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棉花半乳糖苷酶基因启动子的分离及其在转基因烟草中的表达

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中国科学（C辑） 2005年第5期35卷 389-397页

作者：吴蔼民刘进元分子生物学实验室及教育部蛋白质科学重点实验室清华大学生物科学与技术系北京100084

β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,EC3.***.1.23)由植物中广泛分布的一类糖基水解酶组成,被认为与细胞壁多糖的代谢相关.棉花(Gossypiumhirsutum)β-半乳糖苷酶基因已被成功分离,被命名为***杂交实验显示该基因在棉花纤维发育的伸长期优势... 详细信息

β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,EC3.***.1.23)由植物中广泛分布的一类糖基水解酶组成,被认为与细胞壁多糖的代谢相关.棉花(Gossypiumhirsutum)β-半乳糖苷酶基因已被成功分离,被命名为***杂交实验显示该基因在棉花纤维发育的伸长期优势表达.为了分析GhGal1基因的时空表达调控,本研究构建了GhGal1启动子区域(1770bp)与β-葡糖醛酸糖苷酶(glucuronidase,GUS)基因融合的双元载体,通过农杆菌转化烟草植株.对转基因植株分析的结果表明:此转基因果实中的GUS活性比阴性和阳性对照的活性高.GUS组织定位分析表明:β-半乳糖苷酶基因能在根组织的分生区、子叶、维管束组织、果实和表皮毛中表达.此外,调控区域的序列分析揭示该序列含有一些果实/种子特异表达以及与表皮毛表达相关的保守元件.这些结果显示了GhGal1启动子在转基因烟草植株中的时空表达特征,并提供了GhGal1基因参与棉花纤维发育的一些重要线索.

关键词：棉花 β半乳糖苷酶转基因烟草启动子活性基因表达

棉花不同生育期SOD同工酶与品种抗黄萎病性相关性的研究

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棉花学报 1998年第2期10卷 96-100页

作者：吴蔼民夏正俊顾本康江苏省农科院植保所

凝胶电泳测定不同棉花品种子叶期、４叶期、蕾期、铃期、吐絮期等５个不同生育期的叶片内ＳＯＤ同工酶，结果其谱带数目相应为４、８、８、４、３，随着棉花的生育进程，ＳＯＤ同工酶活性由弱一强一弱。在棉花生长前期子叶期、４叶期，... 详细信息

凝胶电泳测定不同棉花品种子叶期、４叶期、蕾期、铃期、吐絮期等５个不同生育期的叶片内ＳＯＤ同工酶，结果其谱带数目相应为４、８、８、４、３，随着棉花的生育进程，ＳＯＤ同工酶活性由弱一强一弱。在棉花生长前期子叶期、４叶期，抗、感黄萎病品种之间，接菌与不接菌棉株间，ＳＯＤ同工酶谱活性差异不明显；在蕾期，虽然品种间的ＳＯＤ同工酶谱活性差异不明显，但接菌的棉株Ｅ１、Ｅ５、Ｅ６三条酶带活性强于不接菌棉株，Ｅ３活性则相反；在铃期，抗、耐品种较感病品种Ｅ２谱带活性强，接菌棉株较不接菌棉株增加一条Ｅ３ｂ谱带。感病品种泗棉２号上显症棉株叶片体内ＳＯＤ同工酶较无病症叶增加一条Ｅ４酶带；不同病级的叶片内，ＳＯＤ同工酶的活性差异不大。至吐絮期，不同品种棉株及显症叶与无病叶间的ＳＯＤ酶活性又趋相同。

关键词：棉花 SOD 同功酶黄萎病抗病性生长发育

内生菌73a在不同抗性品种棉花体内的定殖和消长动态研究

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植物病理学报 2001年第4期31卷 289-294页

作者：吴蔼民顾本康傅正擎胡华东江苏省农科院植保所南京210014

通过标记天然不具有 Rif抗性的内生菌 73a,获得抗 Rif 10 0μg/ ml突变体菌株 ,其表观和对大丽轮枝菌的抑菌作用没有变化 ,可以进行消长动态研究。经回收试验证明 ,内生菌 73a可以在棉花体内定殖。针刺接种后 ,内生菌 73a的数量都表现... 详细信息

通过标记天然不具有 Rif抗性的内生菌 73a,获得抗 Rif 10 0μg/ ml突变体菌株 ,其表观和对大丽轮枝菌的抑菌作用没有变化 ,可以进行消长动态研究。经回收试验证明 ,内生菌 73a可以在棉花体内定殖。针刺接种后 ,内生菌 73a的数量都表现一个共同的“由增到减”趋势 ,即在 1～ 5 d内是一个持续增长的过程 ,在第 5 d达到最高水平 ;灌根处理表明 :上段内的菌株数逐渐增加 ,中段内的菌株数在1～ 5 d内逐渐上升 ,随后慢慢下降 ,下段内的菌株数逐渐减少 ;浸种处理后 ,73a在棉苗体内定殖的数量均有一个下降的过程 ,其中常抗棉第 3d体内的内生菌数量是第 15 d的 11.5 0倍。

关键词：内生菌73a 棉花定殖消长规律抗性品种黄萎病菌

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一种改良的启动子序列克隆的染色体步查法

中国生物化学与分子生物学报 2006年第3期22卷 243-246页

作者：吴蔼民刘进元清华大学生物科学与技术系分子生物学实验室北京100084

利用染色体步行法,从已知DNA序列克隆侧翼未知序列是非常有效的方法之一,但由于所选用的特定限制性内切酶对目标基因组不能酶解成合适大小的片段,因而受PCR扩增能力的局限,往往扩增不出有效产物.针对这一点,这里我们介绍一种简单有效的... 详细信息

利用染色体步行法,从已知DNA序列克隆侧翼未知序列是非常有效的方法之一,但由于所选用的特定限制性内切酶对目标基因组不能酶解成合适大小的片段,因而受PCR扩增能力的局限,往往扩增不出有效产物.针对这一点,这里我们介绍一种简单有效的改良方法,它包括以下步骤:首先用不同的限制性内切酶(包括平末端和粘性末端)酶解目标基因组DNA,接着,选择能将基因组酶切成弥散、分布均匀的限制性内切酶,如DraⅠ和HindⅢ,合成相对应的接头;然后,选择弥散的、分布均匀的限制性内切酶的酶解产物,构建成含相应接头的基因组DNA文库,用作PCR的模板;最后,用接头引物和特异引物,通过巢式PCR扩增目的片段,获得了理想的扩增效果.采用改进后的染色体步查法,有效地从较复杂的棉花核DNA中克隆出6个棉花启动子序列.

关键词：连接介导的步查法限制性内切酶棉花启动子序列方法改良

植物内生及根际土壤细菌诱导棉花对大丽轮枝菌抗性的研究

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中国生物防治 1996年第1期12卷 7-10页

作者：夏正俊顾本康吴蔼民江苏省农科院植保所南京210014

本研究在分离植物组织内生菌及根围土壤细菌的基础上,进行了室内拮抗活性测定,进而进行诱抗效果的检测。来自植物组织内部的细菌群落中含拮抗性较强的细菌群体较大。在拮抗群体中,经诱导,68.42%菌株获得了抗 Rif 300×10^(-6)的突变体... 详细信息

本研究在分离植物组织内生菌及根围土壤细菌的基础上,进行了室内拮抗活性测定,进而进行诱抗效果的检测。来自植物组织内部的细菌群落中含拮抗性较强的细菌群体较大。在拮抗群体中,经诱导,68.42%菌株获得了抗 Rif 300×10^(-6)的突变体。抗利福早突变体菌株在培养性状、室内拮抗性及诱导抗性等方面,与原菌株均十分相似。以菌株73a 诱导抗性效果较好,达67.21%。诱抗效果与细菌在体内定殖与运转能力密切相关。

关键词：棉花大丽轮枝菌内生细菌根际细菌诱导抗性

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内生菌对棉花黄萎病的田间防效及增产作用

江苏农业科学 2000年第5期28卷 38-39页

作者：吴蔼民顾本康傅正擎胡波江苏省农业科学院植物保护研究所南京210014

73a、Ala是对棉花黄萎病菌有拮抗作用的棉株组织内生菌 ,对棉苗分别用生防细菌 73a、Ala及其混合菌株进行蘸根处理 ,然后移栽入人工病田 ,于 8月下旬调查棉株生理性状及发病情况 ,结果表明 ,内生菌 73a、Ala对棉花黄萎病具有良好的防治... 详细信息

73a、Ala是对棉花黄萎病菌有拮抗作用的棉株组织内生菌 ,对棉苗分别用生防细菌 73a、Ala及其混合菌株进行蘸根处理 ,然后移栽入人工病田 ,于 8月下旬调查棉株生理性状及发病情况 ,结果表明 ,内生菌 73a、Ala对棉花黄萎病具有良好的防治效果 ,73a对棉株生长还有一定的促进作用 ,表现为对棉花株高、果枝数、脱落有明显的改善 ;三种处理的产量均有不同程度的增加 ,其中73a表现出 18.15

关键词：内生菌棉花黄萎病防效增产效应生物防治

棉株植物内生菌诱导棉花抗黄萎病过程中同工酶活性的变化

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江苏农业学报 1997年第2期13卷 99-101页

作者：夏正俊顾本康吴蔼民傅正擎江苏省农业科学院植物保护研究所

用聚丙烯酰胺凝胶电泳法，研究接种植物内生性生防菌后，其诱导棉花抗黄萎病过程中棉花茎叶组织中的过氧化物酶、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和酯酶活性的变化。①诱导接种植物内生性生防菌７３ａ后，接种点附近棉茎中的过氧化物酶活性高... 详细信息

用聚丙烯酰胺凝胶电泳法，研究接种植物内生性生防菌后，其诱导棉花抗黄萎病过程中棉花茎叶组织中的过氧化物酶、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和酯酶活性的变化。①诱导接种植物内生性生防菌７３ａ后，接种点附近棉茎中的过氧化物酶活性高，表现为酶带宽，颜色深，活性明显强于单用针剌的对照，而针剌对照又明显高于空白对照；接种后４天，接种７３ａ等内生性生防菌的酶谱比针剌对照及空白对照多１条Ｒｆ为０．２８的酶带。挑战接种后１０天测定，接种点附近的棉茎间过氧化物酶活性同对照已无明显差异。棉花叶片组织测定表明，诱导接种４天后，接种内生菌７３ａ的叶片过氧化物酶活性强于针剌对照。②诱导接种７３ａ后２天，接种点附近的棉茎中ＳＯＤ酶谱有３条酶带，多于空白对照的２条，且活性强。③诱导接种７３ａ后２４小时，接种点附近棉茎组织酯酶酶谱比空白对照多１条Ｒｆ为０．

关键词：棉花黄萎病诱导抗性过氧化物酶同功酶

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苗保安防治棉花苗期病虫害试验初报

江苏农业科学 1997年第5期25卷 43-44页

作者：吴蔼民顾本康夏正俊傅正擎江苏省农业科学院植物保护研究所

苗保安处理棉花种子结果表明：在病土中，苗保安１％剂量处理１４天后出苗率比对照高４９０７％，防病效果比灵福合剂高１１４３％；同时能够降低棉花的株蚜量，其残效期较长，４０天后对蚜虫的防效达６６５４％。苗保安对棉花安全。

关键词：苗保安包衣剂棉花病虫害防治

棉花新品系9456D在江苏黄萎病重病区的抗性鉴定

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江苏农业科学 2003年第3期31卷 39-40页

作者：林玲吴蔼民戴新薄伟新顾本康江苏省农业科学院植物保护研究所江苏南京210014 江苏省常熟市经济作物栽培指导站江苏省常熟市徐市镇农科站

20 0 1～ 2 0 0 2年在江苏省棉花黄萎病重病区常熟市徐市镇对棉花新品系 94 5 6D进行了抗黄萎病性鉴定 ,结果表明 ,94 5 6D表现出良好的抗病性 ,平均校正病指 2 0 0 1年为 4 .79,2 0 0 2年为 6 .5 9,鉴定结果为高抗 ,适宜在病区种植。

关键词：棉花品系9456D 江苏黄萎病抗性鉴定品种