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人源化抗体的演进发展及应用现状

人源化抗体的演进发展及应用现状

全国临床免疫检验研讨会暨第六届全国临床免疫学术会议

作者：吴韦霖韩焕兴陆惠琦仲人前第二军医大学长征医院实验诊断科

1975年杂交瘤技术的问世揭开了大规模制备单克隆抗体的序幕,随后又对鼠源性单克隆抗体进行了一系列减低免疫原性的研究,由此而产生了人源化抗体。嵌合抗体(chimericantibody)属于第一代人源化抗体,是应用DNA重组技术将鼠源性的可变区(V...

1975年杂交瘤技术的问世揭开了大规模制备单克隆抗体的序幕,随后又对鼠源性单克隆抗体进行了一系列减低免疫原性的研究,由此而产生了人源化抗体。嵌合抗体(chimericantibody)属于第一代人源化抗体,是应用DNA重组技术将鼠源性的可变区(V区)基因与人抗体的恒定区(C区)基因相连接构成嵌合基因的表达产物。嵌合抗体的人源化程度达到70%左右,在抗原特异性和亲和力方面都较好的保留了亲代抗体的特征,而免疫原性则降至12%。在此基础上,20世纪90年代产生了更为完全的第二代人源化抗体,即CDR移植抗体(CDR-grafted antibody),它将鼠单抗的互补决定区(CDR区)移植到人单抗的骨架上,仅保留了3个CDR是鼠源性的,人源性可达90%以上。90年代以后,噬菌体抗体库技术的产生突出了基因型与表型的统一,将外源基因融合到噬菌体外壳蛋白的基因中,使外源基因的产物表达在噬菌体表面。制备出的抗体具有组织穿透力强、抗原结合活性高、筛选容量大、易于大批量生产等特点。此外,转基因小鼠技术也是制备完全人源性抗体的又一途径,制备出的人抗体具有完备的功能和较高亲和力。

关键词：

氧化型低密度脂蛋白对单核巨噬细胞株U937表达Siglec-1蛋白及分泌细胞因子的影响

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第二军医大学学报 2010年第1期31卷 33-36页

作者：熊怡淞吴韦霖张玲珍周运恒韩志君仲人前第二军医大学长征医院实验诊断科全军医学免疫诊断中心全军临床免疫重点实验室上海200003

目的探讨氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的致动脉粥样硬化(AS)作用是否通过上调单核巨噬细胞表面Siglec-1的表达发挥作用。方法制备ox-LDL并用不同浓度刺激人巨噬细胞株U937,48h后收集细胞和培养上清液,分别用流式细胞仪和RT-PCR检测不同浓... 详细信息

目的探讨氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的致动脉粥样硬化(AS)作用是否通过上调单核巨噬细胞表面Siglec-1的表达发挥作用。方法制备ox-LDL并用不同浓度刺激人巨噬细胞株U937,48h后收集细胞和培养上清液,分别用流式细胞仪和RT-PCR检测不同浓度ox-LDL刺激后Siglec-1蛋白和Siglec-1mRNA的表达水平,并用ELISA试剂盒测定培养上清液中MIP-1α、MCP-1和IL-8的浓度。结果与对照组相比,ox-LDL能刺激U937细胞表面Siglec-1蛋白和Siglec-1mRNA表达升高(P<0.01),培养上清液中MIP-1α、MCP-1和IL-8的表达升高(P<0.01),并呈浓度依赖性。结论ox-LDL的致AS作用可能部分是通过上调单核巨噬细胞表面Siglec-1蛋白表达而活化巨噬细胞,分泌细胞因子和趋化因子诱导更多巨噬细胞和淋巴细胞的活化参与粥样斑块中的炎症反应。

关键词：动脉粥样硬化氧化型低密度脂蛋白 Siglec-1 细胞因子类单核巨噬细胞

利用噬菌体展示技术构建自身免疫性疾病Fab抗体库

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利用噬菌体展示技术构建自身免疫性疾病Fab抗体库

全国临床免疫检验研讨会暨第六届全国临床免疫学术会议

作者：吴韦霖韩焕兴陆惠琦仲人前第二军医大学长征医院实验诊断科

目的分离出高滴度自身免疫性疾病患者的外周血淋巴细胞,以噬菌体为载体,采用基因工程方法,构建新型SLE、RA、强脊、PBC等自身免疫性疾病的噬菌体抗体库。方法从多名确诊的高滴度自身免疫病患者外周血淋巴细胞中抽提总RNA,经逆转录聚合...

目的分离出高滴度自身免疫性疾病患者的外周血淋巴细胞,以噬菌体为载体,采用基因工程方法,构建新型SLE、RA、强脊、PBC等自身免疫性疾病的噬菌体抗体库。方法从多名确诊的高滴度自身免疫病患者外周血淋巴细胞中抽提总RNA,经逆转录聚合酶反应合成cDNA,设计多对引物,聚合酶链反应(PCR)分别扩增免疫球蛋白分子轻链κ、λ基因及重链Fd基因。经SacI和XbaI限制性双酶切后,在T4连接酶的作用下,将轻链基因片段克隆入同样双酶切的pComb3质粒中以构建轻链文库,随后将重链Fd段PCR产物经XhoI和Spe I双酶切后载入同样处理的κ/λ-pComb3载体,形成κ/λ-Fd-pComb3质粒,然后将重组质粒转化大肠杆菌XL1-Blue。用辅助噬菌体M13 K07感染XL1-Blue,则在噬菌体表面即可表达出随机的重组抗体库。提取质粒酶切鉴定轻链库和全库有无插入片段。分别以噬菌体全库和提取的质粒为模板,以轻、重链不同引物组合进行PCR扩增。结果提取的淋巴细胞总RNA及合成的cDNA质量好,PCR扩增了长度为660bp的轻链κ、λ基因及重链Fd基因,成功构建了库容为4×10的轻链抗体库和库容为6×10的Fab片段抗体库,酶切及PCR鉴定均正确无误,经噬菌斑计数测定最终获得了浓度为4×10CFU/ml的富含人源性抗核抗体Fab片段的噬菌体抗体库。结论成功构建了人天然Fab片段噬菌体抗体库,建立了人源抗体制备技术平台,对于进一步探讨自身免疫性疾病的发病机制,寻找新的自身抗原以及建立新的有效的免疫检测方法和指标都打下了良好的基础。

关键词：

氧化型低密度脂蛋白对U937细胞Siglec-1表达及分泌细胞因子的影响

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氧化型低密度脂蛋白对U937细胞Siglec-1表达及分泌细胞因子的影响

中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会

作者：熊怡凇吴韦霖张玲珍周运恒韩志君仲人前第二军医大学长征医院实验诊断科

研究背景动脉粥样硬化(***)是心脑血管疾病的病理基础,其发病机制至今尚未阐明。近年来认为免疫炎症特别是由巨噬细胞介导的天然免疫在AS的发生发展中起重要作用。Siglec-1(sialic acid-binding immunoglobulin-like lectin 1,唾液

关键词：

氧化型低密度脂蛋白对U937细胞Siglec-1表达及分泌细胞因子的影响

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氧化型低密度脂蛋白对U937细胞Siglec-1表达及分泌细胞因子的影响

全国临床免疫检验研讨会暨第六届全国临床免疫学术会议

作者：熊怡淞吴韦霖张玲珍周运恒韩志君仲人前第二军医大学长征医院实验诊断科

研究背景动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是心脑血管疾病的病理基础,其发病机制至今尚未阐明。近年来认为免疫炎症特别是由巨噬细胞介导的天然免疫在AS的发生发展中起重要作用。Siglec-1作为单核巨噬细胞激活的重要标志,在冠心病的发... 详细信息

研究背景动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是心脑血管疾病的病理基础,其发病机制至今尚未阐明。近年来认为免疫炎症特别是由巨噬细胞介导的天然免疫在AS的发生发展中起重要作用。Siglec-1作为单核巨噬细胞激活的重要标志,在冠心病的发病过程中究竟起何作用?通过前期研究发现冠心病人外周血单核细胞上Siglec-1表达明显升高,提示冠心病人外周血单核细胞已部分激活。但目前对其表达上调的原因还不清楚,可能是由于受ox-LDL刺激后引起;对Siglec-1的胞内信号传导通路目前也不清楚,推测可能是偶联其它膜受体引起单核/巨噬细胞活化产生炎性细胞因子、共刺激分子以及黏附分子等。本实验拟通过体外培养人单核巨噬细胞株,研究ox-LDL刺激对巨噬细胞Siglec-1表达和分泌细胞因子的影响,以探讨Siglec-1在ox-LDL致动脉粥样硬化中的作用。目的探讨氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)的致动脉粥样硬化作用是否通过上调单核巨噬细胞表面Siglec-1(sialic acid-binding immunoglobulin-like lectin 1,唾液酸黏附素)而发挥作用。方法制备ox-LDL,并用不同浓度ox-LDL刺激人巨噬细胞株U937,48后收集细胞和上清,分别用流式细胞仪和RT-PCR检测不同浓度ox-LDL刺激后细胞表面Siglec-1蛋白和基因表达水平,并测定培养上清液中MIP-1α、MCP-1和IL-8的浓度。结果与对照组相比,ox-LDL能刺激U937细胞表面Siglec-1蛋白和mRNA表达升高(P<0.01),培养上清液中MIP-1α、MCP-1和IL-8的表达升高(P<0.01),并与ox-LDL呈浓度依赖性。结论ox-LDL的致动脉粥样硬化作用可能部分通过上调单核巨噬细胞表面Siglec-1表达而活化巨噬细胞,分泌细胞因子和趋化因子诱导更多巨噬细胞和淋巴细胞的活化从而参与粥样斑块中的炎症反应。

关键词：动脉粥样硬化氧化型低密度脂蛋白 Siglec-1 U937

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中学英语有效课堂探究

广东教育（教研版） 2008年第2期 75-75页

作者：吴韦霖深圳市罗芳中学

长期以来，很多教师不辞辛苦，任劳任怨，兢兢业业。课抢着上，试卷争着做，但有时却收效甚微，付出与收获不成正比。究其原因，主要是缺乏针对性和有效性。那么，如何才能使我们的教学轻松高效呢？我觉得最重要的是要提高课堂教学的有... 详细信息

长期以来，很多教师不辞辛苦，任劳任怨，兢兢业业。课抢着上，试卷争着做，但有时却收效甚微，付出与收获不成正比。究其原因，主要是缺乏针对性和有效性。那么，如何才能使我们的教学轻松高效呢？我觉得最重要的是要提高课堂教学的有效性。教师应该用最有效的教学方法使学生进行最有效的学习。下面是我经过多年的教学实践和不断学习，在有效课堂方面的一些探究。在此与大家共勉。

关键词：有效课堂中学英语课堂教学教学方法教学实践有效性教师学习

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拿什么拯救RAID？

网管员世界 2005年第1期 25-25页

作者：吴韦霖北京维尔码科技发展有限公司副总经理

RAID技术已经非常成燕，但RAID并非完美无缺。万一RAID发生问题而威胁到了存储在其中的数据，最重要的就是找到专业的恢复方法。

关键词： RAID技术恢复方法存储数据威胁专业完美

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初中体育教学中体育游戏的应用策略探究

中国科技期刊数据库科研 2024年第10期 0180-0183页

作者：韦霖广西南宁市武鸣区武鸣高级中学广西南宁530199

随着新课改深化发展,初中体育教师在实际教学过程中,应紧随时代发展步伐,转变自身的教学理念,依托多样化的教学措施,以此来获得良好的教学效果。教师应结合学生的学习情况,将体育游戏教学模式引入到教学活动之中,以此为基础,充分激发学... 详细信息

随着新课改深化发展,初中体育教师在实际教学过程中,应紧随时代发展步伐,转变自身的教学理念,依托多样化的教学措施,以此来获得良好的教学效果。教师应结合学生的学习情况,将体育游戏教学模式引入到教学活动之中,以此为基础,充分激发学生的学习兴趣,确保学生的身体在得到锻炼的同时,使其可以掌握更多的体育技能。基于此,文章首先阐述了体育游戏的内涵与特点,分析了体育游戏在初中体育教学中的应用价值,并结合现阶段存在的问题,就如何更好地应用体育游戏,提出了一些可行性建议,旨在加快体育教学改革与创新的步伐。

关键词：初中体育教学体育游戏应用探究

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为什么小脚丫会变形——浅谈儿童平足症

科学生活 2024年第7期 93-95页

作者：陈大伟吴韦同济大学附属东方医院急诊创伤外科

“妈妈,妈妈,为什么我走路久了脚会疼?”这是许多家长都会遇到的问题。有些家长可能对此一脸茫然,而有些家长可能已经观察到孩子的小脚丫在行走时发生了形变。这可能是儿童平足症的迹象。接下来,我们将探讨儿童平足症的原因、评估方法... 详细信息

“妈妈,妈妈,为什么我走路久了脚会疼?”这是许多家长都会遇到的问题。有些家长可能对此一脸茫然,而有些家长可能已经观察到孩子的小脚丫在行走时发生了形变。这可能是儿童平足症的迹象。接下来,我们将探讨儿童平足症的原因、评估方法、潜在影响以及如何应对等问题。

关键词：一脸茫然评估方法潜在影响儿童如何应对家长