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cHL H/RS细胞来源及与周围背景淋巴细胞克隆相关性研究

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cHL H/RS细胞来源及与周围背景淋巴细胞克隆相关性研究

作者：吴自勍第一军医大学

学位级别：硕士

目的霍奇金淋巴瘤（Hodgkin’s lymphoma, HL）以它独特的形态结构区别于非霍奇金淋巴瘤（non Hodgkin’s lymphoma, NHL）—散在、孤立的肿瘤细胞（H/RS细胞）“鹤立鸡群”地位于百倍甚至千倍于其的反应性周围背景细胞中，一百六... 详细信息

目的霍奇金淋巴瘤（Hodgkin’s lymphoma, HL）以它独特的形态结构区别于非霍奇金淋巴瘤（non Hodgkin’s lymphoma, NHL）—散在、孤立的肿瘤细胞（H/RS细胞）“鹤立鸡群”地位于百倍甚至千倍于其的反应性周围背景细胞中，一百六十多年来吸引了大量的医学工作者对其实质进行研究。目前研究焦点主要集中在：（1）H/RS细胞究竟来源于何种细胞？（2）H/RS 细胞与背景细胞有什么关系？本文基于上述疑点，创新性地采用石蜡切片单细胞基因分析技术结合IgH及TCRβ基因重排检测、间接法原位PCR，从H/RS细胞及其背景淋巴细胞的基因克降性入手，从一个新视角展开对cHL的肿瘤克隆性的研究，即H/RS细胞到底来源于何种淋巴细胞？周围背景细胞中是否有与H/RS细胞同克隆的细胞？实验设计免疫球蛋白重链或T细胞受体基因有多样性，每一个成熟发展的淋巴细胞都有其特有的IgH或TCR基因编码，即免疫球蛋白基因和T细胞受体基因重排具有多样性，如果是肿瘤性组织，肿瘤细胞应该具有单一克降性，所以通过检测IgH及TCR基因重排，就可以判断淋巴组织疾病的来源和肿瘤性，我们通过检测H/RS及其背景淋巴细胞中有无相同克隆性基因重排来验证这个疑问：（1）首先我们结合HE，按WHO新分类，对32例cHL进行CD15、CD30、CD20、CD45RO和EBV蛋白检测以明确诊断和分型;（2）然后对32例cHL石蜡包埋组织进行IgH和TCR β基因重排PCR检测;（3）对于IgH基因克隆性单带，利用PCR产物自行合成地高辛标记探针，对2例MCHL石蜡切片进行间接法原位PCR检测;（4）考虑到产物探针可能存在的干扰，接着我们利用显微操作仪，在石蜡切片上进行了H/RS单细胞挑取，半巢式PCR扩增，产物进行纯化、质粒载体上克隆、测序，为最终实现设计特异寡核苷酸探针进行间接法原位PCR奠定基础。结果（1）32例cHL，其中LrHL11例，NSHL2例，MCHL14例， LDHL5例;（2）H/RS细胞25/32（78.1％）CD15阳性，30/32（93.8％） CD30阳性，6/32（18.8％）CD20阳性，7/32（21.9％）CD45RO阳性，20/32 （62.5％）例EBV阳性;（3）PCR检测，10/32（31.3％）检测到IgH基因重排克隆性单带，3／32（9．1％）检测到TCR6基因重排克隆性单带，其 I 中一例为双克隆性重排;（4）建立了石蜡切片问接法原位 PCR，发现着 l 色微粒不仅位于H／RS细胞核内，也可见于周围背景淋巴细胞核内;（5）D 建立了石蜡切片单细胞基因分析技术，获得了克隆性单带及其PCR产物7 的序列结果。D 结论卜述工作初步显示：（）｝IE结合5种免疫标记基本可以明确cHL D 的诊断和分类;门）通过对lgH基因重排P＊R检测，可以初步确定部分 CIJL的B细胞来源：3例TCR6基回克隆性重排的检出，为CHL 的T细、D 胞来源提供了一定的启示：（）使用1咖基因P＊R产物探针进行间接法原位 PCR，提示部分背景 B淋巴细胞与 H／RS细胞有同源性，但有待于设 l 计特异性寡核昔酸探针检测进一步证实;（4）石蜡切片挑取I4／RS单细胞D 进行基回分析是可行的。

关键词： HD cHL,H/RS 细胞,背景细胞,CD15,CD30,CD20, CD45RO,EBV,IgH基因,TCRβ基因,间接法原位PCR,单细胞基因, 分析

肝细胞癌中GPC3和Notch1表达的关系

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南方医科大学学报 2013年第4期33卷 590-592,597页

作者：彭璠莉吴自勍李学农南方医科大学南方医院病理科//广东省分子肿瘤病理学重点实验室广东广州510515 南方医科大学基础医学院病理系//广东省分子肿瘤病理学重点实验室广东广州510515

目的通过观察肝细胞癌组织中磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)与Notch1的表达情况,探讨两者在肝细胞癌中表达的相互关系。方法应用免疫组化方法、计算机图像分析等技术检测30例肝细胞癌组织中GPC3和Notch1的表达情况,并用SPSS软件系统进行统... 详细信息

目的通过观察肝细胞癌组织中磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)与Notch1的表达情况,探讨两者在肝细胞癌中表达的相互关系。方法应用免疫组化方法、计算机图像分析等技术检测30例肝细胞癌组织中GPC3和Notch1的表达情况,并用SPSS软件系统进行统计学分析。结果肝细胞癌组织分化程度越高,GPC3表达越低;分化程度越低,GPC3表达越高,差异有显著性(P<0.05)或高度显著性(P<0.01)。肝细胞癌组织分化程度越高,Notch1表达越高;分化程度越低,Notch1表达越低,差异有显著性(P<0.05)或高度显著性(P<0.01)。GPC3与Notch1的表达呈高度显著性负相关(rp=-0.607,P=0.000;r=-0.692,P=0.000)。结论在肝细胞癌中,GPC3与Notch1的表达呈现负相关性,提示两者间可能存在相互调节的机制,共同影响肝细胞癌的发生发展。

关键词：癌,肝细胞磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 Notch1 免疫组化

经典性霍奇金淋巴瘤中EB病毒潜伏膜蛋白1的表达

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第一军医大学学报 2001年第6期21卷 438-439,F002页

作者：吴自勍赵彤贺海容张进华第一军医大学病理教研室广东广州510515

目的探讨经典性霍奇金淋巴瘤（ｃＨＬ）肿瘤性Ｈ／Ｒ－Ｓ细胞埃泼斯坦－巴尔病毒（ＥＢＶ）潜伏膜蛋白１（ＬＭＰ１）的表达情况及其意义。方法　采用免疫组化ＳＡＢＣ法对３２例ｃＨＬ进行ＬＭＰ１蛋白表达的检测。结果２０／３２（... 详细信息

目的探讨经典性霍奇金淋巴瘤（ｃＨＬ）肿瘤性Ｈ／Ｒ－Ｓ细胞埃泼斯坦－巴尔病毒（ＥＢＶ）潜伏膜蛋白１（ＬＭＰ１）的表达情况及其意义。方法　采用免疫组化ＳＡＢＣ法对３２例ｃＨＬ进行ＬＭＰ１蛋白表达的检测。结果２０／３２（６２．５％）例ＬＭＰ１蛋白表达阳性，在各亚型之间没有显著性差异（Ｘ２＝０．８０９，Ｐ＝０．８４７）。结论ＬＭＰ１蛋白表达有地区差异，在ｃＨＬ亚型间可

关键词：霍奇金淋巴瘤疱疹病毒4型病毒基质蛋白质类 EB病毒 LMP1

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石蜡切片挑取单个H/RS细胞的研究

中华血液学杂志 2001年第11期22卷 604-605页

作者：吴自勍赵彤罗琛贺海容第一军医大学病理教研室广州510515 第一军医大学生物学教研室广州510515

1994年德国科隆大学的Küppers等将“分子组织学”方法应用到霍奇金病(HD)中,采用微操作仪(micromanipulator)从冰冻组织切片上挑取单个H/RS细胞,成功检测到免疫球蛋白基因(Ig)重排,从而在单细胞水平第1次证实了H/RS细胞来源于B细胞[1]... 详细信息

1994年德国科隆大学的Küppers等将“分子组织学”方法应用到霍奇金病(HD)中,采用微操作仪(micromanipulator)从冰冻组织切片上挑取单个H/RS细胞,成功检测到免疫球蛋白基因(Ig)重排,从而在单细胞水平第1次证实了H/RS细胞来源于B细胞[1].我们将探讨此方法在石蜡切片中的应用.

关键词：石蜡切片单细胞 H/RS细胞霍奇金病

小叶状宫颈管腺体增生达深部血管1例临床病理分析

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大医生 2022年第23期7卷 92-95页

作者：赖玉琴陈凤英刘碧星马子毅吴自勍广州市花都区妇幼保健院病理科广东广州510800 广州市花都区妇幼保健院妇科广东广州510800 广州华银医学检验中心有限公司病理组广东广州510515

目的观察小叶状宫颈管腺体增生(LEGH)达深部血管的临床病理特征,为临床提供参考。方法对1例达深部血管的小叶状宫颈管腺体增生组织切片进行常规病理活检苏木素-伊红(HE)染色、免疫组化及特殊染色检查,并复习相关文献。结果小叶状宫颈管... 详细信息

目的观察小叶状宫颈管腺体增生(LEGH)达深部血管的临床病理特征,为临床提供参考。方法对1例达深部血管的小叶状宫颈管腺体增生组织切片进行常规病理活检苏木素-伊红(HE)染色、免疫组化及特殊染色检查,并复习相关文献。结果小叶状宫颈管腺体增生腺上皮无明显异型性。免疫组织化学结果显示黏蛋白6(MUC-6)阳性,癌胚抗原(CEA)阴性,抑癌基因(P53)野生型表达,核抗原基因(Ki-67)增殖指数<5%。特殊染色结果显示阿尔新蓝-过碘酸希夫(AB/PAS)阳性,AB呈蓝色,PAS呈紫色。结论小叶状宫颈管腺体增生为宫颈内膜腺体增生的特殊形式,可能是子宫颈管恶性肿瘤前驱病变,达深部血管的小叶状宫颈管腺体增生与宫颈胃型腺癌易相混淆,主要依靠免疫组化协助诊断与鉴别诊断。

关键词：小叶状宫颈管腺体增生免疫组化鉴别诊断

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血管生成与非小细胞肺癌

国外医学（呼吸系统分册） 1999年第2期19卷 97-99页

作者：吴自勍第一军医大学病理教研室广州510515

近年来有关肿瘤血管生成与肿瘤的生长、转移及预后的关系已受到越来越多的学者的关注,现就血管生成与非小细胞肺癌的关系作一个简单的回顾。

关键词：血管生成非小细胞肺癌转移预后

给部分听课专家教授的一封信——关于教学监督中几个问题的探讨与商榷

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南方医学教育 2007年第1期 46-,39页

作者：吴自勍

病理教研室一位年轻教师给听课专家教授的信,就教学和管理中的一些问题,提出了自己的看法。这种主人翁的态度和独立思考的精神,值得鼓励和肯定;学校转制以后,如何把握管理的尺度,形成一种既有一定的军校特色又适合地方院校的管理模式,... 详细信息

病理教研室一位年轻教师给听课专家教授的信,就教学和管理中的一些问题,提出了自己的看法。这种主人翁的态度和独立思考的精神,值得鼓励和肯定;学校转制以后,如何把握管理的尺度,形成一种既有一定的军校特色又适合地方院校的管理模式,是我们面临的新课题。这方面,专家教授和年轻教师之间,可能有不同看法。比如在课堂教学管理上,前者要求庄重严肃的课堂秩序,后者钟情轻松自由的教学氛围。到底怎样的管理方式更适合当今大学生和学校转制以后的实际,确实值得探讨和深思。为此,本刊特刊发这封来信,以期引起关注并希望有更多的有心人参与讨论,从而有利于学校教学管理水平的提高。

关键词：专家教授教学氛围监督教研室年轻教师商榷教学课件大学生看法教员

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浅论医学课课前准备的重要性

第一军医大学分校学报 2004年第2期27卷 124-125页

作者：吴自勍南方医科大学分校病理学教研室广东省广州市510315

课堂讲学有两个环节 :课前准备和课堂发挥 ,而课前准备进行的如何直接影响课堂发挥的好坏 ,也即上课质量的高低。从教师、教材、学生

关键词：医学课课堂教学课前准备医学教育

原花青素对前列腺癌LNCaP细胞增殖和凋亡的影响

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南方医科大学学报 2007年第4期27卷 499-500,504页

作者：吴自勍黄浩丁雪梅罗荣城南方医科大学南方医院肿瘤科广东广州510515

目的研究原花青素对人雄激素依赖性前列腺癌细胞株LNCaP细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养的LNCaP细胞株与100、200、300μg/ml的原花青素共孵育,分别在24、48和72h时观察细胞形态学变化,MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞术分析细胞凋... 详细信息

目的研究原花青素对人雄激素依赖性前列腺癌细胞株LNCaP细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养的LNCaP细胞株与100、200、300μg/ml的原花青素共孵育,分别在24、48和72h时观察细胞形态学变化,MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞术分析细胞凋亡情况。结果原花青素可引起LNCaP细胞形态较明显改变。不同浓度(100、200、300μg/ml)原花青素对LNCaP细胞作用的细胞增殖抑制率分别为27.1%、72.1%和86.4%。流式细胞术检测表明原花青素可诱导LNCaP细胞凋亡,300μg/ml原花青素处理72h引起36.5%的凋亡率。这3种作用均随原花青素浓度和作用时间的延长而增强。结论原花青素可在体外抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖,并促进其凋亡。

关键词：前列腺肿瘤原花青素细胞增殖细胞凋亡