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近缘新对虾PP2A-B55基因的克隆及表达分析

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海洋渔业 2023年

作者：张艳周发林李运东姜松黄建华杨丽诗陈旭江世贵杨其彬中国水产科学研究院南海水产研究所农业农村部南海渔业资源开发利用重点实验室上海海洋大学水产与生命学院

为了解蛋白磷酸酶2A（protein phosphatase 2A，PP2A）在生物体细胞周期调控过程中的作用，本文采用RACE技术克隆了近缘新对虾（Metapenaeus affinis）PP2A-B55基因，并使用qRT-PCR初步探究其在卵巢发育过程的作用。通过RACE扩增得到了M... 详细信息

为了解蛋白磷酸酶2A（protein phosphatase 2A，PP2A）在生物体细胞周期调控过程中的作用，本文采用RACE技术克隆了近缘新对虾（Metapenaeus affinis）PP2A-B55基因，并使用qRT-PCR初步探究其在卵巢发育过程的作用。通过RACE扩增得到了MaPP2A-B55基因的cDNA序列全长，共2 100 bp，其中ORF为1 332 bp，编码443个氨基酸，预测分子量为51.229 kDa，理论等电点为6.04。多重比对表明MaPP2A-B55与凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）和斑节对虾（Penaeus monodon）的PP2A-B55的氨基酸序列一致性最高，系统进化树显示与凡纳滨对虾、斑节对虾和日本囊对虾（Marsupenaeus japonicus）具有较近的亲缘关系。定量结果表明MaPP2A-B55在肌肉和卵巢显著表达，同时在卵巢发育过程中的表达量存在显著差异，在幼体发育时期的受精卵阶段呈高表达，然后下降，在无节幼体Ⅵ期降到最低点，溞状幼体Ⅰ期开始上升之后表达平稳。研究结果显示PP2A-B55可能参与了近缘新对虾的卵巢成熟与幼体发育过程。

关键词：近缘新对虾 PP2A-B55 克隆表达卵巢发育幼体发育

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湖北省2002年度煤矿安全情况分析

煤矿安全 2003年第11期34卷 68-70页

作者：周发林湖北省黄石矿务局湖北黄石435000

对湖北省2002年度煤矿安全情况进行了总结分析,指出了除生产条件因素外,重生产、轻安全、地方保护主义等因素是事故多发的重要原因;提出了改变现状的办法。

关键词：煤矿事故原因分析办法

斑节对虾PP2C基因的克隆及其在急性低盐和氨氮胁迫下表达模式的相关研究

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南方水产科学 2022年第3期18卷 76-85页

作者：司梦茹李运东杨其彬姜松杨丽诗黄建华江世贵周发林上海海洋大学水产与生命学院 201306 中国水产科学研究院南海水产研究所/农业农村部南海渔业资源开发利用重点实验室广东广州510300 中国水产科学研究院南海水产研究所热带水产研究开发中心海南三亚572018

PP2C家族蛋白(Protein phosphatase 2C family protein)是一类在抗逆过程中具有重要作用的蛋白磷酸酶,但其在甲壳动物中研究较少。通过RACE(Rapid amplification of cDNA ends)方法克隆并获得了斑节对虾(Penaeus monodon)具有c型结构域... 详细信息

PP2C家族蛋白(Protein phosphatase 2C family protein)是一类在抗逆过程中具有重要作用的蛋白磷酸酶,但其在甲壳动物中研究较少。通过RACE(Rapid amplification of cDNA ends)方法克隆并获得了斑节对虾(Penaeus monodon)具有c型结构域的蛋白磷酸酶2C的cDNA全长(PmPP2C)。该基因cDNA开放阅读框(ORF)全长2079 bp,可编码692个氨基酸。实时荧光定量结果显示,PmPP2C基因在所有检测的组织中均有表达,在肝胰腺和鳃组织中的表达量最高,其次是胸神经、精巢、肌肉等组织。96 h急性低盐胁迫过程中,肝胰腺和鳃组织PmPP2C表达量先下调后上调。96 h急性氨氮胁迫中肝胰腺和鳃组织PmPP2C表达量整体呈下调-上调-下调趋势。结果表明,PmPP2C基因可能参与了斑节对虾急性低盐和氨氮胁迫响应过程,表明其可能在斑节对虾抗环境胁迫的免疫防御过程中发挥重要作用。

关键词：斑节对虾 PmPP2C 分子克隆低盐氨氮

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长江口深水航道边缘水域浅点控制标准研究

水运工程 2012年第8期 107-112页

作者：周发林交通运输部长江口航道管理局上海200003

长江口水文泥沙条件复杂、河势多变,深水航道回淤时空分布规律复杂,航道边缘水域出现浅点难以避免。分析长江口10.0 m航道维护期及12.5 m航道试通航期的航道边缘水域浅点分布情况,初步研究航道边缘水域浅点率的影响因素,提出的长江口深... 详细信息

长江口水文泥沙条件复杂、河势多变,深水航道回淤时空分布规律复杂,航道边缘水域出现浅点难以避免。分析长江口10.0 m航道维护期及12.5 m航道试通航期的航道边缘水域浅点分布情况,初步研究航道边缘水域浅点率的影响因素,提出的长江口深水航道边缘水域浅点控制的建议标准得到采纳,取得良好的应用效果。

关键词：长江口航道浅点标准

6种笛鲷属鱼类线粒体16SrRNA基因片段的序列比较

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中国水产科学 2004年第2期11卷 99-103页

作者：周发林江世贵苏天凤吕俊霖中国水产科学研究院南海水产研究所中国水产科学研究院南海水产研究所广东广州510300

对笛鲷属(Lutjanus)的紫红笛鲷(Lutjanusargentimaculatus)、白星笛鲷(Lutjanusstellatus)、千年笛鲷(Lutjanussebae)、勒氏笛鲷(Lutjanusrussellii)、红鳍笛鲷(Lutjanuserythropterus)线粒体DNA16SrRNA基因片段进行了PCR扩增和测序,得到长度约418bp的序列。结合GenBank中斜带笛鲷(Lutjanusdecussatus)该区段的16SrRNA序列,用Clustal＿X排序软件进行16SrRNA序列的对位排列。通过Mega2.1软件对所得线粒体16SrRNA片段序列进行比较,共检测53个碱基存在变异,其中包括21个简约信息位点,并用"Pairwisedistance"计算了各属间的相对遗传距离,结果表明,其序列差异(转换+颠换)在0.027～0.083,其中勒氏笛鲷与斜带笛鲷的序列差异最小,红鳍笛鲷与勒氏笛鲷的序列差异最大。以高体四长棘鲷(Argyropsspinifer)为外类群,采用Mega2.1软件中的"Neighbore-Joining"法得到唯一1个分子系统树,系统树各分支的置信度由"Bootstrap"1000循环检验。结果表明,6种笛鲷鱼类聚成明显的3个分支,第1个分支,包括勒氏笛鲷、斜带笛鲷和白星笛鲷;第2个分支,包括紫红笛鲷;第3个分支,包括红鳍笛鲷和千年笛鲷。

关键词：笛鲷属线粒体DNA 16SrRNA 序列比较

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河口整治工程中施工程序的重要性

水运工程 2009年第3期 155-160页

作者：范期锦周发林交通部长江口航道管理局上海200003

以长江口南北港分汊口护滩限流工程为例,分析了在河口整治工程中科学安排施工程序的必要性;介绍了该工程施工程序的研究成果、具体做法和初步效果,表明科学、合理的施工程序对贯彻整治意图、确保河势稳定、实现整治效果和控制工程投资... 详细信息

以长江口南北港分汊口护滩限流工程为例,分析了在河口整治工程中科学安排施工程序的必要性;介绍了该工程施工程序的研究成果、具体做法和初步效果,表明科学、合理的施工程序对贯彻整治意图、确保河势稳定、实现整治效果和控制工程投资具有重要作用。

关键词：长江口南北港分汊口整治工程施工程序

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河口整治工程中施工程序的重要性

水运工程 2011年第1期 109-115页

作者：范期锦周发林交通部长江口航道管理局上海200003

关键词：长江口南北港分汊口整治工程施工程序

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近缘新对虾PCNA基因的克隆及表达分析

南方水产科学 2023年第4期19卷 58-67页

作者：张艳罗志平李运东杨其彬姜松陈创华黄建华杨丽诗陈旭江世贵周发林中国水产科学研究院南海水产研究所/农业农村部南海渔业资源开发利用重点实验室广东广州510300 珠海市现代农业发展中心广东珠海519075

增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen, PCNA)作为DNA聚合酶δ的辅助蛋白,在DNA复制过程中发挥重要作用。近缘新对虾(Metapenaeus affinis)卵巢发育过程中存在细胞增殖活动旺盛的阶段,但目前关于其卵巢发育的分子机制研... 详细信息

增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen, PCNA)作为DNA聚合酶δ的辅助蛋白,在DNA复制过程中发挥重要作用。近缘新对虾(Metapenaeus affinis)卵巢发育过程中存在细胞增殖活动旺盛的阶段,但目前关于其卵巢发育的分子机制研究较少。利用RACE (Rapid amplification of cDNA ends)技术获得近缘新对虾PCNA (MaPCNA)基因的cDNA序列全长,并通过实时荧光定量PCR (qRT-PCR)对其进行卵巢发育相关的表达分析。MaPCNA全长为1 144 bp,包含140 bp的5’非编码区,221 bp的3’非编码区,开放阅读框(ORF)为783 bp,编码260个氨基酸。MaPCNA蛋白的相对分子质量为28.82 kD,理论等电点为4.5。多重比对分析表明,PCNA氨基酸序列在甲壳动物中较为保守。组织表达结果显示,MaPCNA基因在检测的组织中均有表达,其中在卵巢中的表达量最为显著(P<0.05)。在不同发育阶段的卵巢中,MaPCNA基因的表达出现变化(P<0.05),从Ⅰ期开始逐渐上升,到Ⅲ期表达量最高,之后显著降低并趋于平稳。MaPCNA基因在幼体发育不同时期的表达呈现出一定的规律性趋势,在受精卵时期的表达量最高,之后呈下降趋势,从无节幼体Ⅵ期开始表达平稳。研究结果提示PCNA基因可能在近缘新对虾的卵巢发育过程中发挥重要作用。

关键词：近缘新对虾 PCNA 克隆基因表达

6种笛鲷属鱼类Cyt b基因片段序列的比较

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热带海洋学报 2004年第4期23卷 87-92页

作者：周发林江世贵苏天凤吕俊霖中国水产科学研究院南海水产研究所广东广州510300

采用聚合酶链式反应直接测序法,获得紫红笛鲷(Lutjanusargentimaculatus)、白星笛鲷(L.stellatus)、千年笛鲷(L.sebae)、勒氏笛鲷(L.russelli)、红鳍笛鲷(L.erythropterus)5种笛鲷属鱼的线粒体细胞色素b(Cytb)425bp序列,并结合基因库中的斜带笛鲷(L.decussatus)Cytb同源序列进行比较分析,共发现88个核苷酸位点存在变异(20.7%)。用MEGA2.1软件中的Pairwisedistance工具计算了6种笛鲷属鱼类的相对遗传距离,表明6种笛鲷属鱼类的序列差异在0.096—0.129之间,其中红鳍笛鲷和紫红笛鲷序列差异最大为0.129,千年笛鲷与红鳍笛鲷的序列差异最小为0.096;序列变异的转换/颠换比值较低,平均只有2.160。

关键词：笛鲷属(Lutjanus) 细胞色素b 序列比较:遗传距离