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猕猴桃溃疡病病原菌MLVA分型引物的筛选及验证

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果树学报 2024年第6期41卷 1188-1198页

作者：姚令王海黄露安星宇陈文王莉爽薛原吴石平贵州省农业科学院植物保护研究所·农业农村部喀斯特山区作物基因资源与种质创新重点实验室贵阳550006 贵州省农业科学院农业科技信息研究所贵阳550006 贵州省烟草公司安顺市公司贵州安顺561000

【目的】筛选出一组可精准快速地对丁香假单胞菌猕猴桃致病变种(Pseudomonas syringae pv.actinidiae,Psa)进行分型的引物组合。【方法】针对前期文献已报道的34对引物,采用PCR技术验证该34对引物对中国Psa菌株的扩增效率及准确性;利用... 详细信息

【目的】筛选出一组可精准快速地对丁香假单胞菌猕猴桃致病变种(Pseudomonas syringae pv.actinidiae,Psa)进行分型的引物组合。【方法】针对前期文献已报道的34对引物,采用PCR技术验证该34对引物对中国Psa菌株的扩增效率及准确性;利用模拟PCR获取菌株串联重复(TR)数;以辛普森指数(Simpson’s index,SI)作为筛选引物组合的标准,基于R软件平台,筛选最优引物组合。【结果】34对引物对中国Psa扩增效果均良好,其中TR14与TR11II、TR19与Psa-01引物序列相同;TR8与Psa-08、TR39II与Psa-10、GM-1834与TR10I、GM-1553与TR64II、TR19Psa-01与TR19II扩增同一TR;Psa-09扩增产物串联重复单元长度不唯一,TR2II扩增产物侧翼变异较大,不能通过电泳确定串联重复数;最终确定SI值与全部引物组合相同的最低引物数量为9对,使用该9对引物的组合可将Psa已知的5种生物型准确分开。【结论】TR23/Psa-04、Psa-03、Psa-05、Psa-06、TR10IGM-1834、TR30I、TR1II、Psa-10TR39II、TR64IIGM-1553等9对引物可代表当前文献报道的34对引物,进行Psa分型研究,探索猕猴桃溃疡病的传播和流行规律,为病害防控策略的制定提供科学依据。

关键词：丁香假单胞菌猕猴桃致病变种多位点串联重复序列分析群体遗传结构引物筛选

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贵州火龙果病毒检测及侵染类型分析

中国果树 2024年第4期 89-95页

作者：李淳安星宇黄露吴石平王莉爽贵州省农业科学院植物保护研究所贵阳550009

为明确贵州省火龙果病毒种类和复合侵染类型,以及主产区病毒发生动态。采集贵州省罗甸县、望谟县、贞丰县、镇宁县火龙果果园的火龙果茎共703份,利用CVX、CVX-NTU、PiVX、ZyVX和SchVX特异性引物对疑似病毒病样品进行RT-PCR检测。结果表... 详细信息

为明确贵州省火龙果病毒种类和复合侵染类型,以及主产区病毒发生动态。采集贵州省罗甸县、望谟县、贞丰县、镇宁县火龙果果园的火龙果茎共703份,利用CVX、CVX-NTU、PiVX、ZyVX和SchVX特异性引物对疑似病毒病样品进行RT-PCR检测。结果表明:2021、2022年罗甸县火龙果病毒检出率分别为85.92%、94.90%,望谟县分别为93.48%、93.90%,贞丰县分别为90.99%、99.02%,镇宁县分别为94.52%、94.17%;其中,望谟县在2021年未检出SchVX,2022年则有了较高的检出率(均为复合侵染),表明该病毒在望谟县扩散传播。2021、2022年罗甸县火龙果病毒复合侵染检出率分别为83.10%、90.82%,望谟县分别为93.48%、87.80%,贞丰县分别为90.09%、99.02%,镇宁县分别为93.15%、93.34%。从复合侵染的类型看,2种病毒复合侵染有9种类型,3种病毒复合侵染有10种类型,4种病毒复合侵染有5种类型,另有5种病毒复合侵染的类型。贵州省火龙果的病毒侵染以几种PVX属病毒复合侵染为主,且已在贵州省火龙果主产区大面积发生。

关键词：火龙果病毒检测复合侵染

丁香假单胞菌猕猴桃致病变种鞭毛基因fliS的功能分析

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分子植物育种 2022年

作者：吴莲莲黄露安星宇姚令吴石平贵州大学农学院贵州省农业科学院植物保护研究所

为了明确猕猴桃溃疡病菌对猕猴桃的致病基因，本研究采取基因敲除技术鉴定fliS基因的功能。结果表明：ΔfliS菌株的致病力下降70.00%，运动性减弱27.94%，生物膜形成能力增强103.68%，以及生长速率降低；回补之后相关性状得到恢复。RT-q...

为了明确猕猴桃溃疡病菌对猕猴桃的致病基因，本研究采取基因敲除技术鉴定fliS基因的功能。结果表明：ΔfliS菌株的致病力下降70.00%，运动性减弱27.94%，生物膜形成能力增强103.68%，以及生长速率降低；回补之后相关性状得到恢复。RT-qPCR结果显示，缺失fliS后，fliE、flgJ、fliO、fliP表达量分别上调9.16、3.52、2.93、1.40倍，而fliJ表达量略有下调；回补之后，各基因的表达量均恢复至野生型表达水平。本研究明确了丁香假单胞菌猕猴桃致病变种鞭毛基因fliS的生物学功能，为解析猕猴桃溃疡病的致病机制提供理论依据。

关键词：

云南省昆明市玉米白斑病病原菌鉴定及致病性测定

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玉米科学 2023年

作者：赵玳琳吴石平何海永吴迅谭清群李继业陈泽辉贵州省农业科学院旱粮研究所贵州省农业科学院植物保护研究所

为确定云南省昆明市玉米白斑病的病原菌种类，本研究以石林县和宜良县采集的典型玉米白斑病病叶为对象，采用组织分离、活体接种、形态学和分子生物学鉴定方法，分别对病叶进行病原菌分离纯化、分离物致病性测定以及病原菌种类鉴定。结... 详细信息

为确定云南省昆明市玉米白斑病的病原菌种类，本研究以石林县和宜良县采集的典型玉米白斑病病叶为对象，采用组织分离、活体接种、形态学和分子生物学鉴定方法，分别对病叶进行病原菌分离纯化、分离物致病性测定以及病原菌种类鉴定。结果共分离得到15株菌株，致病性测定结果表明，其中9株为致病菌，且菌株SL-56-2、JX-E466-15和JX-E600-1的致病性最强，发病最快，能使玉米叶片产生典型白斑症状；菌株JX-E466-13、JX-E466-12和SL-547-3能使玉米叶片产生黄白色小病斑，菌株JX-E102-1、SL-24-8和SL-24-3能使玉米叶片产生稍大黄白色病斑，但这些菌株的致病性均不强。形态学及基于ITS、RPB2和TUB2基因序列构建的系统发育树分析结果显示，菌株SL-56-2、JX-E466-15和JX-E600-1为高粱附球孢菌Epicoccum sorghinum，菌株JX-E466-13、JX-E466-12和SL-547-3为附球菌属（Epicoccum spp. Link）未定种，菌株JX-E102-1、SL-24-8和SL-24-3为Epicoccum dendrobii。这些研究结果表明，引起昆明市玉米白斑病的病原菌有3种，其中高粱附球孢菌E. sorghinum为优势致病种，由E. dendrobii引起的玉米白斑病属首次报道。

关键词：玉米白斑病 Epicoccum sorghinum Epicoccum dendrobii 致病性测定形态学鉴定分子鉴定

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对个体户纳税心理障碍的分析

经济与管理研究 1990年第1期 47-51页

作者：吴石平

整顿个体工商户纳税秩序,加强税收征管,有效地制止偷税漏税行为,是当前税收工作的一项重要任务,也是解决社会分配不公的一项重大措施。本文拟从克服个体工商户纳税心理障碍方面进行一些探讨,以飧读者。

关键词：个体户工作人员建帐税收政策税务干部财政政策税收工作心理障碍

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贵州芒果炭疽菌种类鉴定及表型特征分析

现代园艺 2023年第16期46卷 1-3页

作者：姚令吴石平陈小均黄海陈文贵州省农业科学院植物保护研究所贵州贵阳550006 贵州省农业科学院亚热带作物研究所贵州兴义562400

为明确贵州芒果叶斑病病原炭疽菌(Colletotrichum spp.)的种类及表型特征,在贵州芒果主产区望谟县、安龙县和贞丰县等地采集芒果叶斑病标样及分离菌株,对其内转录间隔区、机动蛋白、β-微管蛋白、几丁质合成酶1、3-磷酸甘油醛脱氢酶等... 详细信息

为明确贵州芒果叶斑病病原炭疽菌(Colletotrichum spp.)的种类及表型特征,在贵州芒果主产区望谟县、安龙县和贞丰县等地采集芒果叶斑病标样及分离菌株,对其内转录间隔区、机动蛋白、β-微管蛋白、几丁质合成酶1、3-磷酸甘油醛脱氢酶等多个基因的序列进行系统学分析,测定不同炭疽菌的菌落形态、分生孢子大小、菌丝生长速率等特征。结果表明,引起贵州芒果叶斑病的病原炭疽菌种类有Colletotrichum asianum、C.fructicola和C.siamense,其中C.asianum和C.fructicola为主要为害种类,C.asianum的菌丝生长速率和分生孢子长度均显著大于C.fructicola和C.siamense,C.fructicola侵染叶片造成病斑扩展速度最快。

关键词：芒果炭疽病炭疽菌系统发育学分析表型特征鉴定

猕猴桃溃疡病菌侵染过程中鞭毛基因的转录组表达分析

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生物过程 2022年第2期12卷 106-115页

作者：吴莲莲黄露安星宇吴石平贵州大学农学院贵阳贵州贵州省农业科学院植物保护研究所贵阳贵州

为了发掘猕猴桃溃疡病菌的致病相关基因,利用(RNA sequencing, RNA-Seq)技术对接菌不同时间点的猕猴桃与溃疡病菌进行互作转录组测序分析。结果表明:共获得101.01 Gb Clean Data,各样品Clean Data均达到4.85 Gb以上,Q30碱基百分比在96.... 详细信息

为了发掘猕猴桃溃疡病菌的致病相关基因,利用(RNA sequencing, RNA-Seq)技术对接菌不同时间点的猕猴桃与溃疡病菌进行互作转录组测序分析。结果表明:共获得101.01 Gb Clean Data,各样品Clean Data均达到4.85 Gb以上,Q30碱基百分比在96.77%以上。其中与鞭毛相关并表达的差异基因有31个。鞭毛相关差异表达基因GO注释表明参与细胞过程的基因数目最多,细胞组分和分子功能次之;鞭毛相关差异表达基因KEGG通路分析表明差异基因的注释以细胞运动为主。经qRT-PCR检测表明,5个随机选择的差异表达基因表达量变化与转录组测序结果基本一致。本研究结果对猕猴桃溃疡病致病基因发掘具有重要的理论指导和实践意义。

关键词：猕猴桃溃疡病菌转录组鞭毛基因

贵州红阳猕猴桃棒孢叶斑病病原菌分离鉴定及防治药剂筛选

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中国果树 2023年第5期 84-87,97页

作者：黄露安星宇熊鑫姚令何海永吴石平贵州省农业科学院植物保护研究所贵阳550009 贵州医科大学贵州大学

为明确贵州省红阳猕猴桃叶片上一种病害的病原菌,对病叶采用组织分离法分离得到6株病菌,通过ITS、EF-1α、β-tubulin基因进行多基因分子鉴定,6株病菌均为多主棒孢霉Corynespora cassiicola(Berk.&M.A.Curtis)C.T.Wei。采用菌丝生长速... 详细信息

为明确贵州省红阳猕猴桃叶片上一种病害的病原菌,对病叶采用组织分离法分离得到6株病菌,通过ITS、EF-1α、β-tubulin基因进行多基因分子鉴定,6株病菌均为多主棒孢霉Corynespora cassiicola(Berk.&M.A.Curtis)C.T.Wei。采用菌丝生长速率法测定了10种杀菌剂对病原菌的抑菌效果,其中45%咪鲜胺微乳剂、20%咪鲜·嘧菌酯悬浮剂、30%吡唑醚菌酯悬浮剂、250 g/L丙环唑乳油、50%唑醚·喹啉铜水分散粒剂、10%苯醚甲环唑水分散粒剂的抑菌效果较好,EC50分别为0.52、0.88、2.56、2.94、4.80、4.90 mg/L。同时对6种杀菌剂进行了田间药效试验,结果表明20%咪鲜·嘧菌酯悬浮剂800倍液、10%苯醚甲环唑水分散粒剂750倍液、50%唑醚·喹啉铜水分散粒剂1500倍液、45%咪鲜胺微乳剂1500倍液防效较好,防效分别为80.86%、79.54%、76.86%、76.17%,可用于田间防治由多主棒孢霉引起的猕猴桃棒孢叶斑病。

关键词：猕猴桃棒孢叶斑病鉴定药剂筛选

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贵州玉米灰斑病病原鉴定与抗病品种筛选

中国植保导刊 2022年第6期42卷 45-49页

作者：安星宇黄露吴石平何海永赵玳琳李淳贵州省植物保护研究所贵州贵阳550006

为明确贵州玉米种植区所发生的灰斑病的病原种类,在贵州省毕节市、贵阳市、安顺市、六盘水市以及黔南州采集病样,单孢分离得到菌株,扩增ITS序列对其进行鉴定。结果表明,贵州玉米灰斑病菌为玉米尾孢(Cercospora zeina)。对95个玉米品种... 详细信息

为明确贵州玉米种植区所发生的灰斑病的病原种类,在贵州省毕节市、贵阳市、安顺市、六盘水市以及黔南州采集病样,单孢分离得到菌株,扩增ITS序列对其进行鉴定。结果表明,贵州玉米灰斑病菌为玉米尾孢(Cercospora zeina)。对95个玉米品种进行了灰斑病抗性鉴定,结果显示有9个品种为高抗品种、22个品种为抗病品种、37个品种为中抗品种、27个品种为感病品种,可为贵州玉米种植区灰斑病的综合防控提供依据。

关键词：玉米灰斑病玉米尾孢品种抗病性