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作者：周天秀成都中医药大学

学位级别：硕士

目的:应用含补肾中药血清研究补肾方对人胚胎干细胞体外分化为类卵泡结构的研究。方法:以H9人胚胎干细胞为实验对象,诱导H9细胞形成拟胚体(EB),加入含22、23、24、25、26、27#方的含药血清,血清浓度为3%;另以分化诱导因子骨形成蛋白4(BM... 详细信息

目的:应用含补肾中药血清研究补肾方对人胚胎干细胞体外分化为类卵泡结构的研究。方法:以H9人胚胎干细胞为实验对象,诱导H9细胞形成拟胚体(EB),加入含22、23、24、25、26、27#方的含药血清,血清浓度为3%;另以分化诱导因子骨形成蛋白4(BMP4)作为阳性对照,BMP4终浓度为100pg/ml;以不加BMP4的完全培养液作为空白对照。显微镜动态观察H9拟胚体生长和分化的形态学变化;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测EB和分化细胞生殖分化标志基因的表达;采用免疫荧光技术检测生殖细胞分化相关的标志蛋白表达;应用酶联免疫(ELIS)A技术定量测定了分化后期培养液中E2含量。实验产生的数据均使用SPSS19.0统计学软件处理,若同时满足正态分布和方差齐性,则取用x±s表示,运用单因素方法分析和配对T检验进行检测。结果:含补肾中药血清诱导H9拟胚体生长及分化1.1各含药血清组可明显促进EB的生长和诱导EB分化,在诱导分化第3天出现与阳性对照类似的早期分化特征:大量细胞从EB游离,EB逐渐缩小呈不规则形;同时收集EB及游离细胞检测胚胎干细胞分化标志基因Oct-4 mRNA的表达。结果显示:加入含药血清前其Oct-4基因大量表达,加入含药血清培养第3天,各组EBOct-4 mRNA明显下调,表明含补肾中药血清在短期内即启动EB分化。1.2进一步检测了与生殖发育相关的基因表达,各含药血清组对生殖分化相关基因的表达有明显差异,其中23#含药血清在诱导GDF9、ZP1和SCP3的表达均强于BMP4。进一步采用免疫荧光技术检测了 23#含药血清组诱导EB分化第5天GDF9的蛋白表达。与mRNA水平检测结果一致,阴性对照组因具有自发分化特性,GDF9有较弱表达;BMP4和23#含药血清诱导的GDF9表达明显增强,且23#含药血清优于BMP4。2.含补肾中药血清诱导人胚胎干细胞向生殖特异性组织细胞分化2.1含药血清诱导分化5-7天,BMP-4阳性对照组和23、25、26#含药血清组均可观察到一类明显大于其它分化类型的细胞,该类该细胞直径大于50μm,形态酷似类卵细胞。继续延长培养分化时间至7-10天,类卵细胞直径增加,其边缘逐渐形成细小颗粒;诱导分化至11-16天,类卵细胞边缘的颗粒层随时间延长而增厚,胞体直径均大于100μm,某些颗粒层呈现扁平状结构。推定这类被颗粒细胞层包裹的细胞为类卵泡结构(follicle-like structures,FLSs)。为了证实含药血清诱导分化的类卵泡结构,选择23#含药血清诱导分化并持续16天,在显微镜下观察和记录了 FLSs形成的动态变化。综合分析结果显示,含药血清以及BMP4可在5-16天内,诱导H9胚胎干细胞形成至少3种FLSs结构,包括从始基卵泡(primordial follicles)→初级卵泡(primary follicles)→次级卵泡(secondaryfollicles)的发育。2.2补肾中药诱导分化类卵泡形成的分子标志物鉴定2.2.1原始卵泡期的分子标志物分析为了进一步证实类卵泡结构的形成,选择23#含药血清,培养H9细胞3-7天,在原始卵泡形成数量较多时,应用RT-qPCR技术检测原始卵泡形成过程中3种分子标志物表达的动态变化。23#含药血清在诱导分化3、5、7天,均上调GDF9和SCP3的表达,呈现时间依赖性;23#含药血清也诱导VASA表达,但在分化第7天表达下调。GDF9和SCP3表达的时间依赖性与原始卵泡在体外分化发育的时间基本一致;VASA基因在诱导分化第7天表达下调,提示VASA的表达与始基卵泡发育有关。另选择23#含药血清诱导培养第7天的原始卵泡,检测了GDF9的蛋白表达,与基因表达水平一致,在单个类卵泡结构中显示较强的荧光信号。2.2.2生长卵泡期的分子标志物分析另收集培养7-16天的分化细胞,检测了生长卵泡形成期间3种分子标志物表达的动态变化。23#含药血清诱导分化7、9、11天,均上调ZP1、ZP2和ZP3表达,并呈现时间依赖性。对23#含药血清诱导培养第11天的生长卵泡,检测了ZP1的蛋白表达,结果显示在单个生长卵泡结构的颗粒层与卵母细胞之间有较强的荧光信号。2.3补肾中药诱导的卵母细胞发育的形态学特征原始卵泡和生长卵泡期的卵母细胞为初级卵母细胞,具有减数分裂Ⅰ各期特征,为了证实含药血清诱导的初级卵母细胞形成的减数分裂Ⅰ特征,采用免疫荧光技术,应用β-actin染色细胞骨架,Hoechst33258染色减数分裂各期的核结构,以此鉴定被颗粒层包裹的类卵母细胞。结果显示,23#血清诱导分化7-16天的类卵细胞包括有卵原细胞和处于细线期、偶线期、粗线期的初级卵母细胞;在含药血清诱导分化过程中偶见处于双线期的卵母细胞。这从减数分裂前各期的形态学特征进一步证实了补肾中药可诱导类卵泡结构形成。2.4补肾中药诱导分化形成的前颗粒细胞分子标志物及功

关键词：含补肾中药大鼠血清人胚胎干细胞体外分化类卵泡结构

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电针对创伤后应激障碍患者静息态脑功能连接网络的影响

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中国针灸 2015年第5期35卷 469-473页

作者：郑成强谭凌霄周天秀张虹成都中医药大学针灸推拿学院四川成都610075 成都中医药大学临床医学院四川成都610075

目的:探讨电针治疗创伤后应激障碍(PTSD)的中枢调控机制。方法:以14例PTSD患者为研究对象,采用"调神醒脑"针法,即以百会、神庭为主穴,四神聪、风池为配穴进行针灸治疗。针刺得气后连接韩氏穴位神经刺激仪,每次治疗30min,每周3次(隔日1... 详细信息

目的:探讨电针治疗创伤后应激障碍(PTSD)的中枢调控机制。方法:以14例PTSD患者为研究对象,采用"调神醒脑"针法,即以百会、神庭为主穴,四神聪、风池为配穴进行针灸治疗。针刺得气后连接韩氏穴位神经刺激仪,每次治疗30min,每周3次(隔日1次),连续治疗12周。分别于治疗前及治疗12周结束时,对PTSD患者PTSD临床监测量表(clinician administered PTSD scale,CAPS)、焦虑自评量表(self-rating anxiety scale,SAS)、抑郁自评量表(self-rating depression scale,SDS)进行评定;使用Siemens 3.0T磁共振成像系统进行静息态扫描,以双侧海马作为感兴趣区,进行全脑功能连接分析。结果:电针治疗后,患者CAPS、SAS、SDS量表评分均较治疗前下降(均P<0.05);双侧海马与右侧中央后回、左侧顶上小叶存在功能连接增强(2.3

关键词：创伤后应激障碍电针功能磁共振技术功能连接海马

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基于静息态fMRI的电针对创伤后应激障碍患者功能连接网络影响研究

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中华中医药杂志 2016年第8期31卷 3223-3226页

作者：郑成强周天秀张虹成都中医药大学成都610075

目的:探讨电针对创伤后应激障碍(PTSD)患者静息态脑功能连接网络的影响。方法:采用功能磁共振成像技术(f MRI),在电针治疗前后,利用功能连接分析方法分析静息状态下15例PTSD患者以双侧杏仁核为感兴趣区的全脑功能连接情况,并进行PTSD临... 详细信息

目的:探讨电针对创伤后应激障碍(PTSD)患者静息态脑功能连接网络的影响。方法:采用功能磁共振成像技术(f MRI),在电针治疗前后,利用功能连接分析方法分析静息状态下15例PTSD患者以双侧杏仁核为感兴趣区的全脑功能连接情况,并进行PTSD临床监测量表、焦虑自评量表、抑郁自评量表评分。结果:与治疗前相比,电针治疗后PTSD患者双侧杏仁核与全脑功能连接明显增强的脑区为眶回、前额叶,功能连接明显减弱的脑区为丘脑(P20)。结论:电针对PTSD患者临床症状及焦虑抑郁情绪状态有较好的改善作用,其机制可能与电针参与PTSD杏仁核功能连接网络的调节有关。

关键词：创伤后应激障碍电针功能性磁共振成像技术功能连接杏仁核

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大学生手机依赖与视屏时间、睡眠质量及体力活动之间的关系

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中文科技期刊数据库（引文版）医药卫生 2022年第10期 91-95页

作者：秦文婧卢泳冀谢佳丽周天秀费丽萍西南医科大学公共卫生学院卫生检验与检疫教研室四川泸州646000 西南医科大学公共卫生学院流行病与统计学教研室四川泸州646000

分析大学生手机依赖与视屏时间、睡眠质量及体力活动之间的关系。方法采用便利抽样的方式,使用自制问卷对泸州市在校大学生进行线上问卷调查。使用t检验、方差分析进行计量资料组间比较,使用多重线性回归分析手机依赖与视屏时间、睡眠... 详细信息

分析大学生手机依赖与视屏时间、睡眠质量及体力活动之间的关系。方法采用便利抽样的方式,使用自制问卷对泸州市在校大学生进行线上问卷调查。使用t检验、方差分析进行计量资料组间比较,使用多重线性回归分析手机依赖与视屏时间、睡眠质量及体力活动之间的关系。结果大学生手机依赖检出率为26.10%,睡眠障碍检出率为20.30%,低体力活动水平检出率为38.80%;多重线性回归分析结果显示,视屏时间、睡前视屏时间、低体力活动水平、睡眠质量一般、睡眠障碍与手机依赖呈正相关。结论大学生手机依赖率较高,需要引起广泛关注;可通过睡眠情况监测、减少视屏时间和增加体育运动改善手机依赖情况。

关键词：大学生手机依赖视屏时间睡眠质量体力活动

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左归丸含药血清对ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/FasL、IDO在人早孕绒毛膜组织中表达的影响

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时珍国医国药 2015年第5期26卷 1073-1076页

作者：梁丽梅陆华周天秀成都中医药大学临床医学院成都中医药大学第二临床医学院四川成都610041

目的探讨左归丸对体外人早孕绒毛膜组织ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/Fas L和IDO基因表达的影响。方法对体外培养的人早孕绒毛膜组织加入2%、5%或10%的鼠左归丸含药血清培养24-72 h。同时,在组织培养中加入孕酮作为阳性对照而仅有基础... 详细信息

目的探讨左归丸对体外人早孕绒毛膜组织ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/Fas L和IDO基因表达的影响。方法对体外培养的人早孕绒毛膜组织加入2%、5%或10%的鼠左归丸含药血清培养24-72 h。同时,在组织培养中加入孕酮作为阳性对照而仅有基础培养基为空白对照。采用Q-PCR技术检测ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/Fas L和IDO mRNA的表达。采用特异ELISA试剂盒检测定量分析ανβ3和HLA-G的蛋白表达。结果 5%含药血清处理的绒毛膜组织的ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/Fas L、IDO基因表达均显著高于阳性对照组及空白组(P<0.05)。5%含药血清处理的绒毛膜组织的ανβ3蛋白标点及2%含药血清处理的绒毛膜组织的HLA-G蛋白表达明显高于阳性对照组及空白组(P<0.05)。结论左归丸可能具有增加ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/Fas L和IDO基因表达的作用,可能是该中药复方治疗不孕症分子生物学机理之一。

关键词：左归丸绒毛组织 ανβ3 HLA-G HOXA10 FAs/FasL IDO

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围手术期血清甲状腺激素和皮质醇的动态观察

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武汉职工医学院学报 1990年第2期18卷 25-28页

作者：杨军周天秀

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木犀草素诱导人脐带间充质细胞化为神经细胞潜能的研究

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中华中医药杂志 2016年第12期31卷 5175-5177页

作者：周天秀陆华郭丽任志红成都中医药大学成都610037 成都中医药大学第二附属医院成都610041

目的:探讨木犀草素诱导脐带间充质细胞(h UCMSCs)分化为神经细胞的潜能。方法:采用终浓度为10μg/m L中药单体木犀草素及0.5‰DMSO对人h UCMSCs进行诱导。显微镜下观察细胞形态变化,细胞免疫荧光技术检测神经细胞细胞标记物nestin和GFA... 详细信息

目的:探讨木犀草素诱导脐带间充质细胞(h UCMSCs)分化为神经细胞的潜能。方法:采用终浓度为10μg/m L中药单体木犀草素及0.5‰DMSO对人h UCMSCs进行诱导。显微镜下观察细胞形态变化,细胞免疫荧光技术检测神经细胞细胞标记物nestin和GFAP的表达,实时荧光定量PCR测定神经分化相关NSE、nestin、GFAP、MAP2、NEFH 5种基因的表达量变化情况,分析两组数据。结果:木犀草素诱导人h UCMSCs第6天,显微镜下发现胞核增大,细胞呈分叉状改变,细胞伸出较多细长的突起,呈现出神经细胞形态样改变;细胞免疫荧光技术检测显示,实验组大部分细胞神经标记物nestin、GFAP表达阳性,平均荧光分别强度为2.64、4.72,对照组仅有少量细胞nestin、GFAP表达阳性,平均荧光强度分别为0.24、0.46;实时荧光定量PCR结果显示,木犀草素对nestin、GFAP、MAP2、NEFH m RNA的表达有明显影响(P<0.05),对NSE m RNA的表达影响不明显。结论:木犀草素具有诱导h UCMSCs向神经细胞方向分化的潜能。

关键词：木犀草素脐带间充质细胞神经细胞分化

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资冲颗粒含药血清对ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/FasL、IDO在人早孕绒毛膜组织中表达的影响

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中华中医药杂志 2016年第11期31卷 4523-4526页

作者：梁丽梅陆华吴荔罗刘衡周天秀成都中医药大学临床医学院成都610037 成都中医药大学第二临床医学院成都610041

目的:探讨资冲颗粒对体外人早孕绒毛膜组织ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/Fas L和IDO基因表达的影响。方法:对体外培养的人早孕绒毛膜组织加入2%、5%、10%的鼠资冲颗粒含药血清培养24-72h。同时,在组织培养中加入孕酮作为阳性对照组而仅... 详细信息

目的:探讨资冲颗粒对体外人早孕绒毛膜组织ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/Fas L和IDO基因表达的影响。方法:对体外培养的人早孕绒毛膜组织加入2%、5%、10%的鼠资冲颗粒含药血清培养24-72h。同时,在组织培养中加入孕酮作为阳性对照组而仅有基础培养基为空白组。采用Q-PCR技术检测ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/Fas L和IDO m RNA的表达。采用特异ELISA试剂盒定量检测ανβ3和HLA-G的蛋白表达。结果:10%含药血清处理的绒毛膜组织的ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/Fas L、IDO基因表达均显著高于阳性对照组及空白组(P<0.05)。10%含药血清处理的绒毛膜组织的ανβ3和HLA-G蛋白表达显著高于阳性对照组及空白组(P<0.05)。结论:资冲颗粒具有增加ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/Fas L和IDO基因表达的作用,可能是该中药复方治疗不孕症分子生物学机制之一。

关键词：资冲颗粒人绒毛组织 ανβ3 人类白细胞抗原G 同源框基因A10 FAs/FasL 吲哚胺2,3-二氧化酶

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补肾中药促排卵的研究进展

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云南中医中药杂志 2014年第8期35卷 76-78页

作者：周天秀郑成强任志红成都中医药大学四川成都610075

1 单味中药动物实验研究在单味中药提取物的动物实验中研究中发现,一些补肾中药具有促性激素样功能,能明显改善体内的激素水平,起到改善卵巢功能和促卵泡发育的作用.菟丝子属旋花科植物菟丝子的干燥成熟种子,具有温补肾阳的作用,其主要... 详细信息

1 单味中药动物实验研究在单味中药提取物的动物实验中研究中发现,一些补肾中药具有促性激素样功能,能明显改善体内的激素水平,起到改善卵巢功能和促卵泡发育的作用.菟丝子属旋花科植物菟丝子的干燥成熟种子,具有温补肾阳的作用,其主要有效化学成分为菟丝子黄酮.研究发现菟丝子黄酮对HPO具有广泛的调节作用,对于心理应激大鼠,菟丝子黄酮能下调应激大鼠下丘脑神经递质β-EP,上调腺垂体黄体生成素（LH）水平[1].

关键词：补肾中药促排卵研究进展

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病理性网络使用的相关诊断标准研究现状

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社区医学杂志 2016年第6期14卷 81-83页

作者：袁可竹周天秀文超代宇朱天民成都中医药大学针灸推拿学院四川成都610075

病理性网络使用(pathological Internet use,PIU)表现为病理性过度、不良使用互联网的行为,通常伴随焦虑、抑郁、强迫等精神症状,严重影响患者的工作、家庭和社会生活。目前PIU日益成为社会关注的焦点,但目前对于PIU的诊断还没有统一、... 详细信息

病理性网络使用(pathological Internet use,PIU)表现为病理性过度、不良使用互联网的行为,通常伴随焦虑、抑郁、强迫等精神症状,严重影响患者的工作、家庭和社会生活。目前PIU日益成为社会关注的焦点,但目前对于PIU的诊断还没有统一、确切的标准,现大多采用调查问卷、量表等,然而不一致的诊断标准给研究者们的工作造成了不小的困扰。因此,明确PIU的疾病诊断标准是研究中需要首要解决的问题。本文介绍国内外近年来关于PIU的文献,整理并分析临床常用诊断标准的特点并得出结论,研究表明Young氏量表以及中文网络成瘾量表修订版(Chen Internet addiction scale revision,CIAS-R)诊断条件的准确度经过诸多研究检验,且单一使用某种量表并不合适,多量表、量表与临床相结合方能在降低漏诊率的同时提高诊断准确度。

关键词：病理性网络使用诊断标准网络成瘾

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