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lncRNA LUCAT1在脂多糖诱导的牙髓细胞炎症反应中的作用研究

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lncRNA LUCAT1在脂多糖诱导的牙髓细胞炎症反应中的作用研究

2020年中华口腔医学会老年口腔医学专业委员会第十五次...

作者：张凯莹房付春吴补领南方医科大学南方医院·南方医科大学口腔医学院

目的 :检测长链非编码RNA LUCAT1(Lung cancer associated transcript 1,LUCAT1)在脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激的人牙髓细胞(hDPCs)及炎症牙髓组织的表达,并探讨其对hDPCs炎症反应所起的作用,为牙髓炎的临床诊断和治疗靶点提供... 详细信息

目的 :检测长链非编码RNA LUCAT1(Lung cancer associated transcript 1,LUCAT1)在脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激的人牙髓细胞(hDPCs)及炎症牙髓组织的表达,并探讨其对hDPCs炎症反应所起的作用,为牙髓炎的临床诊断和治疗靶点提供新的思路。方法 :酶消化法分离培养hDPCs,体外鉴定hDPCs表型特点及生物学特性;采用qRT-PCR检测lncRNA LUCAT1及炎症因子IL-6、IL-8、IL-1β在LPS刺激的hDPCs mRNA水平的表达,ELISA检测炎症因子在hDPCs蛋白水平的表达;细胞免疫荧光检测lncRNA LUCAT1在hDPCs的表达位置,免疫组化法检测lncRNA LUCAT1在牙髓组织的表达;qRT-PCR检测敲除lncRNA LUCAT1后LPS刺激的hDPCs炎症程度。结果:分离培养的hDPCs来源于间充质组织。qRT-PCR可检测到lncRNA LUCAT1及炎症因子IL-6、IL-8、IL-1β在hDPCs mRNA水平的表达均上调;细胞免疫荧光显示lncRNA LUCAT1定位表达于hDPCs的胞核与胞浆,主要表达于胞浆;lncRNA LUCAT1在牙髓组织广泛表达,尤其是炎症牙髓组织中表达增多;lncRNA LUCAT1表达下调后可抑制LPS诱导的炎症反应。结论 :证实LPS刺激的hDPCs和炎症牙髓组织中高表达lncRNA LUCAT1,且抑制其表达可抑制炎症反应。

关键词：长链非编码RNA LUCAT1 人牙髓细胞炎症

同源异型盒基因msx1 cDNA表达型质粒的构建及其表达

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牙体牙髓牙周病学杂志 2005年第5期15卷 259-262页

作者：李萍吴补领何文喜高杰第四军医大学口腔医学院陕西西安710032

目的:克隆小鼠同源异型盒基因msx1cDNA,构建msx1真核表达载体,并在细胞内瞬时表达。方法:应用PCR克隆技术,克隆小鼠msx1全编码序列;利用基因重组技术,将msx1全编码cDNA序列导入pEGFP-N1绿色荧光蛋白表达型质粒。将构建好的表达型质粒转... 详细信息

目的:克隆小鼠同源异型盒基因msx1cDNA,构建msx1真核表达载体,并在细胞内瞬时表达。方法:应用PCR克隆技术,克隆小鼠msx1全编码序列;利用基因重组技术,将msx1全编码cDNA序列导入pEGFP-N1绿色荧光蛋白表达型质粒。将构建好的表达型质粒转染入MDPC-23细胞内瞬时表达。结果:成功克隆Balb/c胎鼠msx1全编码cDNA序列,并将其成功地导入pEGFP-N1表达型质粒;经测序分析,msx1全编码序列与GenBank中的相应序列一致;所构建质粒在MDPC-23细胞内成功表达,BMP2刺激后MSX1的表达部位由胞浆转至胞核。结论:成功克隆小鼠msx1cDNA序列,所构建的msx1-pEGFP-N1质粒在成牙本质细胞内成功表达MSX1。

关键词： msx1 克隆聚合酶链式反应成牙本质细胞瞬时转染

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深龋与正常牙髓干细胞成血管能力的对比研究

深龋与正常牙髓干细胞成血管能力的对比研究

第十三次全国老年口腔医学学术年会

作者：陈焱李心竹吴补领南方医科大学南方医院·南方医科大学口腔医学院

目的:对比分析深龋与正常牙髓干细胞的成血管能力,为今后牙髓组织工程中的血管生成奠定基础。方法:采用组织块法从深龋及正常牙髓组织中分离培养得到深龋牙髓干细胞与正常牙髓干细胞,对其来源进行鉴定。通过免疫组化、qRT-PCR以及Wester... 详细信息

目的:对比分析深龋与正常牙髓干细胞的成血管能力,为今后牙髓组织工程中的血管生成奠定基础。方法:采用组织块法从深龋及正常牙髓组织中分离培养得到深龋牙髓干细胞与正常牙髓干细胞,对其来源进行鉴定。通过免疫组化、qRT-PCR以及Western Blot检测深龋与正常牙髓干细胞中血管内皮生长因子的表达情况。将两种细胞成血管方向诱导,成管实验检测分析两种细胞的成血管能力。结果:深龋牙髓干细胞与正常牙髓干细胞均为间充质来源的干细胞。免疫组化、qRT-PCR以及Western Blot结果表明深龋牙髓干细胞与正常牙髓干细胞相比更高表达血管内皮生长因子(P<0.05)。成管实验结果表明深龋牙髓干细胞较正常牙髓干细胞具有更强的成血管能力。结论:深龋牙髓干细胞较正常牙髓干细胞更高表达成血管相关生长因子,具有更强的成血管能力,对牙髓血管生成起促进作用,可作为牙髓组织工程中的种子细胞。

关键词：血管内皮生长因子深龋牙髓干细胞正常牙髓干细胞血管新生

淫羊藿苷对人牙髓干细胞增殖及骨向分化的作用

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牙体牙髓牙周病学杂志 2015年第9期25卷 524-528页

作者：麻丹丹吴补领南方医科大学口腔医学院广东广州510515 南方医科大学南方医院口腔科广东广州510515

目的：探讨淫羊藿苷对人牙髓干细胞（hDPSCs）增殖及骨向分化的影响。方法：MTT检测10^-2-10^10mol／L淫羊藿苷对hDPSCs增殖能力的影响，并筛选出最佳浓度（10^-5mol／L）；然后以10^-5mol／L的淫羊藿苷作用于hDPSCs，并对其进行矿化诱... 详细信息

目的：探讨淫羊藿苷对人牙髓干细胞（hDPSCs）增殖及骨向分化的影响。方法：MTT检测10^-2-10^10mol／L淫羊藿苷对hDPSCs增殖能力的影响，并筛选出最佳浓度（10^-5mol／L）；然后以10^-5mol／L的淫羊藿苷作用于hDPSCs，并对其进行矿化诱导。诱导培养21d后，用Real—timePCR检测hDPSCs中ALP、DMP-1、DSPP各矿化相关基因的表达水平；茜素红染色观察hDPSCs矿化结节的能力。结果：与对照组相比，10^-2-10^-3mol／L的淫羊藿苷对hDPSCs增殖有一定的抑制作用（P〈0．05），而10^-5mol／L和10^-6mol／L的淫羊藿苷均能明显促进hDPSCs的增殖（P〈0．05），其中以10^-5mol／L最好；Real—timePCR检测及茜素红染色观察结果显示，10^-5mol／L淫羊藿苷可明显促进hDPSCs中各矿化相关基因的表达和矿化结节的形成。结论：一定浓度范围的淫羊藿苷可促进hDPSCs的增殖和骨向分化。

关键词：淫羊藿苷牙髓干细胞增殖骨向分化

核心结合因子a1在犬乳恒牙替换过程中的表达

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临床口腔医学杂志 2003年第11期19卷 653-655页

作者：李锋吴补领余擎刘晓辉第四军医大学口腔医学院牙体科陕西西安710032

目的 :观察犬乳恒牙替换过程中核心结合因子a1(cbfa1)的表达 ,探讨其在牙齿替换中的作用。方法 :利用免疫组织化学方法检测cbfa1在犬乳恒牙替换过程中的表达。结果 :cbfa1在幼犬替牙期的恒牙胚根方及旁侧见成骨细胞染色阳性 ;在恒牙胚... 详细信息

目的 :观察犬乳恒牙替换过程中核心结合因子a1(cbfa1)的表达 ,探讨其在牙齿替换中的作用。方法 :利用免疫组织化学方法检测cbfa1在犬乳恒牙替换过程中的表达。结果 :cbfa1在幼犬替牙期的恒牙胚根方及旁侧见成骨细胞染色阳性 ;在恒牙胚上方骨组织中的破骨细胞以及乳牙根面和牙髓腔内的破牙细胞中均有阳性信号表达。结论 :cbfa1可能参与了犬乳恒牙替换过程中牙齿的萌出过程。

关键词：乳恒牙替换核心结合因子a1 破骨细胞成骨细胞

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牙髓炎的活髓保存治疗

牙髓炎的活髓保存治疗

2020年中华口腔医学会老年口腔医学专业委员会第十五次...

作者：罗奕菲徐稳安吴补领南方医科大学南方医院·南方医科大学口腔医学院

牙髓承担重要的生理功能,牙髓根尖周病是导致牙髓无法保存的原因之一。活髓保存治疗是尽最大限度保留健康牙髓组织,提高患牙远期保存率的方法,但被认为适应范围窄,疗效不确定。牙髓组织的病理学改变是决定临床治疗方案和评估疗效的组织... 详细信息

牙髓承担重要的生理功能,牙髓根尖周病是导致牙髓无法保存的原因之一。活髓保存治疗是尽最大限度保留健康牙髓组织,提高患牙远期保存率的方法,但被认为适应范围窄,疗效不确定。牙髓组织的病理学改变是决定临床治疗方案和评估疗效的组织学基础。随着对牙髓生物学基础和临床研究的深入,现代诊疗技术及盖髓材料的革新,有关牙髓炎症状态的判断、活髓保存治疗的适用范围及预后有了新的理念。本文就近年来有关牙髓炎病理改变的研究,牙髓炎活髓保存治疗的临床研究等方面的进展作一综述,为临床对牙髓炎患牙采用活髓保存治疗提供依据及支持。

关键词：牙髓炎活髓保存治疗牙髓直接盖髓术牙髓切断术

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小鼠牙髓干细胞培养及诱导分化

第四军医大学学报 2003年第18期24卷 1643-1646页

作者：陆群吴补领周学东林媛王冀姝韩骅四川大学华西口腔医学院四川成都610041 第四军医大学第四军医大学口腔医学院牙体病科陕西西安710033 第四军医大学基础部遗传学与发育生物学教研室陕西西安710033

目的 :分离、培养小鼠牙髓干细胞并诱导分化 .方法 :采用酶消化培养法获得小鼠的单个牙髓细胞悬液 ,细胞密度调整为 1× 10 4/孔细胞 ,用 2 0 0mL·L -1胎牛血清的α MEM培养液培养 14d ,挑出细胞克隆消化传代 ,TGF β、BMP2 、bFGF细... 详细信息

目的 :分离、培养小鼠牙髓干细胞并诱导分化 .方法 :采用酶消化培养法获得小鼠的单个牙髓细胞悬液 ,细胞密度调整为 1× 10 4/孔细胞 ,用 2 0 0mL·L -1胎牛血清的α MEM培养液培养 14d ,挑出细胞克隆消化传代 ,TGF β、BMP2 、bFGF细胞因子诱导 ,PCR检测DSPP的mRNA的表达 .结果 :小鼠牙髓细胞呈集落状生长 ,克隆形成率为 1.6 -2 .5个 / 10 4细胞 ,所形成的集落细胞结合紧密 ,细胞体积小、胞核大 ,经细胞因子刺激后的细胞表达DSPP的mRNA .结论 :培养的小鼠牙髓集落状生长的细胞具有干细胞增殖快等特性。

关键词：干细胞牙髓干细胞细胞培养分化牙本质涎磷蛋白

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中国临床康复 2005年第2期9卷 50-51页

作者：孙汉堂肖明振吴补领徐国江费俭解放军第四军医大学口腔医学院口腔内科陕西省西安市710032 上海南方模式生物研究中心上海市201203

目的:为便于进行规模化的转基因研究,构建一种四环素调控性转基因体系中的工具小鼠系。方法:实验于2002-06/10在上海南方模式生物研究中心完成。以cβ-actin启动子取代pTet-on-NSE质粒中的NSE启动子,构建转基因载体pTet-on-CX;将XhoI酶... 详细信息

目的:为便于进行规模化的转基因研究,构建一种四环素调控性转基因体系中的工具小鼠系。方法:实验于2002-06/10在上海南方模式生物研究中心完成。以cβ-actin启动子取代pTet-on-NSE质粒中的NSE启动子,构建转基因载体pTet-on-CX;将XhoI酶切线性化的载体DNA注射到小鼠受精卵的雄原核,移植到假孕母鼠的输卵管。仔鼠出生后,经PCR及SouthernBlotting检测阳性小鼠。结果:注射的受精卵共存活603枚,移卵后产仔64只,阳性6只。阳性鼠分别传代开始建系。结论:通过显微注射的方法获得pTet-on-CX转基因工具小鼠的G代,0为规模化的转基因研究包括与牙齿修复有关的基因,如牙本质涎磷蛋(白基因)奠定了基础。

关键词：牙齿修复转基因显微注射法 pTet-on-CX 转基因工具小鼠实验观察

变形链球菌超声提取物对牙髓细胞增殖和天然免疫受体基因mRNA表达的影响

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实用口腔医学杂志 2013年第1期29卷 16-19页

作者：岳静高杰徐树军黄欣刘影吴补领南方医科大学南方医院口腔科南方医科大学口腔医学院广州510515

目的:观察变形链球菌超声提取物对牙髓细胞的增殖活性、天然免疫受体基因mRNA表达的影响。方法:采用组织块法原代培养牙髓细胞,通过不同浓度的变形链球菌超声提取物(1、10、100μg/ml)作用于牙髓细胞,MTT法检测牙髓细胞的增殖活性;荧光... 详细信息

目的:观察变形链球菌超声提取物对牙髓细胞的增殖活性、天然免疫受体基因mRNA表达的影响。方法:采用组织块法原代培养牙髓细胞,通过不同浓度的变形链球菌超声提取物(1、10、100μg/ml)作用于牙髓细胞,MTT法检测牙髓细胞的增殖活性;荧光定量PCR检测牙髓细胞NOD2、TLR2和TLR4 mRNA的表达水平。结果:1μg/ml变形链球菌超声提取物处理24 h可促进牙髓细胞的增殖;10μg/ml和100μg/ml处理24 h和48 h可明显抑制细胞增殖。变形链球菌超声提取物(10μg/ml)作用于牙髓细胞后,NOD2、TLR2和TLR4 mRNA表达量均增加。结论:变形链球菌超声提取物可抑制牙髓细胞的生长,促进NOD2、TLR2和TLR4 mRNA的表达。

关键词：变形链球菌超声提取物牙髓细胞天然免疫受体