肝组织中钙调蛋白活性均有显著增高,伤后24小时肝组织中钙调蛋白活性较对照... 详细信息

作者利用钙调蛋白对环核苷酸磷酸二酯酶的激活作用,观察了30%体表皮肤全层烫伤后大鼠肝脏与心肌中钙调蛋白活性的变化。结果表明,烫伤后24小时与72小时。心肌和肝组织中钙调蛋白活性均有显著增高,伤后24小时肝组织中钙调蛋白活性较对照组增高15%,72小时后增高13.2%,伤后24小时心肌钙调蛋白活性增高24.2%,72小时增高33.1%,烧伤后钙调蛋白活性的改变可能是烧伤后一系列代谢改变的重要调节因素之一。

关键词：烫伤钙调蛋白心肝肝大鼠

hERR1/HBD酵母表达质粒的构建及初步鉴定

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第三军医大学学报 2003年第1期25卷 51-53页

作者：陈敏李渝萍陈健陈彬周度金第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的　构建酵母双杂合系统诱饵蛋白表达质粒pGBT9 hERR1 HBD。方法　PCR扩增hERR1 HBD(激素激活域 )cDNA ,与酵母Gal4 DBD(DNA结合域 )表达质粒pGBT9重组构建融合蛋白表达质粒 ,酶切、测序鉴定后 ,用于酵母双杂合分析 ,检查其自主转录... 详细信息

目的　构建酵母双杂合系统诱饵蛋白表达质粒pGBT9 hERR1 HBD。方法　PCR扩增hERR1 HBD(激素激活域 )cDNA ,与酵母Gal4 DBD(DNA结合域 )表达质粒pGBT9重组构建融合蛋白表达质粒 ,酶切、测序鉴定后 ,用于酵母双杂合分析 ,检查其自主转录激活作用及与已知hERR1辅活化子PNRC的相互作用。结果　该质粒有正确的阅读框 ,其表达蛋白不具有自主转录激活作用 ,与已知核受体辅活化子PNRC有明显的相互作用。结论　成功构建了表达质粒pGBT9 hERR1 HBD ,并证实该质粒可作为酵母双杂合系统的诱饵蛋白质粒 ,用于乳腺组织中与hERR1有相互作用的蛋白质基因的筛选。

关键词：酵母表达质粒乳腺癌雌激素受体相关受体-1 酵母双杂合系统乳腺肿瘤聚合酶链反应

核受体辅活化子PNRC与孤儿核受体SF1的相互作用有赖于SF1的AF-2功能结构域

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中国生物化学与分子生物学报 2002年第3期18卷 379-383页

作者：陈彬陈敏陈健李渝萍周度金第三军医大学生物化学与分子生物学教研室重庆400038

核受体辅活化子PNRC(proline richnuclearreceptorcoregulatoryprotein ,富含脯氨酸的核受体辅调节蛋白 )可通过含SH3结合模体的PNRC2 78 30 0区域与孤儿核受体类固醇生成因子 1(steroido genicfactor 1,SF1)相互作用 .激活功能 2 (activationfunction 2 ,AF 2 )结构域在核受体配体依赖性转录激活中发挥了重要作用 ,为探讨AF 2结构域在SF1转录激活中的作用机制 ,采用酵母双杂合分析、缺失突变技术和瞬时转染等研究方法考察了AF 2结构域对SF1反式激活功能及SF1与PNRC相互作用的影响 .SF1的反式激活功能有赖于AF 2结构域 ,其机制是SF1AF 2结构域的突变严重影响了SF1与PNRC的有效相互作用 ,并消除了PNRC对SF1反式激活功能的辅激活作用 .结果表明 ,SF1与PNRC的相互作用有赖于AF

关键词：核受体辅活化子PNRC 孤儿核受体SF1 相互作用 AF-2功能结构域

AF-2结构域突变的SF1酵母表达质粒的构建及其与PNRC相互作用分析

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第三军医大学学报 2003年第7期25卷 614-616页

作者：陈彬陈敏李渝萍陈健周度金第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的　探讨激活功能 2 (AF 2 )结构域在孤儿核受体辅活化富含脯氨酸的受体辅调节蛋白 (PNRC)相互作用的意义。方法　采用PCR和DNA重组技术构建了野生型SF1和AF 2结构域突变的SF1的酵母表达质粒pGBT9 SF1/HBDD和pGBT9 SF1/HBD/AF 2del... 详细信息

目的　探讨激活功能 2 (AF 2 )结构域在孤儿核受体辅活化富含脯氨酸的受体辅调节蛋白 (PNRC)相互作用的意义。方法　采用PCR和DNA重组技术构建了野生型SF1和AF 2结构域突变的SF1的酵母表达质粒pGBT9 SF1/HBDD和pGBT9 SF1/HBD/AF 2del并采用酵母双杂合分析比较了它们与PNRC的相互作用强弱。结果　SF1/HBD能与野生型PNRC及其N 末端缺失突变体PNRC2 70 3 2 7,PNRC2 78 3 0 0产生较强的相互作用 ,而AF 2缺失的SF1/HBD不与这些PNRC片段发生相互作用。结论　功能性的AF 2结构域是SF1与PNRC相互作用所必须的。

关键词：类固醇生成因子1 富含脯氨酸的核受体辅调节蛋白辅活化子激活功能-2

视黄醇结合蛋白RBP4可与多种核受体相互作用

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中国生物化学与分子生物学报 2004年第5期20卷 696-701页

作者：陈健陈敏陈彬李渝萍李强周度金第三军医大学生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学附属新桥医院检验科重庆400038

In order to explore the functions of retinol binding protein (RBP4) in regulation of gene expression, yeast two hybrid assay and transient co-transforming were used to detect the interactions between RBP4 and nuclear receptors and the effects of over-expressed RBP4 on trans-activation functions of human estrogen receptor related receptor 1 (hERR1) and human estrogen (hER). The requirement of activation function domain-2 (AF-2) for hER to interact with RBP4 was also detected by the yeast two hybrid assay. The results show that RBP4 could interact with many nuclear receptors including mouse estrogen receptor related receptor 3 (mERR3), retinoid X receptor (RXR), glucocorticoid receptor (GR), progestin receptor (PR), and androgen receptor (AR) in yeast cells. Over-expressed RBP4 could strongly enhance the trans-activation functions of hERR1 and hER in a dose-dependent manner, respectively. RBP4 could also interact with hER in an AF-2-dependent manner.

关键词： RBP ERR 视黄醇结合蛋白 GR PR 2-de AR 核受体相互作用

利用酵母双杂合系统筛选与hERRα1相互作用的蛋白质

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第三军医大学学报 2003年第15期25卷 1352-1354页

作者：李渝萍陈敏陈彬陈健李强周度金第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的　利用酵母双杂合系统筛选乳腺组织中与人雌激素受体相关受体α1(Humanestrogenreceptorrelated receptorα1,hERRα1)相互作用的蛋白质 ,特别是新的核受体辅助活化因子 ,以进一步研究核受体辅助活化因子在乳腺癌发生、发展中如何参... 详细信息

目的　利用酵母双杂合系统筛选乳腺组织中与人雌激素受体相关受体α1(Humanestrogenreceptorrelated receptorα1,hERRα1)相互作用的蛋白质 ,特别是新的核受体辅助活化因子 ,以进一步研究核受体辅助活化因子在乳腺癌发生、发展中如何参与ERR1调控基因的表达。方法　以质粒pGBT9 hERRα1 LBD为“诱饵” ,筛选人乳腺组织cDNA文库。结果　筛得有阳性相互作用的克隆共 17个。除 3种为已知核受体辅助调节因子外 ,其他为功能已经明确的蛋白 ,其中有3种与hERRα1有明显相互作用。结论　核受体辅助活化因子SRC 1,RIP14 0 。

关键词：人雌激素受体相关受体α1 核受体辅助活化因子酵母双杂合系统乳腺癌

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核定位信号及其分析策略

中国生物化学与分子生物学报 2009年第8期25卷 683-689页

作者：赵元茵王元忠曹念周度金李渝萍第三军医大学生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学学员旅三队重庆400038

真核细胞核膜上的核孔复合体(nuclear pore complex,NPC)是细胞核内外进行物质交换的主要通道,分子量较小的化合物可自由通过NPC或采取被动扩散的方式进入细胞核,而分子量为50kD以上的蛋白质则只能通过主动转运进入细胞核.以这种方式进... 详细信息

真核细胞核膜上的核孔复合体(nuclear pore complex,NPC)是细胞核内外进行物质交换的主要通道,分子量较小的化合物可自由通过NPC或采取被动扩散的方式进入细胞核,而分子量为50kD以上的蛋白质则只能通过主动转运进入细胞核.以这种方式进入细胞核的蛋白质必须在其氨基酸序列上拥有特殊的核定位信号(nuclear localization signal,NLS),以被相应的核转运蛋白(karyopherins)识别.核定位信号具有多样性,包括经典核定位信号(classical NLS,cNLS),内输蛋白β2识别的核定位信号(又称PY模体-NLS)和其它类型的NLS.每一类NLS具有相似的特征,但并不具有完全保守的氨基酸组成.不同的NLS,往往对应着各不相同的核输入机制.而对同一蛋白质来说,也可能同时拥有几个功能性的NLS.研究核定位信号一方面可以帮助揭示新的大分子物质核转运机制,另一方面也有助于发现一些蛋白质的新功能.本文对常见NLS的分类进行了总结,并介绍了两种常用的NLS预测软件及鉴定NLS的一般策略.

关键词：核转运机制核定位信号内输蛋白