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作者：周利润中国中医科学院

学位级别：硕士

长久以来,多重耐药菌感染所致慢性阻塞性肺疾病的急性发作(AECOPD)是造成临床患者死亡的主要原因,目前由于抗生素的滥用以及糖皮质激素药物敏感性的降低,西药常规治疗AECOPD患者的临床疗效不尽理想,而有关多重耐药菌感染所致慢性阻塞性... 详细信息

长久以来,多重耐药菌感染所致慢性阻塞性肺疾病的急性发作(AECOPD)是造成临床患者死亡的主要原因,目前由于抗生素的滥用以及糖皮质激素药物敏感性的降低,西药常规治疗AECOPD患者的临床疗效不尽理想,而有关多重耐药菌感染所致慢性阻塞性肺疾病急性发作期的动物模型还不成熟,所以建立可控的AECOPD动物模型以及开发新的中药和中西药联用治疗AECOPD具有重要意义。实验目的本实验采用香烟烟熏联合气管滴注焦油建立大鼠慢性阻塞性肺疾病动物模型,并在慢性阻塞性肺疾病动物模型的基础上进行气管滴注多重耐药铜绿假单胞菌建立多重耐药菌感染所致慢性阻塞性肺疾病急性发作期动物模型,研究AECOPD大鼠模型中肺功能、血氧饱和度、免疫功能、病理变化、炎性因子及相关炎性变化等。并进一步探讨疏风解毒胶囊对多重耐药铜绿假单胞菌感染所致慢性阻塞性肺疾病急性发作期的治疗作用以及相关治疗作用机制。实验方法1.慢性阻塞性肺疾病大鼠模型的建立首先建立慢性阻塞性肺疾病(COPD)动物模型,明确烟熏时间、烟熏条件、香烟数量、焦油滴注时间、焦油滴注量等,在COPD动物模型的建立过程中,对2个大鼠品系(SD、Wistar)三种不同体重规格(50-70g、130-150g、180-200g)大鼠进行研究。通过香烟烟熏联合气管滴注香烟焦油建立慢性阻塞性肺疾病动物模型,选择最优品系以及体重规格建立COPD模型。通过肺功能、血气分析检测鉴定COPD模型是否成功。2.多重耐药铜绿假单胞菌诱导COPD大鼠急性发作模型的建立本试验取10只大鼠作为正常对照组,其余大鼠按照试验一造模方法进行造模,模型建立成功后,将COPD模型组大鼠组44只随机分为,COPD模型组、AECOPD模型组各10只用做肺功能血氧饱和度的测定;其余24只随机分为AECOPD感染24h组、AECOPD感染72h组、AECOPD感染120h组、AECOPD感染168h组,每组六只用于肺组织中细菌菌落数、病理变化检测。除正常对照组和COPD模型对照组外,其余五组大鼠在异氟烷轻度麻醉后,以耐药铜绿假单胞菌菌液浓度为6×108cfu/ml的多重耐药铜绿假单胞菌气管滴注感染,每只200μl。感染后,对COPD模型组、AECOPD模型组以及正常对照组每天进行肺功能检测、血氧饱和度检测,观察大鼠COPD合并多重耐药铜绿假单胞菌的急性发作期。AECOPD感染24h组、AECOPD感染72h组、AECOPD感染120h组、AECOPD感染168h组分别于感染后24h、72h、120h、168h腹主动脉取血后解剖,检测以下指标:右肺进行细菌菌落计数、左肺进行肺组织病理学检查。3.疏风解毒胶囊对多重耐药铜绿假单胞菌感染所致AECOPD Wistar大鼠模型治疗作用的研究造模同实验方法2,取70只体重为130-150g Wistar大鼠,随机分为正常对照组、COPD模型组、AECOPD模型组、耐药左氧氟沙星组、敏感阿米卡星组、疏风解毒胶囊高剂量组、疏风解毒胶囊低剂量组。除正常对照组外,其余大鼠按实验方法2进行造模。感染前及感染后第5天进行肺功能检测、血氧饱和度检测;检测完成后腹主动脉取血,进行血常规检测;肺组织通过HE染色对肺组织病理学检测;采用RT-PCR法,检测肺组织中多重耐药铜绿假单胞菌耐药基因的表达量;并通过多因子分析、ELISA法进行肺组织中炎性细胞因子、趋化因子以及细菌标志物含量测定,通过以上方法研究疏风解毒胶囊对多重耐药铜绿假单胞菌感染所致AECOPD大鼠模型的治疗作用。4.疏风解毒胶囊对多重耐药铜绿假单胞菌感染所致AECOPD Wistar大鼠模型的治疗作用机制研究取实验3的大鼠进行腹主动脉采血采用流式细胞术进行T淋巴细胞亚群比例分析;取材后进行马松染色标记肺组织中胶原含量,对大鼠肺组织中胶原沉积量进行定量检测;采用AP-PAS染色法对杯状细胞进行染色,对大鼠肺组织黏液的沉积进行定量检测;采用ELISA法进行肺组织中COL-1、COL-3胶原蛋白含量检测;通过免疫荧光法对肺组织中EGFR、MUC5AC蛋白进行定量检测;采用Western Blot法对肺组织中EGFR、P-EGFR、MUC5AC黏液分泌通路相关蛋白进行定量检测、对肺组织中TGF-β1、Smad2/3、P-Smad2/3肺部纤维化通路相关蛋白进行定量检测;从而对疏风解毒胶囊治疗AECOPD的作用机制进行评价。实验结果1.慢性阻塞性肺疾病动物模型的建立1.1动物的选择本实验共筛选了 2个大鼠品系(SD、Wistar)、3个体重规格(50-70g、130-150g、180-200g),从大鼠一般体征、成模时间、模型稳定性等相关指标进行了评价。其中采用130-150g的Wistar大鼠建立AECOPD大鼠模型成模时间最短且稳定,随着烟熏进行过程中大鼠出现萎靡不振、炸毛、毛色

关键词：多重耐药铜绿假单胞菌慢性阻塞性肺疾病急性加重期 Wistar大鼠模型慢性阻塞性肺疾病疏风解毒胶囊

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慢性阻塞性肺疾病相关动物模型研究进展

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中国实验动物学报 2022年第8期30卷 1121-1127页

作者：周利润崔晓兰中国中医科学院中药研究所北京100700

慢性阻塞性肺疾病急性加重期(acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease,AECOPD)是指在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)的基础上持续恶化,并超出了日常变异范围,目前尚无标准COPD及AECOPD动物模型。AECOPD动物模型是研究AECOPD病理机制及寻找有效诊疗手段的基础。COPD制备方法包括单纯烟熏法、烟熏联合气管滴注脂多糖法、汽车尾气吸入法等。AECOPD制备方法主要是在COPD模型基础上进行细菌病毒感染。该文梳理总结了国内外COPD及AECOPD动物模型的制备方法、评价指标,力争为科研和医务工作者提供有益参考。

关键词：慢性阻塞性肺疾病慢性阻塞性肺疾病急性加重期动物模型建立

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常见呼吸道病毒及抗呼吸道病毒药物研究进展

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中国药物警戒 2023年第2期20卷 225-230页

作者：周利润崔晓兰时宇静中国中医科学院中药研究所北京100700

呼吸道病毒是人类生命健康的一大威胁,具有传染性强、传播速度快、容易发生大规模传播等特点。临床上90%以上的急性上呼吸道感染是由病毒感染引起的,病毒侵入人体首先产生感冒、流涕、咽痛等上呼吸道症状,继而引发支气管炎、肺炎等下呼... 详细信息

呼吸道病毒是人类生命健康的一大威胁,具有传染性强、传播速度快、容易发生大规模传播等特点。临床上90%以上的急性上呼吸道感染是由病毒感染引起的,病毒侵入人体首先产生感冒、流涕、咽痛等上呼吸道症状,继而引发支气管炎、肺炎等下呼吸道症状,严重者可导致死亡。近年来,从SARS、流感病毒H1N1、禽流感到新型冠状病毒,病毒感染周期频发,季节性和大流行性病毒感染是全球发病和死亡的主要原因,给公众带来了巨大的经济损失,虽然接种疫苗能有效预防大流感的发生,但是呼吸道病毒容易发生突变,而疫苗更新速度慢。目前,药物治疗是控制呼吸道病毒传播的主要手段。本文从不同药物角度阐述抗呼吸道病毒所取得的成果,为科学防治呼吸道病毒提供参考。

关键词：呼吸道病毒疾病防控抗流感药物中药西药生物医药

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硫酸化修饰对玄参多糖抗炎活性的影响

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中国现代应用药学 2021年第12期38卷 1431-1435页

作者：高丽娜周利润李曼曼李姿锐贾玲玉王建安济宁医学院药学院山东日照276800

目的比较研究玄参多糖经硫酸化修饰前后其抗炎活性的变化及机制。方法♂ICR小鼠经腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)建立急性炎症反应模型,分别给予玄参多糖和硫酸化玄参多糖进行药物干预,以阿司匹林作为阳性对照,运用Real time R... 详细信息

目的比较研究玄参多糖经硫酸化修饰前后其抗炎活性的变化及机制。方法♂ICR小鼠经腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)建立急性炎症反应模型,分别给予玄参多糖和硫酸化玄参多糖进行药物干预,以阿司匹林作为阳性对照,运用Real time RT-PCR检测肝脏组织白介素-6(interleukin-6,IL-6)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的mRNA表达,运用ELISA检测血清中的IL-6、IL-1β、MCP-1和TNF-α的蛋白表达,运用Western blotting法检测肝脏组织中核因子κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)、phospho-NF-κB的表达水平。结果硫酸化玄参多糖和玄参多糖均可显著抑制LPS诱导的IL-6、IL-1β、MCP-1和TNF-αmRNA和蛋白表达增加,玄参多糖经硫酸化修饰后,其抗炎活性显著增强,其作用机制可能与调控NF-κB信号转导通路活化有关。结论硫酸化修饰可显著提高玄参多糖的抗炎活性,具有更好的应用前景,为玄参的开发应用提供了理论基础。

关键词：玄参多糖硫酸化多糖细胞因子 NF-κB

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寒喘祖帕颗粒对甲型流感病毒H1N1/PR8株感染致小鼠肺炎的作用

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中成药 2024年第9期46卷 3154-3159页

作者：张明惠米尔扎提·麦麦提郝梦赵璐季志红周利润傅紫盈马璇新疆奇沐医药研究院(有限公司) 新疆乌鲁木齐830011 新疆中药(民族药)制药共性关键技术研究重点实验室新疆乌鲁木齐830011 北京协和建昊医药技术开发有限责任公司北京100079

目的探讨寒喘祖帕颗粒对甲型流感病毒H1N1/PR8株感染小鼠肺炎的影响。方法小鼠随机分为正常组、模型组、达菲组(27.5 mg/kg)、连花清瘟颗粒组(3.3 g/kg)和寒喘祖帕低、中、高剂量组(0.38、0.76、1.52 g/kg)。除正常组外,其余组小鼠均采... 详细信息

目的探讨寒喘祖帕颗粒对甲型流感病毒H1N1/PR8株感染小鼠肺炎的影响。方法小鼠随机分为正常组、模型组、达菲组(27.5 mg/kg)、连花清瘟颗粒组(3.3 g/kg)和寒喘祖帕低、中、高剂量组(0.38、0.76、1.52 g/kg)。除正常组外,其余组小鼠均采用甲型流感病毒H1N1/PR8株病毒液经滴鼻感染建立肺炎模型。各组连续给予相应药物4 d,取样。测定小鼠体质量、肺指数及抑制率、流感病毒载量、14 d内小鼠死亡率、生存时间;ELISA法检测肺组织中IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF-α水平,HE染色观察肺组织病理改变并评分。结果寒喘祖帕颗粒中、高剂量组可降低感染后小鼠肺指数,其肺指数抑制率分别为24.01%、32.63%;可降低死亡率,其死亡保护率分别为44.44%、50%。寒喘祖帕低、中、高剂量组均可降低小鼠肺组织中IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ水平,改善小鼠肺部病变,延长平均存活天数,生命延长率分别为17.84%、24.32%、19.46%。结论寒喘祖帕颗粒可改善流感病毒H1N1/PR8株感染致小鼠肺炎症状,可降低死亡率、延长平均存活天数。

关键词：寒喘祖帕颗粒甲型流感病毒H1N1/PR8株肺炎

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Cox A16型手足口病BALB/c乳鼠模型的建立

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中国实验动物学报 2021年第3期29卷 316-322页

作者：徐英莉郭姗姗耿子涵庞博周利润王雅欣崔晓兰时宇静中国中医科学院中药研究所北京100700

目的建立3日龄BALB/c乳鼠Cox A16型手足口病动物模型,并进行免疫、病理学研究。方法3日龄BALB/c乳鼠腹腔注射感染Cox A16型毒株,测定其50%致死剂量(LD50),观察其14 d内存活天数、临床症状打分。采用3LD50病毒攻毒,并观察其14 d内感染程... 详细信息

目的建立3日龄BALB/c乳鼠Cox A16型手足口病动物模型,并进行免疫、病理学研究。方法3日龄BALB/c乳鼠腹腔注射感染Cox A16型毒株,测定其50%致死剂量(LD50),观察其14 d内存活天数、临床症状打分。采用3LD50病毒攻毒,并观察其14 d内感染程度、体重变化、死亡数,计算平均存活天数、死亡率,至感染第6天发病达到高峰时取材,采用CBA法检测血清中MCP-1、MIP-1α、G-CSF含量,采用实时荧光定量RT-PCR法检测后肢肌肉组织、心脏、脑、肠病毒载量,采用HE染色观察后肢肌肉、脑病理病变情况。结果Cox A16毒株感染3日龄BALB/c乳鼠,出现活动减少、后肢麻痹瘫痪、体重减轻、死亡,其病毒毒力为每毫升56 LD50。感染后14 d内,与正常对照组比较,模型组乳鼠生存天数、死亡率、临床感染评分、体重,均具有显著性差异(P<0.01)。感染后6d,血清中MCP-1、G-CSF含量均显著性升高(P<0.01)。后肢肌肉组织、心脏、脑、肠病毒载量较正常组均显著升高(P<0.01),其中后肢肌肉组织病毒载量最高。HE染色病理观察表明,后肢肌肉组织有大面积萎缩、炎症,脑组织神经细胞有不同程度的萎缩。结论成功构建了3日龄BALB/c乳鼠Cox A16型手足口病动物模型,为COX A16型手足口病药物评价及机制研究奠定基础。

关键词：动物模型柯萨奇病毒A16型手足口病 BALB/c乳鼠

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中药防治耐药铜绿假单胞菌肺炎感染机制研究进展

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中国药物警戒 2023年第1期20卷 57-60页

作者：徐英莉庞博曹姗陈梦苹孙静赵荣华张敬升周利润王雅欣崔晓兰中国中医科学院中药研究所北京100029

目的综述中药防治铜绿假单胞菌肺炎感染机制的研究进展,为铜绿假单胞菌肺炎感染防治提供参考。方法查阅国内外文献,从中药调节细菌的耐药环节、调节群体感应系统、调节宿主微环境3方面进行综述。结果与抗生素直接靶向细菌相比,中药... 详细信息

目的综述中药防治铜绿假单胞菌肺炎感染机制的研究进展,为铜绿假单胞菌肺炎感染防治提供参考。方法查阅国内外文献,从中药调节细菌的耐药环节、调节群体感应系统、调节宿主微环境3方面进行综述。结果与抗生素直接靶向细菌相比,中药具有来源广泛、多途径、多靶点等作用特点,且具有副作用小、不易耐药、治疗成本低等优势。中药可以通过抑制灭活酶、调节细菌外排作用、调节群体感应系统、改善宿主屏障作用、调节免疫微环境等环节发挥作用。结论发掘中医药宝库,研究新型的抗耐药菌药物,具有十分重要的意义及良好的前景。

关键词：中药耐药铜绿假单胞菌肺炎宿主微环境群体感应

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基于蛋白质组学探讨雾化吸入BD-77对呼吸道病毒感染的抑制作用及机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第13期30卷 52-59页

作者：包蕾耿子涵郭姗姗周利润赵荣华孙静鲍岩岩李星黄慈钢蒋坤彭飞燕徐洲黄成钢崔晓兰中国中医科学院中药研究所北京100700 贵州百灵企业集团制药股份有限公司贵州安顺561099 中国科学院上海药物研究所上海201203

目的:观察雾化吸入BD-77对多种呼吸道病毒感染动物模型的治疗作用,并利用蛋白质组学手段,探究BD-77广谱抗病毒作用机制。方法:流感病毒H1N1/FM1实验选用ICR小鼠分为正常组、模型组、达菲组、75、37.5 g·L^(-1)均分别吸入20 min组、25 ... 详细信息

目的:观察雾化吸入BD-77对多种呼吸道病毒感染动物模型的治疗作用,并利用蛋白质组学手段,探究BD-77广谱抗病毒作用机制。方法:流感病毒H1N1/FM1实验选用ICR小鼠分为正常组、模型组、达菲组、75、37.5 g·L^(-1)均分别吸入20 min组、25 min组;人冠状病毒229E和人冠状病毒OC43实验选用BALB/c小鼠正常组、模型组、磷酸氯喹组、BD-77的75、37.5、18.75、9.375 g·L^(-1)剂量组,每组10只,分别采用流感病毒H1N1/FM1、人冠状病毒229E和人冠状病毒OC43感染致肺炎模型,检测小鼠肺指数、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肺组织病毒载量、酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测肺组织中相关炎性因子,并对OC43感染小鼠肺组织进行蛋白质组学分析。结果:与正常组比较,各感染组小鼠肺指数显著升高(P<0.01)、人冠状病毒229E和人冠状病毒OC43小鼠肺组织内能检测到病毒核酸,且人冠状病毒229E感染小鼠肺组织中白细胞介素-6(IL-6)、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量均显著升高(P<0.01);BD-77能够明显降低流感病毒H1N1/FM1、人冠状病毒229E和人冠状病毒OC43感染小鼠的肺指数(P<0.05,P<0.01);显著降低人冠状病毒229E和人冠状病毒OC43感染小鼠的肺内病毒载量(P<0.01);显著降低人冠状病毒229E感染小鼠肺组织中IL-6、IL-10、TNF-α的含量(P<0.01)。OC43感染小鼠肺组织蛋白质组学显示,BD-77调节了腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路、TNF信号通路、NOD样(NOD-like)信号通路、IL-17信号通路、叉头框蛋白O(FoxO)信号通路和转化生长因子-β(TGF-β)信号通路等。结论:雾化吸入BD-77能够有效治疗流感病毒H1N1/FM1、人冠状病毒229E和人冠状病毒OC43感染小鼠所致肺炎,并且可能是通过调节细胞代谢平衡、增强宿主免疫功能、减轻炎症反应来发挥抗病毒作用的。

关键词：呼吸道病毒雾化吸入法 BD-77 蛋白质组学肺部炎症

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栀子提取物抑制甲型流感病毒致小鼠病毒性肺炎的抗炎机制研究

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中国药物警戒 2021年第12期18卷 1106-1110,1116页

作者：王雅欣包蕾赵荣华耿子涵鲍岩岩孙静时宇静周利润陈梦苹徐英莉庞博郭姗姗崔晓兰中国中医科学院中药研究所北京100700

目的探索栀子提取物抑制甲型H1N1流感病毒(FM1株)致小鼠病毒性肺炎的抗炎机制。方法在体外实验中研究不同浓度的栀子提取物对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW 267.4分泌一氧化氮(NO)的影响,用2种浓度的LPS分别刺激RAW 267.4细胞24 h,再... 详细信息

目的探索栀子提取物抑制甲型H1N1流感病毒(FM1株)致小鼠病毒性肺炎的抗炎机制。方法在体外实验中研究不同浓度的栀子提取物对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW 267.4分泌一氧化氮(NO)的影响,用2种浓度的LPS分别刺激RAW 267.4细胞24 h,再分别给予相应浓度的栀子提取物,24 h后检测细胞上清液中NO的含量。在体内实验中:除正常组外,其余各组均用甲型H1N1流感病毒(FM1株)感染ICR小鼠肺炎模型,连续给药4 d后眼球取血离心收集血清做流式检测血清炎症因子,解剖后取肺组织做病理切片,观察肺部病变情况。结果在体外实验中,栀子提取物5、2.5、1.25 mg/mL 3个剂量组均可有效降低NO的含量,且与LPS对照组比较具有显著性差异(P<0.01)。在体内实验中,与模型组相比,栀子提取物高、中、低3个剂量组均可使炎症因子白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的含量有不同程度的降低,小鼠肺组织病理学检查表明,与模型组相比,栀子提取物高中剂量组均可明显改善肺部病变情况。结论栀子提取物不仅在体外实验中具有良好的抑炎作用,也可有效抑制甲型H1N1流感病毒(FM1株)所致的小鼠病毒性肺炎。

关键词：栀子提取物甲型流感病毒脂多糖炎症因子小鼠

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金振口服液对人冠状病毒肺炎热毒疫幼龄小鼠模型的干预机制

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中国药物警戒 2023年第3期20卷 248-252,257页

作者：赵荣华孙静包蕾耿子涵李贵平王道涵李舒冉张敬升庞博徐英莉周利润鲍岩岩陈梦苹郭姗姗崔晓兰中国中医科学院中药研究所生物安全实验室北京100700 江苏康缘药业股份有限公司江苏连云港222001 中药制药过程新技术国家重点实验室江苏连云港222001 北京中医药大学东方医院儿科北京100078

目的研究金振口服液对人冠状病毒肺炎热毒疫幼龄小鼠模型的干预作用。方法ICR小鼠,分为空白组,人冠状病毒229E(HCoV-229E)感染组,中医热证组,人冠状病毒肺炎热毒疫小鼠模型组,磷酸氯喹组,连花清瘟组及金振口服液高、中、低剂量组(30、15... 详细信息

目的研究金振口服液对人冠状病毒肺炎热毒疫幼龄小鼠模型的干预作用。方法ICR小鼠,分为空白组,人冠状病毒229E(HCoV-229E)感染组,中医热证组,人冠状病毒肺炎热毒疫小鼠模型组,磷酸氯喹组,连花清瘟组及金振口服液高、中、低剂量组(30、15和7.5 mL·kg^(-1)·d^(-1),相当于生药8、4和2 g·kg^(-1)·d^(-1)),每组10只,采用热湿环境复合HCoV-229E感染造模及给药。观察小鼠的肺指数和抑制率,肺组织核酸,ELISA法检测小鼠肺组织因子IL-1β、MDA及下丘脑因子PGE2、CAMP,流式细胞术检测小鼠外周血免疫细胞比例。结果金振口服液中剂量组可显著降低模型小鼠肺指数(P<0.01),肺指数抑制率为43.93%;金振口服液高、中剂量组可显著降低模型小鼠肺组织病毒载量、IL-1β含量(P<0.05,P<0.01)、中剂量组可显著降低模型小鼠MDA水平(P<0.01);金振口服液3个剂量组可显著降低模型小鼠下丘脑中PGE2、CAMP的生成(P<0.05,P<0.01);对外周血免疫细胞百分比无显著影响。结论金振口服液可明显改善人冠状病毒肺炎热毒疫幼龄小鼠的免疫功能,表现为通过抑制肺组织中炎性细胞因子表达而缓解肺部炎性损伤,可显著降低模型小鼠肺指数和病毒载量,同时可下调体温调节中枢因子的表达,对模型小鼠的肺部炎症起到干预作用。

关键词：金振口服液人冠状病毒肺炎热毒疫幼龄小鼠炎性因子免疫调节肺指数肺指数抑制率

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