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与拟除虫菊酯抗性相关的烟粉虱钠通道基因突变及其检测

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昆虫学报 2004年第4期47卷 449-453页

作者：王利华吴益东南京农业大学植物保护学院昆虫系

通过RT_PCR克隆了烟粉虱Bemisiatabaci(Gennadius)南京种群 (B 生物型 )的钠离子通道结构域ⅡS4 - 6cDNA片段 ,证实了与拟除虫菊酯抗性相关的是位于第 92 5位亮氨酸到异亮氨酸的突变 (L92 5I) ,并建立了L92 5I突变的PASA检测技术。与SU... 详细信息

通过RT_PCR克隆了烟粉虱Bemisiatabaci(Gennadius)南京种群 (B 生物型 )的钠离子通道结构域ⅡS4 - 6cDNA片段 ,证实了与拟除虫菊酯抗性相关的是位于第 92 5位亮氨酸到异亮氨酸的突变 (L92 5I) ,并建立了L92 5I突变的PASA检测技术。与SUD_S敏感品系相比 ,2 0 0 2年采自南京棉花上的烟粉虱种群对氯氰菊酯具有 77倍的抗性 ,用氯氰菊酯对该种群进行多次筛选后 ,该种群对氯氰菊酯的抗药性提高到 2 2 7倍。PASA检测结果表明筛选后的南京种群中 10 0 %个体都具有L92 5I突变 (6 1 1%的个体为L92 5I突变纯合子 ,38 9%的个体为杂合子 ) ,而未筛选的南京种群只有 75 %个体具有L92 5I突变 (35 %个体为L92 5I突变纯合子 ,4 0 %的个体为杂合子 ,2 5 %的个体为野生型 )。该结果表明了烟粉虱钠离子通道L92 5I突变与对拟除虫菊酯抗性密切相关。

关键词：烟粉虱拟除虫菊酯抗药性钠离子通道基因突变

不同种群棉铃虫三龄幼虫酯酶活性频率分布与抗药性的关系

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昆虫学报 2002年第6期45卷 733-738页

作者：陈松杨亦桦吴益东南京农业大学植物保护学院昆虫学系农业部农业病虫监测与治理重点开放实验室南京210095

选用室内饲养的棉铃虫Helicoverpaarmigera偃师和湖北 2个敏感品系、对辛硫磷高抗的PCP2 0品系、对氰戊菊酯高抗的YG4 5品系及 1999或 2 0 0 0年采自山东阳谷、河北邯郸和河南安阳的田间高抗种群 ,江苏徐州、湖北武汉的田间中等抗性水... 详细信息

选用室内饲养的棉铃虫Helicoverpaarmigera偃师和湖北 2个敏感品系、对辛硫磷高抗的PCP2 0品系、对氰戊菊酯高抗的YG4 5品系及 1999或 2 0 0 0年采自山东阳谷、河北邯郸和河南安阳的田间高抗种群 ,江苏徐州、湖北武汉的田间中等抗性水平种群和新疆沙湾的田间敏感种群 ,采用酶标板酶动力学法测定了各品系 (种群 )的 3龄幼虫个体酯酶活性频率分布和平均酯酶活性。结果表明 ,偃师敏感品系、湖北敏感品系和新疆沙湾田间敏感种群的酯酶活性个体频率分布相似 ,三个品系 (种群 )的平均酯酶活性相近 ,分别为 991、 1138、 10 5 5mOD·min- 1 ·larva- 1 。室内选育的PCP2 0抗性品系、YG4 5抗性品系及山东阳谷、河北邯郸、河南安阳田间高抗种群的高酯酶活性 (活性在 180 0mOD·min- 1 ·larva- 1 以上 )个体频率明显高于三个敏感品系 (种群 ) ,平均酯酶活性在 15 10～ 2 4 82mOD·min- 1 ·larva- 1 之间。江苏徐州、湖北武汉的田间中抗水平种群高酯酶活性个体频率及平均酯酶活性都介于敏感和高抗品系 (种群 )之间 ,平均酯酶活性为 12 5 8～ 14 0 4mOD·min- 1 ·larva- 1 。棉铃虫各品系 (种群 )平均酯酶活性与对拟除虫菊酯类杀虫剂抗性个体频率的相关性要比对有机磷类的高 ,相关系数分别为 0 82和 0 4 2。分?

关键词：种群棉铃虫三龄幼虫酯酶活性频率分布抗药性生化检测

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棉铃虫抗药性及其治理 1

1995年

作者：沈晋良吴益东

本书作者根据10多年攻关研究期间棉铃虫抗药性的研究结果，并收集了国内外有关棉铃虫抗药性研究的成果和进展，将本书分为国内外棉铃虫的分布、发生及为害；抗药性概况；抗药性研究方法；抗药性机理；抗药抗性形成及发展规律。

ISBN: (纸本)7109041166

关键词：棉铃虫抗药性

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汇雅图书（南通市图书馆）

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铃虫对氰戊菊酯抗性和敏感品系的选育

昆虫学报 1994年第2期37卷 129-136页

作者：吴益东沈晋良尤子平南京农业大学植保系

用氰戊菊酯对来自阳谷的棉铃虫（ＹＧ）Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓａｒｍｉｇｅｒａ（Ｈｕｂｎｅｒ）进行抗性品系的筛选。在１５代期间经过９代的室内选育，获得抗性品系（Ｆｅｎ－Ｒ），抗性倍数高达２４６３倍，筛选后Ｆ１，代ＬＤ５０值（... 详细信息

用氰戊菊酯对来自阳谷的棉铃虫（ＹＧ）Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓａｒｍｉｇｅｒａ（Ｈｕｂｎｅｒ）进行抗性品系的筛选。在１５代期间经过９代的室内选育，获得抗性品系（Ｆｅｎ－Ｒ），抗性倍数高达２４６３倍，筛选后Ｆ１，代ＬＤ５０值（２４．１４１２ｇ／头）比筛选前Ｆ１代ＬＤ５０值（０．２０２０　ｇ／头）提高了１１９．５倍。对来自偃师的棉铃虫（ＹＳ）进行了连续两代单对筛选，得到敏感品系（Ｆｅｎ－Ｓ），敏感品系的ＬＤ５０值为０．０１１６ｇ／头，接近１９８３年东台敏感品系的ＬＤ５０值（０．００９８ｇ／头）。Ｆｅｎ－Ｒ抗性品系筛选前后分别测定了七种杀虫剂的剂量－死亡回归线，发现Ｆｅｎ－Ｒ抗性品系对溴氰菊酯［ＬＤ５０（Ｆｅｎ－Ｒ）ＬＤ５０（ＹＧ）＝５．２Ｘ］和氯氰菊酯（２．５Ｘ）具有一定程度的交互抗性；而对功夫菊酯（０．６６Ｘ），氯菊酯（０．８７Ｘ）、灭多威（０．７４Ｘ）及久效磷（１．５Ｘ）没有交互抗性。氰戊菊酯加Ｐｂ的增效试验结果表明棉铃虫对氰戊菊酯的抗性主要是由于多功能氧化酶的代谢作用。毒理学资料还暗示抗性为多因子（基因）的。

关键词：棉铃虫氰戊菊酯抗性品系抗药性

kdr突变和解毒代谢在B型烟粉虱对高效氯氰菊酯抗性中的作用

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昆虫学报 2008年第3期51卷 277-283页

作者：王利华吴益东南京农业大学植物保护学院昆虫学系农业部病虫监测与治理重点开放实验室南京210095

本研究明确了kdr突变和解毒代谢在B型烟粉虱Bemisia tabaci对高效氯氰菊酯抗性中的作用。B型烟粉虱NJ品系相对于烟粉虱敏感品系(SUD-S,非B型)对高效氯氰菊酯有266倍的抗性。对NJ品系用高效氯氰菊酯进行群体筛选获得抗性为811倍的NJ-R1品... 详细信息

本研究明确了kdr突变和解毒代谢在B型烟粉虱Bemisia tabaci对高效氯氰菊酯抗性中的作用。B型烟粉虱NJ品系相对于烟粉虱敏感品系(SUD-S,非B型)对高效氯氰菊酯有266倍的抗性。对NJ品系用高效氯氰菊酯进行群体筛选获得抗性为811倍的NJ-R1品系,对NJ品系进行单对交配筛选获得抗性达2634倍的NJ-R2品系。在NJ,NJ-R1和NJ-R2品系间,酯酶、多功能氧化酶和谷胱甘肽S-转移酶活性无显著差异,说明在筛选过程中解毒代谢没有发生变化。PASA检测结果表明,NJ-R2品系钠离子通道基因L925I突变(kdr突变)频率为100%,NJ-R1品系为80.6%,NJ品系为55%。由此可见,kdr突变频率的增加是B型烟粉虱种群对高效氯氰菊酯抗性上升的主要原因。在NJ,NJ-R1和NJ-R2品系中,增效醚(PBO)对高效氯氰菊酯的增效作用均为20倍左右,而PBO对SUD-S品系没有任何增效作用。PBO能同时抑制烟粉虱的多功能氧化酶和酯酶,通过与TPP增效作用进行对比表明,在B型烟粉虱中PBO所产生的增效作用主要来源于对酯酶的抑制。因此,B型烟粉虱品系(NJ-R2,NJ-R1和NJ)与非B型SUD-S品系相比存在20倍左右的先天抗性,该先天抗性主要与B型烟粉虱的特有酯酶有关。在B型烟粉虱品系对高效氯氰菊酯的抗性中,抗性水平完全由kdr突变频率高低所决定。

关键词： B型烟粉虱高效氯氰菊酯抗药性解毒代谢 kdr突变

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绿盲蝽和中黑盲蝽解毒代谢酶活性的检测

南京农业大学学报 2010年第5期33卷 40-44页

作者：武淑文蒲鑫吴益东南京农业大学植物保护学院/农业部作物病虫害监测与防控重点开放实验室江苏南京210095

害虫解毒代谢增强是对杀虫剂产生抗性的重要机制。为此,本研究建立了Bt棉田重要害虫绿盲蝽和中黑盲蝽成虫多功能氧化酶、酯酶和谷胱甘肽S转移酶3种解毒酶活性的测定方法。研究结果表明:以DCNB(1,2二氯4硝基苯)为底物,不能检测到棉盲蝽... 详细信息

害虫解毒代谢增强是对杀虫剂产生抗性的重要机制。为此,本研究建立了Bt棉田重要害虫绿盲蝽和中黑盲蝽成虫多功能氧化酶、酯酶和谷胱甘肽S转移酶3种解毒酶活性的测定方法。研究结果表明:以DCNB(1,2二氯4硝基苯)为底物,不能检测到棉盲蝽谷胱甘肽S转移酶的活性;棉盲蝽多功能氧化酶活性也不宜选用动力学法进行测定。同时2种棉盲蝽成虫的日龄对解毒酶活性影响不明显。因此,对由不同日龄成虫组成的棉盲蝽田间种群可以直接进行解毒酶活性的检测。

关键词：绿盲蝽中黑盲蝽多功能氧化酶酯酶谷胱甘肽S转移酶

棉铃虫对氰戊菊酯-辛硫磷混剂的抗性演化及解毒酶活性变化

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昆虫学报 2006年第2期49卷 247-253页

作者：杨恩会林雁吴益东南京农业大学植物保护学院昆虫学系农业部病虫监测与治理重点开放实验室南京210095

用氰戊菊酯-辛硫磷混剂(有效成分1∶10,简称氰-辛混剂)对棉铃虫Helicoverpaarmigera室内品系(YS)进行16代的抗性选育,获得棉铃虫对氰-辛混剂的抗性品系(YS-FP)。YS-FP品系与YS品系相比,对氰-辛混剂的抗性为14.7倍,对其中的单剂氰戊菊酯... 详细信息

用氰戊菊酯-辛硫磷混剂(有效成分1∶10,简称氰-辛混剂)对棉铃虫Helicoverpaarmigera室内品系(YS)进行16代的抗性选育,获得棉铃虫对氰-辛混剂的抗性品系(YS-FP)。YS-FP品系与YS品系相比,对氰-辛混剂的抗性为14.7倍,对其中的单剂氰戊菊酯和辛硫磷的抗性分别为2170倍和3.1倍。随着筛选的进行,氰戊菊酯和辛硫磷之间的共毒系数在F2代出现短暂的增加,然后逐渐降低,它们之间的互作由增效变为拮抗。交互抗性测定结果表明,YS-FP品系对氯氰菊酯、溴氰菊酯、三氟氯氰菊酯、三唑磷和灭多威产生了明显的交互抗性,对硫丹、多杀菌素和爱玛菌素没有产生交互抗性。YS-FP品系6龄幼虫中肠细胞色素P450氧化酶甲氧基香豆素O-脱甲基活性为YS品系的10倍,3龄幼虫谷胱甘肽S-转移酶和酯酶活性分别是YS品系的1.7倍(CDNB结合作用)和2.4倍(α-NA酯酶水解作用)。氰-辛混剂的筛选导致了棉铃虫多种解毒酶活性的增加,特别是细胞色素P450氧化酶活性增强最为明显。本研究结果表明氰-辛混剂对棉铃虫的筛选导致了广谱的交互抗性和多种代谢抗性机理,并且两个单剂之间的互作由增效变为拮抗,因此氰-辛混剂在棉铃虫抗性治理中的作用是有限的和暂时的。

关键词：棉铃虫氰戊菊酯辛硫磷混剂抗性演化交互抗性解毒酶活性

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棉铃虫对氰戊菊酯抗性遗传分析

昆虫学报 1995年第1期38卷 20-24页

作者：吴益东沈晋良尤子平南京农业大学植保系

本文采用剂量对数－死亡机率值回归线（ＬＤ－Ｐ线）分析法，利用室内选育的棉铃虫ＨＥＬＩＣＯＶＥＲＰＡＡＲＭＩＧＥＲＡ（Ｈｕｂｎｅｒ）对氰戊菊酯抗性品系和敏感品系，研究了棉铃虫对氰戊菊酯的抗性遗传规律。结果表明，棉铃虫对... 详细信息

本文采用剂量对数－死亡机率值回归线（ＬＤ－Ｐ线）分析法，利用室内选育的棉铃虫ＨＥＬＩＣＯＶＥＲＰＡＡＲＭＩＧＥＲＡ（Ｈｕｂｎｅｒ）对氰戊菊酯抗性品系和敏感品系，研究了棉铃虫对氰戊菊酯的抗性遗传规律。结果表明，棉铃虫对氰戊菊酯的抗性为多基因遗传，其主要基因为不完全显性，抗性不属性连锁遗传。利用增效剂对抗性机理进行的研究表明，多功能氧化酶（ＭＦＯ）是棉铃虫对氰戊菊酯产生抗药性的主要因子，因此。

关键词：棉铃虫氰戊菊酯抗性遗传

异色瓢虫nAChRα6基因的敲除及其对杀虫剂敏感性的影响

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植物保护学报 2020年第3期47卷 478-487页

作者：刘帅王兴亮施雨石旺鹏吴益东南京农业大学植物保护学院南京210095 中国农业大学植物保护学院北京100193

为探索天敌昆虫异色瓢虫Harmonia axyridis基因功能研究的新技术及遗传改良的新途径,以其烟碱型乙酰胆碱受体α6亚基(nAChRα6)作为靶标基因,利用CRISPR/Cas9技术在异色瓢虫CAU-S品系中对其进行敲除,并测定多杀菌素、吡虫啉与阿维菌素... 详细信息

为探索天敌昆虫异色瓢虫Harmonia axyridis基因功能研究的新技术及遗传改良的新途径,以其烟碱型乙酰胆碱受体α6亚基(nAChRα6)作为靶标基因,利用CRISPR/Cas9技术在异色瓢虫CAU-S品系中对其进行敲除,并测定多杀菌素、吡虫啉与阿维菌素对敲除纯合品系Haα6KO和野生型品系CAU-S的毒力,分析该基因的敲除是否影响异色瓢虫对这3种杀虫剂的敏感性。结果显示,通过CRISPR/Cas9介导的基因编辑及分子标记辅助筛选,成功获得异色瓢虫nAChRα6基因5号外显子缺失8 bp的敲除纯合品系Haα6KO。相对于野生型品系CAU-S,多杀菌素、吡虫啉与阿维菌素对敲除纯合品系Haα6KO的毒力指数分别为1.12、0.91和1.04,且3种杀虫剂对这2个品系的LC50的95%置信限无显著差异,表明异色瓢虫nAChRα6可能不是上述3种杀虫剂的作用靶标。本研究成功建立的CRISPR/Cas9介导的异色瓢虫基因编辑体系,可用于其基因功能研究及遗传改良。

关键词：异色瓢虫 CRISPR/Cas9 烟碱型乙酰胆碱受体基因敲除多杀菌素