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几种无融合苹果砧木离体再生及其遗传转化体系的建立

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几种无融合苹果砧木离体再生及其遗传转化体系的建立

作者：吴瑞刚山东农业大学

学位级别：硕士

栽培苹果主要通过嫁接繁殖，砧木是苹果抗逆性、生长发育及产量和品质形成的基础，砧木的繁育和遗传改良是苹果生产中的重要工作之一，而砧木离体材料的高效再生及其遗传转化体系的建立，可为砧木材料扩繁及遗传改良奠定基础。本研究选... 详细信息

栽培苹果主要通过嫁接繁殖，砧木是苹果抗逆性、生长发育及产量和品质形成的基础，砧木的繁育和遗传改良是苹果生产中的重要工作之一，而砧木离体材料的高效再生及其遗传转化体系的建立，可为砧木材料扩繁及遗传改良奠定基础。本研究选择平邑甜茶、锡金海棠、‘小金三号’、‘青砧一号’及平邑甜茶突变体和杂种后代等几种无融合砧木，通过对再生因素的选择与优化，建立了它们离体材料的高效再生体系及锡金海棠的遗传转化体系。主要结果如下： 1．锡金海棠子叶及叶片离体高效再生体系的建立锡金海棠近轴端子叶的再生频率是远轴端的1.5倍。最佳暗培养时间为14d。诱导愈伤组织最佳培养基：SC+2.0mg·LTDZ+0.1mg·LNAA;愈伤组织分化的最佳培养基：SC+1.5mg·LTDZ+0.1mg·LNAA;增殖培养基：SC+2.0mg·LBA+0.2mg·LNAA，平均的增殖倍数为3.2。将叶片垂直于主脉横切数刀，近轴面接触培养基，最佳分化培养基：SC+6.0mg·LBA+0.5mg·LNAA+0.2mg·LZT，再生频率达100%;最佳生根培养基：1/2MS+1.0mg·LIBA+20g·L蔗糖＋6.0g·L琼脂(pH为5.8);炼苗后，移入V珍珠岩：V花生壳：V草炭=1：1：1的基质中，20天后移栽成活率高达90%。 2.‘青砧一号’离体叶片高效再生体系的建立远轴面接触培养基比近轴面再生频率高，最佳分化培养基：MS+5.0mg·L6-BA+0.3mg·LNAA，叶片再生频率达70%，平均再生芽数为1.9;最佳暗培养时间为14d;最佳继代增殖培养基：MS+1.0mg·LBA+0.1mg·LIAA+蔗糖20g·L+琼脂6.0g·L(pH为6.2)，不定芽的增殖倍数为2.7;最佳生根培养基：1/2MS+1.0mg·LIAA+蔗糖20g·L+琼脂6.0g·L(pH为6.2)，生根率达100%，平均生根数达5.7条。 3.‘小金三号’子叶不定芽的诱导分化及植株再生 ‘小金三号’近轴端子叶的再生频率较高;最佳不定芽诱导分化培养基：SC+TDZ1.5mg·L+NAA0.1mg·L，子叶再生频率最高可达60%，平均再生芽数为2.2。最佳暗培养时间为21d;最佳继代增殖培养基：MS+1.0mg·LBA+0.1mg·LIBA+蔗糖20g·L+琼脂6.0g·L(pH为6.2);最佳生根培养基：1/2MS+1.0mg·LIBA+蔗糖20g/L+琼脂6.0g·L(pH为6.2)，生根率达84.2%，平均生根数达14.2条。 4.平邑甜茶及其突变体和杂交后代不定芽的诱导分化平邑甜茶子叶最佳不定芽诱导分化培养基：SC+2.0mg·L6-BA+0.2mg·LNAA，叶片再生频率达83.3%，平均再生芽数为2.6个。平邑甜茶的突变体C3和其杂交后代314均在附加0.5mg·L6-BA、0.3mg·LNAA时再生频率达到最高，分别为65%，50%;平均再生芽数分别为2.69，1.2。以C3为试材，TDZ的再生效应高于6-BA，当NAA浓度为0.3mg·L，TDZ浓度为2.0mg·L时，再生频率高达83.3%，平均再生芽数为1.6个。 5.锡金海棠遗传转化体系的初步建立以锡金海棠的叶片为外植体，预培养2-3d，在菌液中(OD600=0.4)浸泡5-8min，共培养2-3d后转入附加400mg·LCef的再生培养基中进行抑菌培养，暗培养结束后转至光下培养，诱导分化出不定芽后，转至附加5mg·LKan的分化培养基上初步选择，继而在附加40mg·LKan的增殖培养基上进一步抗性筛选，得到抗性植株。 6.嘎啦遗传转化体系的优化与完善嘎啦叶片在MS+5.0mg·LBA+0.4mg·LNAA培养基上预培养2-3天，菌液(OD600=0.2-0.3)中浸染20min(AS浸染前4-6h加入)，共培养3d，转至附加200mg·LCef的再生培养基抑菌培养，暗培养结束后置于光下培养，分化出不定芽后，将不定芽转至附加10mg·LKan、250mg·LCef的增殖培养基进行增殖培养，待幼苗长到一定高度，置于附加40mg·LKan、200mg·LCef的增殖培养基上进行抗性筛选，获得抗性植株并进行分子相关检测。 7．平邑甜茶遗传转化体系的建立平邑甜茶子叶在MS+2.0mg·L6-BA+0.2mg·LNAA培养基上预培养2-3d，菌液(OD600=0.5)浸染5-8min，共培养5d，暗培养结束后转移至光下培养，初期在附加400mg·LCef的分化培养基上抑菌培养，待幼苗长到一定高度后，转至附加20mg·LKan、400mg·LCef的分化培养基进行抗性筛选，获得抗性植株。 8.遗传转化体系的验证通过根癌农杆菌介导法，将DAD基因分别导入锡金海棠、嘎啦中，获得抗性再生植株，通过Kan抗性生物学检测和PCR鉴定

关键词：离体再生遗传转化农杆菌介导无融合生殖

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我国债券市场流动性研究

我国债券市场流动性研究

作者：吴瑞刚浙江大学

学位级别：硕士

流动性是债券市场的生命力所在,也是衡量债券市场质量的重要指标,充足的债券市场流动性对我国债券市场的持续健康发展意义重大,同时也是投资者能够自由买卖的保障。从上世纪70年代以来,西方各国债券余额占GDP比重不断上升,相关理论与实... 详细信息

流动性是债券市场的生命力所在,也是衡量债券市场质量的重要指标,充足的债券市场流动性对我国债券市场的持续健康发展意义重大,同时也是投资者能够自由买卖的保障。从上世纪70年代以来,西方各国债券余额占GDP比重不断上升,相关理论与实践成果层出不穷,对经济、金融产生了巨大的影响。而在我国,由于历史原因,对于债券市场的相关研究与实践长期处于空白状态,直到80年代初期,我国才开始逐渐恢复发行债券,尤其是90年代进入市场经济时代以后,我国债券的发行规模日益扩大,无论是一级市场的发行规模、发行方式、期限结构、品种类型,还是二级市场的组织形式、交易制度、参与者结构以及交易品种,都取得了巨大进展,但是长期以来,我国金融体系发展不平衡,直接融资比例过低,债券市场发展还是相对滞后。由于债券市场兼具货币市场和资本市场的特性,宏观涉及到中央银行进行公开市场操作、利率市场化进程等一系列宏观经济政策的制定和实施,中观到公司企业的生产经营和投融资策略、改善资本结构、有效利用财务杠杆,微观到公民个人的理财方案的选择,全社会经济生活都与债券市场的运作相关,债券市场的重要性可见一斑,然而与此相对的是无论是理论上还是实践中,我国对债券市场的研究探讨还不够充分,而流动性又是债券市场能够快速发展的关键所在。当前,我国债券市场发展的一个薄弱环节就是债券市场流动性较差,因此,发展债券市场,就有必要对债券市场流动性进行研究,分析影响债券市场流动性的因素,找到提升债券市场流动性水平的途径,创造出有利于债券市场流动性水平提升的市场机制和市场环境,流动性的提高不仅有助于保证整个金融市场的正常运行,还有利于提高资源配置和经济增长。本文围绕如何提升我国债券市场流动性展开,首先介绍了我国债券市场的现状;然后对我国债券市场流动性进行了实证测度,分析了债券市场流动性个别时期产生波动的原因;再后对影响我国债券市场流动性的三个主要因素进行了分析研究,找出发展方向以提升债券市场流动性;最后阐述了提升我国债券市场流动性的政策和建议。主要的工作和结论如下：1.介绍了我国债券市场的概况,使我们对所研究流动性的债券市场的规模、券种结构、成交状况、市场格局有一定的了解。2.对我国债券市场整体的流动性采用换手率指标进行了实证测度,选用2002年1月到2015年12月的数据做为样本,对2012-2013年债券市场流动性出现下降情况的原因进行了分析。3.根据实证测度过程中的分析,总结出影响我国债券市场流动性的市场因素和制度因素,选择影响我国债券市场流动性的三个主要因素债券市场投资者结构、债券产品创新、做市商制度做了一定的研究和总结,指出了发展方向以提升我国债券市场的流动性。对当前我国债券市场投资者结构失衡和投资需求趋同的因素进行了分析;介绍了我国发展中小企业私募债的发展前景和影响,通过与美国高收益债券的对比,总结了美国高收益债券的发展经验,指出了我国中小企业私募债的发展方向;对资产证券化业务发展的机遇进行了详细的分析,指出了我国资产证券化的发展方向;为促进国债期货市场和交易所债券现货市场的良性互动发展,提升我国债券市场流动性,从实时转托管机制、扩大可交割债券规模、国债ETF、债券融券机制等指出了我国发展国债期货的方向;对做市商制度与债券市场流动性之间的关系进行了研究,从以做市商为核心的债券市场分层制度角度出发对成熟债券市场的做市商制度经验进行了总结,并结合交易所债券市场做市商制度发展的最新实践,指出了我国做市商制度的发展方向。4.对提升我国债券市场流动性提出了政策和建议

关键词：债券市场流动性影响因素投资者结构债券产品创新做市商

基于Transformer的多模态级联文档布局分析网络

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浙江大学学报（工学版） 2024年第2期58卷 317-324,369页

作者：温绍杰吴瑞刚冯超文刘英莉昆明理工大学信息工程与自动化学院云南昆明650500 昆明理工大学云南省计算机技术应用重点实验室云南昆明650500

针对现有方法在文本和图像模态的预训练目标上存在嵌入不对齐,文档图像采用基于卷积神经网络(CNN)的结构进行预处理,流程复杂,模型参数量大的问题,提出基于Transformer的多模态级联文档布局分析网络(MCOD-Net).设计词块对齐嵌入模块(WAE... 详细信息

针对现有方法在文本和图像模态的预训练目标上存在嵌入不对齐,文档图像采用基于卷积神经网络(CNN)的结构进行预处理,流程复杂,模型参数量大的问题,提出基于Transformer的多模态级联文档布局分析网络(MCOD-Net).设计词块对齐嵌入模块(WAEM),实现文本和图像模态预训练目标的对齐嵌入,使用掩码语言建模(MLM)、掩码图像建模(MIM)和词块对齐(WPA)进行预训练,以促进模型在文本和图像模态上的表征学习能力.直接使用文档原始图像,用图像块的线性投影特征来表示文档图像,简化模型结构,减小了模型参数量.实验结果表明,所提模型在PubLayNet公开数据集上的平均精度均值(mAP)达到95.1%.相较于其他模型,整体性能提升了2.5%,泛化能力突出,综合效果最优.

关键词：文档布局分析词块对齐嵌入 Transformer MCOD-Net模型

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锡金海棠子叶再生体系的建立

植物生理学报 2012年第10期48卷 1011-1014页

作者：吴瑞刚杨洪强冉昆张玮玮山东农业大学园艺科学与工程学院作物生物学国家重点实验室山东泰安271018

锡金海棠[Malus sikkimensis(Wenz.)Koehne]是我国稀有植物和优良苹果砧木种质资源。本研究探讨了影响锡金海棠离体再生的条件,建立了锡金海棠子叶高效离体再生体系。结果表明,子叶再生体系的最佳诱导培养基为SC+0.1mg·L-1NAA+2.0mg·L... 详细信息

锡金海棠[Malus sikkimensis(Wenz.)Koehne]是我国稀有植物和优良苹果砧木种质资源。本研究探讨了影响锡金海棠离体再生的条件,建立了锡金海棠子叶高效离体再生体系。结果表明,子叶再生体系的最佳诱导培养基为SC+0.1mg·L-1NAA+2.0mg·L-1TDZ,最佳分化培养基为SC+0.1mg·L-1NAA+1.5mg·L-1TDZ,最佳继代增殖培养基为SC+2.0mg·L-16-BA+0.2mg·L-1NAA,最佳生根培养基为1/2MS+1.0mg·L-1IBA。炼苗后,移入珍珠岩、花生壳与草炭(1:1:1)的基质中,20d移栽成活率高达90%。

关键词：锡金海棠离体再生组织培养外植体

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铝硅合金实体关系抽取数据集的构建方法

浙江大学学报（工学版） 2022年第2期56卷 245-253页

作者：刘英莉吴瑞刚么长慧沈韬昆明理工大学信息工程与自动化学院云南昆明650500 昆明理工大学云南省计算机技术应用重点实验室云南昆明650500

针对材料领域没有适合材料实体关系抽取技术研究工作的公开数据集这一问题,通过研究高硅铝合金喷射沉积文献提出铝硅合金实体关系抽取数据集的构建方法.在材料领域专家的指导下制定铝硅合金实体关系抽取数据集的构建标准,并根据构建标... 详细信息

针对材料领域没有适合材料实体关系抽取技术研究工作的公开数据集这一问题,通过研究高硅铝合金喷射沉积文献提出铝硅合金实体关系抽取数据集的构建方法.在材料领域专家的指导下制定铝硅合金实体关系抽取数据集的构建标准,并根据构建标准对收集的数据进行实体标注和关系标注.在标注完成后,通过数据预处理生成铝硅合金实体关系抽取数据集.通过实体关系联合抽取模型进行实验,验证该数据集可以应用于实体关系抽取任务.与公开数据集相比,材料数据集句子的语义和语法更为复杂,长句更多,导致实体关系联合抽取模型在材料数据集上的表现略差.针对上述问题,在实体关系联合抽取模型上加入自注意力机制,使该模型整体的F1值提高了约5.8%.该数据集的构建方法具有普适性,可以通过该构建方法构建材料数据集.

关键词：数据集构建标准数据标注实体关系联合抽取模型自注意力机制

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苹果砧木‘青砧一号’离体高效再生体系的建立

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植物生理学报 2013年第10期49卷 1053-1056页

作者：吴瑞刚杨洪强沙广利杨萍萍毕润霞山东农业大学园艺科学与工程学院山东泰安271018 作物生物学国家重点实验室山东泰安271018 青岛市农业科学研究院果茶研究所山东青岛266100

‘青砧一号’是杂交育成的苹果矮化砧木新品系。本文探讨了影响‘青砧一号’离体再生的条件,建立了高效离体再生体系。结果表明,以叶片为外植体,远轴面接触培养基,最佳不定芽诱导分化培养基:MS+5.0 mg·L-16-BA+0.3 mg·L-1NAA;最佳继... 详细信息

‘青砧一号’是杂交育成的苹果矮化砧木新品系。本文探讨了影响‘青砧一号’离体再生的条件,建立了高效离体再生体系。结果表明,以叶片为外植体,远轴面接触培养基,最佳不定芽诱导分化培养基:MS+5.0 mg·L-16-BA+0.3 mg·L-1NAA;最佳继代增殖培养基:MS+1.0 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1IAA+20 g·L-1蔗糖,不定芽的增殖倍数为2.7;最佳生根培养基:1/2MS+1.0 mg·L-1IAA+20 g·L-1蔗糖,生根率达100%,平均生根数达5.7条。炼苗后移入珍珠岩、蛭石、草炭等体积混合的基质中,20 d后移栽成活率达60%。

关键词：苹果砧木 '青砧一号’ 不定芽分化再生

番茄茉莉酸-异亮氨酸合成酶基因(SlJAR1)的生物信息学鉴定及表达分析

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分子植物育种 2023年

作者：陈凯张恒赵凤佳王欣戎子怡吴瑞刚河北工程大学园林与生态工程学院

茉莉酸类物质(JAs)是一种新型的植物生长调节剂，它在植物体内广泛存在，并在植物生长发育和响应逆境胁迫反应中起到重要作用。为研究茉莉酸-异亮氨酸合成酶基因(SlJAR1)在调控番茄生长发育中的作用，本研究以粉番茄杂交种(瑞粉882)的... 详细信息

茉莉酸类物质(JAs)是一种新型的植物生长调节剂，它在植物体内广泛存在，并在植物生长发育和响应逆境胁迫反应中起到重要作用。为研究茉莉酸-异亮氨酸合成酶基因(SlJAR1)在调控番茄生长发育中的作用，本研究以粉番茄杂交种(瑞粉882)的叶片为试验材料，基于番茄基因组数据库序列信息克隆了SlJAR1基因，并对其进行了生物信息学和Reverse transcription and real-time PCR (RT-qPCR)技术表达分析。结果表明：该基因编码区长度为1 725 bp，可编码574个氨基酸，等电点为5.68，理论分子质量为64.24 kD；系统发育关系分析显示，SlJAR1与辣椒CaJAR1与亲缘关系最近，且具有JAR1特异性的结构域，属于GH3家族成员；亲疏水性和跨膜结构域的预测表明，JlJAR1为亲水性、稳定性蛋白，具有信号肽剪切位点和跨膜螺旋区，且为非跨膜蛋白；糖基化分析表明，该蛋白具有3个糖基化位点；亚细胞定位预测显示，SlJAR1蛋白定位于叶绿体、细胞质和细胞核；RT-qPCR技术分析其在根系、茎段、花器官、果实和叶片中的表达水平，表明该基因在不同组织部位均有表达，其中在叶片中表达量最高，花器官次之，茎段中最低。随后，通过酵母双杂交试验手段证实了SlJAR1与SlGSTU20之间的相互作用。本研究结果可为探讨SlJAR1在番茄生长发育中的功能奠定理论基础。

关键词：番茄基因克隆生物信息学表达分析蛋白结构

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1020例动态心电图监测结果分析

中国实用心电杂志 1996年第5期17卷 333-334页

作者：吴瑞刚山东济南白马山55360部队门诊部

动态心电图(DCG)是一种可以在活动情况下长时间连续记录心电活动的方法。自92年12月以来采用国产DXJ—2001型动态心电图仪监测1020例患者,现分析如下。 1 资料与方法 1.1 资料 1020例患者均为门诊及住院病人。男667例,女353例,年龄17—8... 详细信息

动态心电图(DCG)是一种可以在活动情况下长时间连续记录心电活动的方法。自92年12月以来采用国产DXJ—2001型动态心电图仪监测1020例患者,现分析如下。 1 资料与方法 1.1 资料 1020例患者均为门诊及住院病人。男667例,女353例,年龄17—81岁。冠心病412例。

关键词：动态心电图监测结果分析房早室早动态心电图仪有症状性心肌缺血心电活动高峰时间心律失常描图机

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活体检测吲哚-3-乙酸的电化学传感器研究

传感器与微系统 2024年第5期43卷 47-50,54页

作者：闫路程李爱学吴瑞刚河北工程大学园林与生态工程学院河北邯郸056038 北京市农林科学院智能装备技术研究中心北京100097

吲哚-3-乙酸(IAA)作为一种重要的植物激素,在植物生长发育的整个过程中起着至关重要的作用。本文根据植物活体检测的实际需要,发展了适合植物茎秆活体检测的四阵列电极及用于植物果实活体检测的六阵列电极,通过一步法在铂(Pt)丝工作电... 详细信息

吲哚-3-乙酸(IAA)作为一种重要的植物激素,在植物生长发育的整个过程中起着至关重要的作用。本文根据植物活体检测的实际需要,发展了适合植物茎秆活体检测的四阵列电极及用于植物果实活体检测的六阵列电极,通过一步法在铂(Pt)丝工作电极上沉积铂纳米颗粒(PtNPs)和还原氧化石墨烯(rGO)纳米复合膜,从而增强催化效果,提高生物传感器的灵敏度。实验结果表明,所研制的传感器在IAA浓度0.1~200μmol/L范围内,具有良好的线性关系,相关系数为R~2=0.986,检测限为0.01μmol/L(S/N=3)。进一步利用所制备的传感器活体检测了黄瓜茎秆和黄瓜果实(CF)内的IAA含量,表明该传感器在植物生理状态的活体检测中具有重要应用前景。

关键词：活体吲哚-3-乙酸电化学传感器