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猪XCL1基因原核表达、多克隆抗体制备及产物活性鉴定

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猪XCL1基因原核表达、多克隆抗体制备及产物活性鉴定

作者：吴耀丽西北农林科技大学

学位级别：硕士

趋化因子(chemokines, chemoattractant cytokines)是能够使细胞定向移动的小分子细胞因子,在促使细胞迁移和活化过程中发挥重要作用,对机体的免疫系统非常重要。淋巴细胞趋化因子(Lymphotactin,Lptn)是C族趋化因子的一员,也被称为淋巴... 详细信息

趋化因子(chemokines, chemoattractant cytokines)是能够使细胞定向移动的小分子细胞因子,在促使细胞迁移和活化过程中发挥重要作用,对机体的免疫系统非常重要。淋巴细胞趋化因子(Lymphotactin,Lptn)是C族趋化因子的一员,也被称为淋巴趋化因子配体1(XCL1)。淋巴趋化因子受体XCR1与XCL1相互作用参与呈递抗原、激活T淋巴细胞和NK细胞,发挥机体的细胞免疫功能,能够调节免疫系统平衡,增强粘膜免疫、抗肿瘤免疫,在感染性疾病过程中诱发炎症反应等。柳超等已构建pEGFP-PLptn真核表达载体,证实绿色荧光融合蛋白在体外具有趋化活性,但并未进行进一步的研究。本研究首次构建了原核表达载体pET-32a-XCL1,摸索了原核表达的最佳诱导和纯化条件,采用HiTrap Chelating HP纯化蛋白,SDS-PAGE检测重组蛋白纯化情况,Western-blot检测重组蛋白表达情况。并以此重组蛋白作为抗原,制备多克隆抗体,双向琼脂扩散试验、间接ELISA检测多克隆抗体效价,MTT法检测猪XCL1对淋巴细胞增殖的影响,为研究XCL1在猪中的功能提供了素材。主要研究内容与结果如下: 1.根据NCBI上猪XCL1基因序列,设计引物,从猪淋巴结克隆得到0.27 kb的目的片段。将目的片段克隆至pMD-19T载体中,筛选出阳性质粒送测序,结果表明该目的片段序列正确。 2.将目的基因构建到原核表达载体pET-32a (+),在大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达,纯化目的蛋白,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。 3.双向琼脂扩散试验显示抗原抗体的结合比为1:8,间接ELISA检测到抗体效价达到1: 12 800。 4.通过MTT法试验检测重组蛋白XCL1对淋巴细胞增殖的影响,结果表明重组蛋白XCL1能促进淋巴细胞的增殖,而此实验制备的多克隆抗体可以阻断这种效应。

关键词： XCL1基因多克隆抗体间接ELISA MTT

猪XCL1蛋白纯化、多克隆抗体的制备及其生物活性鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第12期27卷 1335-1338页

作者：吴耀丽温俊歌孙岩张德礼西北农林科技大学动物医学院兽医免疫学研究所农业部动物生物技术重点开放实验室预防兽医学系兽医微生物学与病毒学课程组病毒免疫与生物信息研究室生物信息学研究中心分子病毒免疫与肿瘤系统生物学研究组陕西杨凌712100

目的:纯化获得体外表达猪his-XCL1的重组蛋白,制备多克隆抗体并研究其对淋巴细胞增殖的影响。方法:首先,采用HiTrapTM Chelating HP纯化方法,SDS-PAGE检测重组蛋白纯化情况,Western blot检测重组蛋白表达情况。再免疫动物制备多抗血清,... 详细信息

目的:纯化获得体外表达猪his-XCL1的重组蛋白,制备多克隆抗体并研究其对淋巴细胞增殖的影响。方法:首先,采用HiTrapTM Chelating HP纯化方法,SDS-PAGE检测重组蛋白纯化情况,Western blot检测重组蛋白表达情况。再免疫动物制备多抗血清,双向琼脂扩散试验、间接ELISA检测多克隆抗体效价,MTT法检测猪XCL1对淋巴细胞增殖的影响。结果:当结合缓冲液的浓度为40 mmol/L,洗脱缓冲液500 mmol/L时,SDS-PAGE电泳可观察到有单一目的条带,Western blot显示重组蛋白成功表达,双向琼脂扩散试验证实抗原抗体的结合比为1∶8,间接ELISA检测到抗体水平达到1∶12 800。重组蛋白XCL1能促进淋巴细胞的增殖,而此实验制备的多克隆抗体可以阻断这种效应。结论:体外表达的重组蛋白具有生物活性,制备的多克隆抗体为研究XCL1在猪体中的功能提供科技资料。

关键词： XCL1 纯化蛋白多克隆抗体间接ELISA MTT

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猪淋巴结PKR基因的克隆与体外初步表达

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2011年第9期39卷 1-6页

作者：孙岩胡健温俊歌郜原薄联锋徐志坤吴耀丽张德礼西北农林科技大学动物医学院病毒免疫与生物信息研究室兽医免疫学研究所农业部动物生物技术重点开放实验室生物信息学研究中心分子病毒免疫与肿瘤系统生物学研究组陕西杨凌712100

【目的】克隆猪淋巴结双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)基因,并在体外初步表达,为研究流感病毒感染时猪PKR与P58IPK在体内外的相互作用奠定基础。【方法】用Trizol法从猪淋巴结中提取总RNA,RT-PCR法扩增猪PKR基因的完整编码区,将该片段连接... 详细信息

【目的】克隆猪淋巴结双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)基因,并在体外初步表达,为研究流感病毒感染时猪PKR与P58IPK在体内外的相互作用奠定基础。【方法】用Trizol法从猪淋巴结中提取总RNA,RT-PCR法扩增猪PKR基因的完整编码区,将该片段连接到原核表达载体pGEX-4T-1和真核表达载体pDsRed1-N1中,采用SDS-PAGE检测原核表达载体pGEX-PKR在大肠杆菌BL21中的表达情况,用脂质体转染法将真核表达载体pD-sRed1-PKR转入猪脐静脉血管内皮细胞系(SUVECs),Western blot检测其在细胞中的表达。【结果】PCR扩增得到了1 754bp的DNA片段,与预期结果一致;原核表达载体pGEX-PKR和真核表达载体pDsRed1-PKR经双酶切和核酸测序分析,表明载体构建成功;SDS-PAGE检测结果表明,pGEX-PKR重组质粒在大肠杆菌中成功表达;Westernblot检测到pDsRed1-PKR重组质粒在SUVECs中成功表达。【结论】成功克隆了猪淋巴结PKR基因,并在体外初步表达成功。

关键词：猪PKR基因克隆原核表达真核表达

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西安秦岭野生动物园动物种群管理

价值工程 2019年第36期38卷 44-46页

作者：邵俊峰吴耀丽西安秦岭野生动物园

为了突显动物园核心资产品牌,实现动物种群可持续发展,我们围绕动物种群建设制定了五年规划,突出秦岭特色物种,加大优势种群建设,兼顾物种多样化,使我园动物种群规模、管理水平、展示效果达到国内先进水平,为我园科学管理物种提供了重... 详细信息

为了突显动物园核心资产品牌,实现动物种群可持续发展,我们围绕动物种群建设制定了五年规划,突出秦岭特色物种,加大优势种群建设,兼顾物种多样化,使我园动物种群规模、管理水平、展示效果达到国内先进水平,为我园科学管理物种提供了重要依据。

关键词：动物园动物种群管理

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股骨颈骨折术后并发症预防护理的效果观察

陕西医学杂志 2014年第2期43卷 254-254页

作者：王晓莉吴耀丽陕西省渭南市中医医院

股骨颈骨折是骨外科常见病之一，尤其是老年人，随着年龄增大骨质变得疏松、动作逐渐迟缓、肌力减退和稳定度差容易跌倒所致。而且骨折术后容易出现较多并发症，影响手术的治疗效果与术后康复进程。我院对73例老年人股骨颈骨折患者术后... 详细信息

股骨颈骨折是骨外科常见病之一，尤其是老年人，随着年龄增大骨质变得疏松、动作逐渐迟缓、肌力减退和稳定度差容易跌倒所致。而且骨折术后容易出现较多并发症，影响手术的治疗效果与术后康复进程。我院对73例老年人股骨颈骨折患者术后采用并发症的预防护理，现将观察结果报道如下。

关键词：股骨颈骨折手术后并发症预防与控制手术后并发症护理

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一例白虎急性胰腺炎病例分析

科技风 2020年第6期 221-221,229页

作者：吴耀丽邵俊峰西安秦岭野生动物园

白虎胰腺炎的发生非常少见,本文介绍白虎急性胰腺炎(AR)的发生过程及病因分析,为预防胰腺炎提出几点措施,旨在通过尽早发现、预防胰腺炎的发生。

关键词：白虎急性胰腺炎预防

“一带一路”背景下西北高校外语人才培养的现实困顿与实践路向

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西安外国语大学学报 2024年第2期32卷 37-42页

作者：高岩吴耀武西安外国语大学教育学院西安外国语大学高级翻译学院

“一带一路”倡议是中国主动应对全球形势、统筹国际国内大局做出的重大战略决策。“一带一路”倡议的实施离不开高水平的外语人才做支撑,而西北地区作为共建“一带一路”倡议实施的前沿地区,须抓住时代机遇,积极应对,针对共建“一带一... 详细信息

“一带一路”倡议是中国主动应对全球形势、统筹国际国内大局做出的重大战略决策。“一带一路”倡议的实施离不开高水平的外语人才做支撑,而西北地区作为共建“一带一路”倡议实施的前沿地区,须抓住时代机遇,积极应对,针对共建“一带一路”倡议实施中高校外语人才培养存在的问题,结合区域社会发展的实际需要,高校应该系统规划高校专业设置,科学开设外语课程,加强教师队伍建设,探索多元培养模式,提升外语人才培养质量,以期更好地为共建“一带一路”服务。

关键词： “一带一路”倡议高质量发展外语人才培养路径

夯实学生经验发展科学思维——以“欧姆定律”教学为例

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物理教师 2024年第6期45卷 43-46页

作者：葛汉洪吴耀东江苏省高邮市南海中学江苏扬州225600 江苏省宝应县广洋湖镇中心初级中学江苏扬州225800

经验和思维相互依存,密不可分,辩证统一,协同发展.教材在优化了欧姆定律得出过程的同时存在疏离学生经验的问题.梳理出问题的4个具体表现并给出各自的解决方案,夯实了学生经验,突破了教学难点,发展了学生科学思维.

关键词：科学思维欧姆定律导体

海水环境因素对网纹藤壶金星幼虫附着的影响机制

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中国腐蚀与防护学报 2024年

作者：吴进怡李强吴耀华柴柯潍坊科技学院智能制造学院山东省农机装备用材料工程高校特色实验室广东腐蚀科学与技术创新研究院

网纹藤壶是广泛分布在中国各海域及世界许多海域的大型污损生物。通过藤壶培养及附着观察探索了不同海水环境因素对网纹藤壶金星幼虫在生物相容性极佳的钛合金表面和玻璃表面附着的影响，结果表明p H值为8时金星幼虫在TC4钛合金表面的... 详细信息

网纹藤壶是广泛分布在中国各海域及世界许多海域的大型污损生物。通过藤壶培养及附着观察探索了不同海水环境因素对网纹藤壶金星幼虫在生物相容性极佳的钛合金表面和玻璃表面附着的影响，结果表明p H值为8时金星幼虫在TC4钛合金表面的附着率及在TC4钛合金表面和玻璃表面的整体附着率达到最大值，分别为10%和76.7%；盐度为25‰时，整体附着率达最大值73.3%，盐度在13-18‰之间，TC4钛合金表面附着率达最大值6.67%；温度和海水流速对网纹藤壶金星幼虫附着的影响也极为显著，当温度为10°C时不附着，当温度为25°C时，整体附着率达50%,TC4钛合金表面附着率达10%；当海水流速为0时，金星幼虫附着率最高，流速达12 m/s时，金星幼虫在钛合金表面和玻璃表面均无法附着。上述环境因素对网纹藤壶金星幼虫附着的影响，可为海洋防污损策略提供依据。

关键词：网纹藤壶金星幼虫环境因素钛合金附着率