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CRISPR/Cas9系统介导水稻谷蛋白基因定点突变研究

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CRISPR/Cas9系统介导水稻谷蛋白基因定点突变研究

作者：周优上海师范大学

学位级别：硕士

水稻(Oryza sativa L.)是基因组研究的模式粮食植物。培育功能性专用品种日渐成为水稻育种的重要目标。利用CRISPR/Cas9技术对水稻谷蛋白基因进行编辑,可大大缩短育种时间,提高育种效率。本研究利用CRISPR/Cas9技术针对水稻谷蛋白基因... 详细信息

水稻(Oryza sativa L.)是基因组研究的模式粮食植物。培育功能性专用品种日渐成为水稻育种的重要目标。利用CRISPR/Cas9技术对水稻谷蛋白基因进行编辑,可大大缩短育种时间,提高育种效率。本研究利用CRISPR/Cas9技术针对水稻谷蛋白基因进行定点编辑,得出以下结论:1.利用CRISPR/Cas9技术能够成功的对水稻3个谷蛋白基因(LOCs01g55690(GluA1),LOCs03g31360(GluA3),LOCs02g16830(GluB4))进行基因组定点编辑。2.研究得到以下结果:LOCs01g55690(GluA1)得到2种类型的纯合突变体:(1)1个碱基T的插入;(2)6个碱基(GCTTCG)缺失,1个碱基的替换(A→C)。LOCs03g31360(GluA3)共得到5种突变类型:(1):缺失32bp(TTGCTACAACATCGTCAGGAAGTGCGCGGAAG),插入8bp(ATGCATTT);(2):缺失27bp(GCGCGGAAGATGGAATTCTTTCCTGCC),插入9bp(CCGCGCACT);(3):缺失21bp(AGGAAGTGCGCGGAAGATGGA);(4):缺失4bp(AGAT);(5):缺失45bp(GAAGATGGAATTCTTTCCTGCCATGTGGCTAACCATGGAGTCAGG),插入59bp(TCTTCATATGTGGCTAACCATGGAGTCAGGGTTGGTTTTCAATGTCAACATGATCACAA)。LOCs02g16830(GluB4)得到1种纯合体突变类型:插入一个碱基T。3.对得到的8种纯合突变体进行了转录水平的表达量分析:发现我们得到的8种突变体材料大部分在RNA表达水平上都表现出异于野生型粳稻品种—嘉花1号。***-PAGE分析表明8种突变体材料的谷蛋白在蛋白表达水平上并没有转录表达水平的变化那么明显,与野生型相比差异不大。5.对8种突变体材料的农艺性状调查,发现其穗数、每穗粒数、结实率以及单株产量与野生型都存在有显著差异。本研究利用CRISPR/Cas9技术成功的对水稻谷蛋白基因进行了定点编辑,为运用CRISPR/Cas9技术对水稻蛋白质品质改善提供了理论指导。

关键词： CRISPR/Cas9 水稻谷蛋白基因基因组编辑突变体

抓住重点　形成特色　开创学校精神文明建设新局面

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高教探索 1997年第1期 11-13,20页

作者：陈优生惠州大学广东惠州516015

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药用辅料供高职高专使用

丛书名：全国医药职业教育医药学类规划教材

2009年

作者：陈优生

本教材的编写力求把握“必需”、“够用”的原则及科学性、先进性、适用性、实用性和创新性的原则。坚持以职业活动为导向，以职业技能为核心。根据高等职业技术教育培养应用型专门人才对药物制剂辅料的需要构建教材体系，组建教材内容... 详细信息

ISBN: (纸本)9787506742849

本教材的编写力求把握“必需”、“够用”的原则及科学性、先进性、适用性、实用性和创新性的原则。坚持以职业活动为导向，以职业技能为核心。根据高等职业技术教育培养应用型专门人才对药物制剂辅料的需要构建教材体系，组建教材内容。强调精要、简明、实用，写出职教特色。教材在编写内容上是以药物制剂辅料的用途为分章节点对辅料的用途、选用原则、常用品种进行讲述。各专业使用本教材时，可根据自身专业特点，教学计划及教学要求选择讲授内容，使学生在有限的教学时间内掌握本课程的基本理论知识和基本操作技术。

关键词：制药辅料医药高等学校:技术学校教材

来源：汇雅图书（南通市图书馆... 评论

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基于“社会性设计”的产品创新设计分析

包装工程 2013年第18期34卷 99-101页

作者：尧优生仲恺农业工程学院广州510225

从"社会"与"设计"的概念出发,论述了设计与社会的辩证关系,指出了"社会性设计"的具体内涵和本质特征。通过2个优秀的设计案例进一步证明了"社会性设计"的核心内涵:一是以用户为中心的设计满足特定用户的需求;二是挖掘"社会性需求"以满... 详细信息

从"社会"与"设计"的概念出发,论述了设计与社会的辩证关系,指出了"社会性设计"的具体内涵和本质特征。通过2个优秀的设计案例进一步证明了"社会性设计"的核心内涵:一是以用户为中心的设计满足特定用户的需求;二是挖掘"社会性需求"以满足资源有效利用、环境保护等真正的社会需求。

关键词：社会性设计以用户为中心的设计环境保护

完善国际税收管理推动国际税收发展——“国际税收管理研讨会”综述

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涉外税务 2009年第8期 5-6页

作者：陈双专周优

在经济封闭的年代里,市场主体和国家的博弈只发生在一国境内,国家对税收的管理也比较简单。随着经济全球化的深入,企业"走出去"与"引进来"速度不断加快。我国与外界的贸易联系愈发频繁,资本和人员的流动也越来越由一国范围延伸到全球范... 详细信息

在经济封闭的年代里,市场主体和国家的博弈只发生在一国境内,国家对税收的管理也比较简单。随着经济全球化的深入,企业"走出去"与"引进来"速度不断加快。我国与外界的贸易联系愈发频繁,资本和人员的流动也越来越由一国范围延伸到全球范围。如何有效加强国际税收管理是亟待研究解决的现实课题。2009年6月26日,由中国税务杂志社主办的"国际税收管理研讨会"在湖南省长沙市召开。来自全国各省、市税务局的20余名从事国际税收管理工作的同志参加了会议。会议中,与会代表各抒己见,对切实提升国际税收管理水平提出了良好的建议。

关键词：国际税收管理税收发展经济全球化综述税收管理工作 “引进来” “走出去” 市场主体

基于价格折扣的短生命周期易变质物品销售策略

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统计与决策 2010年第5期26卷 177-179页

作者：周优军广西大学数学与信息科学学院南宁530004 柳州师范专科高等学校数学与计算机科学系广西柳州545004

文章建立了一类需求率跟销售价格及时间相关的短生命周期易变质物品库存模型,研究了在供应商提供价格折扣条件下,零售商进行一次价格调整时初始及降价后的销售价格策略。目的是优化补货周期使得总利润最大,讨论了模型最优解的存在性,给... 详细信息

文章建立了一类需求率跟销售价格及时间相关的短生命周期易变质物品库存模型,研究了在供应商提供价格折扣条件下,零售商进行一次价格调整时初始及降价后的销售价格策略。目的是优化补货周期使得总利润最大,讨论了模型最优解的存在性,给出了求解最优解的算法和数值例子。

关键词：价格折扣短生命周期变质物品总利润库存模型

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当代大学生网络犯罪及对策研究

当代大学生网络犯罪及对策研究

作者：周优文西南大学

学位级别：硕士

随着网络技术的发展和计算机网路的普及应用,大学生网络犯罪的案件呈上升趋势,日益成为干扰校园秩序、社会安定和社会主义市场经济秩序有序运行的严重问题,越来越得到高校和社会的普遍关注。本文首先对当代大学生网络犯罪的现状及特点... 详细信息

随着网络技术的发展和计算机网路的普及应用,大学生网络犯罪的案件呈上升趋势,日益成为干扰校园秩序、社会安定和社会主义市场经济秩序有序运行的严重问题,越来越得到高校和社会的普遍关注。本文首先对当代大学生网络犯罪的现状及特点进行了分析,然后对大学生网络犯罪的原因进行了调研,最后针对大学生网络犯罪的原因对防范大学生网络犯罪的对策进行了探讨,以预防为主,从技术、管理、教育、法律等多方面对大学生进行教育,培育良好网络道德,以实现对大学生网络犯罪的有效预防,促其健康成长和成才。本文将从四个部分对当代大学生网络犯罪及其防控对策进行研究。第一部分：大学生网络犯罪的现状及特点。笔者通过较为广泛地调查研究对大学生网络犯罪的现状、表现形式及其特点进行了分析。第二部分：大学生网络犯罪的概念、类型及定义。笔者对大学生网络犯罪的概念进行了分析进而从刑法学和犯罪学两方面对大学生网络犯罪进行了分类,从而对大学生网络犯罪给予认定。第三部分：大学生网络犯罪的成因。笔者通过调研,从主观原因、客观原因和社会原因等几方面对大学生网络犯罪的成因进行了分析。第四部分：防范大学生网络犯罪的对策。笔者从网络防范技术、伦理道德教育、法制教育、法律规范等几个方面对防范大学生网络犯罪的对策进行了探讨。

关键词：大学生网络犯罪对策

过表达PGC-1α对MPP+诱导SH-SY5Y细胞线粒体未折叠蛋白反应(mtUPR)的影响

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过表达PGC-1α对MPP+诱导SH-SY5Y细胞线粒体未折叠蛋白反应(mtUPR...

作者：蔡优生福建医科大学

学位级别：硕士

【背景】帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是中老年常见的一种运动障碍疾病,病理变化为黑质多巴胺能神经元退行性变。越来越多的研究表明,线粒体功能障碍如线粒体质量控制、氧化应激、泛素化系统异常等机制,导致PD病理改变。近年来线... 详细信息

【背景】帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是中老年常见的一种运动障碍疾病,病理变化为黑质多巴胺能神经元退行性变。越来越多的研究表明,线粒体功能障碍如线粒体质量控制、氧化应激、泛素化系统异常等机制,导致PD病理改变。近年来线粒体蛋白质量控制(PQC)异常,尤其是早期发生的线粒体未折叠蛋白反应(mtUPR)可能直接或间接地参与了PD发生和发展,而其机制尚不明确。【目的】1.观察不同时间点MPP诱导SH-SY5Y细胞mtUPR的变化。2.探讨PGC-1α过表达对SH-SY5Y细胞mtUPR的影响。3.探讨PGC-1α/LRPPRC信号转导对mtUPR的影响。【方法】1.根据前期摸索的最适腺病毒感染MOI值(100)和MPP工作浓度(1000umol/L)建立PD模型和过表达PGC-1α细胞模型。2.免疫印迹和Real-Time PCR方法检测MPP干预下SH-SY5Y细胞不同时间YME1L1、HSPA9、CLPP、HSPE1的表达水平。3.免疫印迹和Real-Time PCR方法检测各实验组PGC-1α、LRPPRC及蛋白酶YME1L1、CLPP和分子伴侣HSPA9、HSPE1的表达水平。4.荧光共聚焦显微镜观察LRPPRC在不同实验组核内外分布情况。【结果】1.通过免疫印迹和Real-Time PCR检测发现:SH-SY5Y细胞经MPP干预后与其他组相比,在24小时组蛋白酶YME1L1、CLPP及分子伴侣HSPA9、HSPE1蛋白及转录水平达到最高,实现了mtUPR的激活。2.荧光显微镜观察发现:空病毒和过表达PGC-1α腺病毒感染细胞,在MOI值为100时,细胞感染率大于90%,仅较少的细胞死亡,适合细胞感染。3.免疫印迹和Real-Time PCR方法显示:过表达PGC-1α组中,蛋白酶YME1L1、CLPP及分子伴侣HSPA9、HSPE1表达水平和转录水平比空病毒组和空白对照组均有明显的提高,说明了过表达PGC-1α激活了mtUPR,并对SH-SY5Y细胞具有保护作用。4.免疫印迹和Real-Time PCR显示:过表达PGC-1α组中,PGC-1α和LRPPRC蛋白水平和转录水平均有明显的一致性提高;荧光共聚焦结果显示:正常情况下,LRPPRC主要分布在细胞核、线粒体及细胞骨架内;MPP干预后,LRPPRC出现了微量地向细胞核外转移;过表达PGC-1α后,相对于经MPP处理组,LRPPRC在细胞核内有进一步的减少。说明PGC-1α过表达可能通过LRPPRC发挥线粒体保护效应。【结论】1.本实验通过MPP干预SH-SY5Y细胞建立建立帕金森病(PD)细胞模型,并且成功激活线粒体未折叠蛋白反应(mtUPR)。2.在MPP干预后24小时mtUPR蛋白酶YME1L1、CLPP及分子伴侣HSPA9、HSPE1表达水平达到最高,此时mtUPR发挥最大作用。***-1α表达增加,使参与mtUPR蛋白酶YME1L1、CLPP及分子伴侣HSPA9、HSPE1核转录因子增加,提示过表达PGC-1α可能通过激活mtUPR,减少MPP引起的氧化应激损伤。4.过表达PGC-1α后LRPPRC蛋白水平和转录水平均得到了提高,并与mtUPR蛋白酶及分子伴侣表达的趋势基本一致;荧光共聚焦观察发现MPP干预及过表达PGC-1α后,LRPPRC有向核外转移的趋势。我们推测PGC-1α可能通过LRPPRC信号转导激活mtUPR以维持线粒体稳态。

关键词：帕金森病线粒体未折叠蛋白反应 MPP+ PGC-1α LRPPRC

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坚定的信仰不懈的追求 1