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玉米大斑病菌效应因子StSse19基因的克隆、表达模式分析及在原核系统中的表达

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河北农业大学学报 2024年第3期47卷 66-71,104页

作者：杨俊芳尹贵波周启慧刘玉卫巩校东谷守芹河北农业大学生命科学学院/华北作物改良与调控国家重点实验室/河北省农业微生物生物信息利用技术创新中心河北保定071000 河北省湿地保护与绿色发展协同创新中心河北衡水053010

玉米大斑病是由玉米大斑病菌引起的玉米叶部真菌性病害。本课题组前期通过对病菌侵染玉米的转录组分析发现,效应因子StSse19为重要的致病因子,但对其结构及功能尚不清晰。本研究以野生型菌株01-23的cDNA为模版,克隆StSse19并对其结构进... 详细信息

玉米大斑病是由玉米大斑病菌引起的玉米叶部真菌性病害。本课题组前期通过对病菌侵染玉米的转录组分析发现,效应因子StSse19为重要的致病因子,但对其结构及功能尚不清晰。本研究以野生型菌株01-23的cDNA为模版,克隆StSse19并对其结构进行生物信息学预测;结合对病菌侵染玉米的RNA-Seq数据分析明确该基因的表达模式,进而利用qRT-PCR技术证实其表达模式;构建StSse19的融合表达载体pET28a-StSse19,在大肠杆菌BL21(DE3)中以IPTG诱导表达该目的基因,通过SDS-PAGE技术检测其表达情况。结果表明,StSse19的CDS序列由330个核苷酸组成,编码109个氨基酸残基,序列比对发现该蛋白无同源蛋白,表明其为大斑病菌的特异效应蛋白;对StSse19的表达模式分析发现,该基因在侵染玉米24 h的表达量显著提高,72 h表达量下降,推测该基因参与病菌的侵染过程;将StSse19在原核系统中进行表达,SDS-PAGE分析结果显示,该蛋白大小为28 kD,用Ni柱层析法结合Western blot检测显示获得了纯化的目的蛋白。该研究明确了StSse19基因的结构特征及表达模式、获得了StSse19在原核体系中的表达蛋白,为深入揭示其功能及作用机制奠定了基础。

关键词：玉米大斑病菌效应因子 StSse19 原核表达 qRT-PCR

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作业治疗学课程思政案例库的构建方法及应用效果研究

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中国继续医学教育 2024年第2期16卷 130-134页

作者：周雪孙瑞雪周启慧佳木斯大学康复医学院/护理学院作业治疗学教研室黑龙江佳木斯154002 佳木斯大学康复医学院/护理学院临床护理教研室黑龙江佳木斯154002

目的探讨作业治疗学课程思政案例库的构建方法及应用效果。方法选择2020年9月—2021年6月佳木斯大学康复医学院2020级和2021级康复治疗学专业学生144名作为对象,根据不同年级分为对照组和观察组。对照组2020级74名采用常规方法教学,观... 详细信息

目的探讨作业治疗学课程思政案例库的构建方法及应用效果。方法选择2020年9月—2021年6月佳木斯大学康复医学院2020级和2021级康复治疗学专业学生144名作为对象,根据不同年级分为对照组和观察组。对照组2020级74名采用常规方法教学,观察组在对照组基础上,于2021级70名学生教学中应用构建作业治疗学课程思政案例库。2组均完成3个月教学,比较2组教学综合成绩、教学效果及教学满意度。结果教学3个月后,观察组形成性考核[(91.58±6.34)分]、第二课堂成绩(包括临床作业技能操作及期末考试成绩)得分[(90.19±5.96)分]均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组教学3个月后思政素材需求(97.14%)、现有教学思政开展模式(98.57%)、思政相关教学成果(97.14%)、职业道德(95.71%)、行为习惯相关职业素养(98.57%)、专业伦理与科学信仰(97.14%)满意度高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建作业治疗学课程思政案例库并应用于康复治疗学专业学生中,有助于提高学生的综合成绩及教学效果,可获得较高的教学满意度。

关键词：作业治疗学课程思政案例库构建方法综合成绩教学效果教学满意度

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多媒体教学与小学语文课堂的融合

新课程 2022年第24期 120-121页

作者：周启慧甘肃省白银市靖远县乌兰镇纺织希望小学

在新时代，多媒体开始走进小学课堂，各科教师开始尝试应用多媒体技术辅助授课。为保证多媒体在小学语文授课期间的应用质量，本文以此为中心展开探讨，对两者有效融合的价值、策略进行详细介绍。经研究、实践得知，教师在语文授课期间...

在新时代，多媒体开始走进小学课堂，各科教师开始尝试应用多媒体技术辅助授课。为保证多媒体在小学语文授课期间的应用质量，本文以此为中心展开探讨，对两者有效融合的价值、策略进行详细介绍。经研究、实践得知，教师在语文授课期间，采用多媒体教学方式进行授课，将有效调动班级学生的语文学习、探究兴趣，

关键词：

基于价值流图析的PC构件厂生产流程优化研究

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基于价值流图析的PC构件厂生产流程优化研究

作者：周启慧湖北工业大学

学位级别：硕士

装配式建筑具有舒适、施工速度快、安全性能高、产品多样化、成本低、耐用和环保等特点,将会成为未来建筑业发展的趋势。PC构件厂通过规模化生产预制混凝土构件(PC构件),施工现场装配搭建,以节能环保方式“制造”建筑。但由于目前装配... 详细信息

装配式建筑具有舒适、施工速度快、安全性能高、产品多样化、成本低、耐用和环保等特点,将会成为未来建筑业发展的趋势。PC构件厂通过规模化生产预制混凝土构件(PC构件),施工现场装配搭建,以节能环保方式“制造”建筑。但由于目前装配式建筑技术还不成熟,PC构件厂的生产还处于起步阶段,未能实现大批量化生产。本文针对PC构件厂生产线存在的产能未达预期生产能力、生产流程混乱、人员利用率低和生产线平衡率低等问题,提出基于价值流图析技术的精益优化方法。通过对预制外墙生产线监测数据的分析,结合优化方案,得到如下结论:(1)总结价值流图析的技术要点,并结合工厂实际生产情况,明确需要收集的数据,识别出当前生产流程中存在的浪费和不增值环节。这些为PC构件厂生产流程优化研究提供了可靠的数据。(2)在实际生产中流水线只流转了模台,对应的操作人员组织混乱,生产效率低。PC构件厂的产能不仅受到上下游企业的制约,还受到自身的生产条件的影响。要实行精细化管理模式,达到降低生产成本、减少浪费、提高企业竞争力的目的。(3)根据PC构件厂生产现状绘制出预制外墙的现状价值流图,分析当前生产流程中存在的主要问题。利用精益生产方法对现有生产流程进行改进,结合看板管理,并绘制出未来价值流图。(4)通过改进工艺程序、优化生产线布局、提高人员组织效率等措施缩短产品交货周期,减少库存,提高人员利用率、增值时间比和生产线平衡率。为了优化方案的实施,建立了一套相应的制度体系,指出了优化方案的实施关键点,并对优化方案实施后的效果进行了评价考核。本文的研究工作是为了改进工艺流程,提高生产效率,缩短生产周期,提高F厂人员的利用率。对其他PC元件厂实施精益生产有一定的借鉴和指导作用。

关键词： PC构件厂价值流图析精益生产生产流程

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超重型卧式镗车床静压中心架润滑性能研究

超重型卧式镗车床静压中心架润滑性能研究

作者：周启慧哈尔滨理工大学

学位级别：硕士

随着现代化加工工业发展水平的日新月异,人们对机床加工精度及工作效率要求逐步提高,其中静压中心架是超重型加工机床中尤为重要的部件之一。静压中心架的承载性能直接关系到待加工工件的加工精度与加工效率,而由于超重型卧式镗车床待... 详细信息

随着现代化加工工业发展水平的日新月异,人们对机床加工精度及工作效率要求逐步提高,其中静压中心架是超重型加工机床中尤为重要的部件之一。静压中心架的承载性能直接关系到待加工工件的加工精度与加工效率,而由于超重型卧式镗车床待加工件的载荷大,相较于一般工件格外容易造成摩擦失效,因此,预测超重型卧式镗车床静压中心架间隙油膜的承载能力,研究其润滑性能,能够有效的避免摩擦失效的情况发生,提高加工质量与加工精度。本文以超重型卧式镗车床静压中心架为研究对象,先进行理论计算,初步得到在理想状况下甩油量、油膜温升等数值,之后使用UG软件建立缝隙油膜、待加工件轴及中间支承块的三维模型,采用数值仿真软件ANSYS ICEM CFD对油膜模型进行网格绘制,将划分好网格的油膜模型导入ANSYSCFX进行边界条件设置及迭代求解,得到等粘度与变粘度两种工况时不同转速下油膜温升状况,压力场分布,液压油流场等相关数据,总结出转速对静压中心架润滑性能的影响。同时运用ANSYS Workbench软件进行热力耦合分析,将计算出不同工况下的温度场及压力场施加在中间托瓦及待加工件上,仿真出中间托瓦及待加工件的变形情况,本文的待加工件以轴为例。根据仿真结果综合分析,预测出实际工况下油膜的变形情况,对干摩擦或摩擦失效的情况加以避免,为后续油膜润滑机理研究提供可行性参考。为了验证理论计算与数值仿真的准确程度,设计了静压中心架润滑性能实验。在静压中心架托瓦上布置压力传感器及温度传感器,通过改变转速实测记录下不同工况下油膜的温度及压力变化情况。最终实验采集到的数据与仿真结果趋势相同,验证了数值仿真的准确性,为进一步进行弹流润滑研究奠定了基础。

关键词：静压中心架数值仿真润滑性能转速效应实验验证

玉米大斑病菌丝氨酸蛋白酶基因StSp8的克隆、原核表达及其表达模式分析

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河北农业大学学报 2023年第5期46卷 18-24页

作者：周启慧杨俊芳尹贵波刘玉卫巩校东贾振华谷守芹河北农业大学生命科学学院/华北作物改良与调控国家重点实验室/河北省农业微生物生物信息利用技术创新中心河北保定071000 河北省科学院生物研究所河北石家庄050051

为了探究玉米大斑病菌丝氨酸蛋白酶基因StSp8的结构特征及其功能,本研究以玉米大斑病菌野生型菌株01-23的cDNA为模版,克隆该基因CDS序列并进行生物信息学分析;构建原核表达载体pET30a-StSp8,在大肠杆菌BL21(DE3)中以IPTG诱导表达目的基... 详细信息

为了探究玉米大斑病菌丝氨酸蛋白酶基因StSp8的结构特征及其功能,本研究以玉米大斑病菌野生型菌株01-23的cDNA为模版,克隆该基因CDS序列并进行生物信息学分析;构建原核表达载体pET30a-StSp8,在大肠杆菌BL21(DE3)中以IPTG诱导表达目的基因,通过SDS-PAGE技术检测目的蛋白的表达情况;利用qRT-PCR技术检测StSp8基因在不同发育时期和侵染时期的表达量变化。结果表明,丝氨酸蛋白酶StSp8的CDS序列由1602个核苷酸组成,编码533个氨基酸;其编码蛋白包含信号肽结构域、Inhibitor-I9结构域和Peptidase-S8结构域;SDS-PAGE结果显示该蛋白大小为57.18 kD;表达模式分析发现,该基因在病菌发育的菌丝、分生孢子、芽管、附着胞和侵入钉5个典型的发育时期均有表达,其中芽管时期表达量显著升高;StSp8基因在侵染玉米24 h的表达量最高,72 h表达量下降。该研究不仅明确了StSp8基因的结构特征及在病菌生长发育及侵染寄主过程中的表达模式,也为深入揭示其功能奠定了基础。

关键词：玉米大斑病菌丝氨酸蛋白酶 StSp8 原核表达 qRT-PCR

水泥基材料热-湿-碳化耦合模型数值分析及试验研究

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建筑材料学报 2020年第1期23卷 145-149页

作者：李蓓金南国田野金贤玉周启慧浙江大学建筑工程学院浙江杭州310058 浙江水利水电学院建筑工程学院浙江杭州310018

基于水泥基材料热湿耦合模型和水泥基材料碳化机理,结合水泥水化模型,得了到碳化初始状态下可碳化物质的含量、孔隙率、饱和度等参数,建立了水泥基材料热-湿-碳化耦合模型.该模型通过控制干空气、液态水及气态水的质量守恒关系,气、液... 详细信息

基于水泥基材料热湿耦合模型和水泥基材料碳化机理,结合水泥水化模型,得了到碳化初始状态下可碳化物质的含量、孔隙率、饱和度等参数,建立了水泥基材料热-湿-碳化耦合模型.该模型通过控制干空气、液态水及气态水的质量守恒关系,气、液态相二氧化碳和钙离子质量和能量守恒关系,结合水泥基材料的本构方程,建立了碳化数学模型的控制方程组.运用COMSOL多场耦合软件求解分析,对比验证了不同水灰比、不同碳化龄期下净浆碳化试验结果与数值计算结果,证明该模型是合理可靠的.

关键词：碳化水灰比净浆多场耦合多孔介质

玉米大斑病菌转录因子基因StSwi4的克隆及表达分析

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农业生物技术学报 2022年第6期30卷 1166-1173页

作者：卞哲周启慧刘玉卫巩校东范永山韩建民谷守芹董金皋河北农业大学生命科学学院/河北省植物生理与分子病理学重点实验室/华北作物改良与调控国家重点实验室唐山师范学院生命科学系

在植物病原真菌中，CWI-MAPK (cell wall integrity-mitogen-activated protein kinase)级联途径主要参与调控病菌细胞壁完整性、细胞周期以及致病性等，Swi4是该级联途径下游关键转录因子。在酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中，... 详细信息

在植物病原真菌中，CWI-MAPK (cell wall integrity-mitogen-activated protein kinase)级联途径主要参与调控病菌细胞壁完整性、细胞周期以及致病性等，Swi4是该级联途径下游关键转录因子。在酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中，转录因子ScSwi4作为一种调控表达元件参与细胞壁的生物合成及细胞周期调控，但其同源基因在丝状病原真菌中的功能鲜见报道。玉米大斑病(northern leaf blight of corn)由大斑刚毛座腔菌(Setosphaeria turcica)引起，本研究克隆获得玉米大斑病菌StSwi4基因，对其序列及编码蛋白质进行特征分析，发现其DNA全长为2 247 bp,cDNA全长为2 037 bp，含有3个外显子和2个内含子，编码678个氨基酸；StSwi4蛋白包含1个KilA-N保守结构域和2个ANK保守结构域。对该蛋白的系统进化关系分析发现，玉米大斑病菌与梨黑斑链格孢菌(Alternaria gaisen)、烟草赤星病菌(A. alternate)、番茄匐柄霉菌(Stemphylium solani)的进化关系较近。利用IPTG诱导StSwi4-His融合蛋白表达，利用镍柱亲和层析技术获得其纯化蛋白，SDS-PAGE和Western blot结果表明，该融合蛋白可以在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达。利用qPCR技术分析StSwi4基因在病菌不同发育时期的表达模式，发现该基因在分生孢子时期的表达水平最高。本研究明确了转录因子基因StSwi4的结构特征及表达模式，为深入揭示其在病菌致病过程中的分子机制提供基础资料。

关键词：玉米大斑病菌 StSwi4 基因克隆原核表达

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环形腔多油垫静压推力轴承热变形

吉林大学学报（工学版） 2015年第2期45卷 460-465页

作者：于晓东付旭刘丹周启慧李欢欢王志强哈尔滨理工大学机械动力工程学院哈尔滨150080

高速重载工况下立式车床静压支承摩擦副的热变形对油膜形状有很大影响,会导致油流状态、基本假设和边界条件都发生很大变化,难以用经典润滑理论性能计算公式来精确预测油膜的润滑性能。针对此问题,基于流固耦合方法对静压推力轴承工作... 详细信息

高速重载工况下立式车床静压支承摩擦副的热变形对油膜形状有很大影响,会导致油流状态、基本假设和边界条件都发生很大变化,难以用经典润滑理论性能计算公式来精确预测油膜的润滑性能。针对此问题,基于流固耦合方法对静压推力轴承工作台和底座的热变形进行了模拟仿真,揭示其变形分布规律。研究了环形腔多油垫静压推力轴承热变形与转速的关系,获得了考虑热变形影响的油膜润滑性能预测模型,并进行了验证试验,仿真结果与试验数据基本一致。本文所得结论可为静压推力轴承散热结构的设计、润滑和解决变形问题提供理论依据。

关键词：仪器仪表技术热变形场环形腔多油垫静压推力轴承