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白细胞介素-6对视网膜神经节细胞保护作用的研究进展

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中华实验眼科杂志 2015年第10期33卷 957-960页

作者：吕红丽吴瑜瑜福建医科大学附属第二医院眼科泉州362000

目前,青光眼的发病机制仍未明确,眼压升高、缺血、神经营养因子的剥夺、胶质细胞的激活、谷氨酸兴奋性反应等多种机制均可以促进青光眼性视网膜神经节细胞（RGCs）凋亡.通过干预神经细胞的凋亡途径从而防止RGCs损伤已经成为青光眼视神... 详细信息

目前,青光眼的发病机制仍未明确,眼压升高、缺血、神经营养因子的剥夺、胶质细胞的激活、谷氨酸兴奋性反应等多种机制均可以促进青光眼性视网膜神经节细胞（RGCs）凋亡.通过干预神经细胞的凋亡途径从而防止RGCs损伤已经成为青光眼视神经保护治疗的重点.近年来研究表明,胶质细胞分泌的白细胞介素-6（IL-6）和睫状神经营养因子（CNTF）具有同样的作用,即在视神经损伤和眼内炎症刺激后,可促进轴突生长,提高RGCs的存活率.视网膜在视神经损伤或眼内炎症刺激后可表达IL-6,IL-6与RGCs上的IL-6受体结合后,通过JAK/STAT3和PI3K/Akt/mTOR 2种途径,增加热休克蛋白（HSPs）的表达,解除抑制性髓磷脂基质对受损神经轴突再生的抑制作用,抵抗凋亡因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和NO的作用,并刺激再生相关基因Sprr1a和Gap-43的表达,从而发挥其对RGCs的保护作用.本文就IL-6对RGCs保护作用的相关研究进展进行综述.

关键词：白细胞介素-6 视网膜神经节细胞青光眼

TGF—β2及Myocilin蛋白在原发性开角型青光眼的研究进展

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中国实用眼科杂志 2011年第8期29卷 747-750页

作者：陈婉珠吴瑜瑜泉州市福建医科大学附属第二医院眼科福建362000

转化生长因子-β2（transforming growth factor—β2，TGF—β2）是参与原发性开角型青光眼（primary open—angle glaucoma，POAG）发病机制的一个重要细胞因子，TGF—β2对小梁网的作用机制成为近年来研究的一个热点。Myoeilin是第... 详细信息

转化生长因子-β2（transforming growth factor—β2，TGF—β2）是参与原发性开角型青光眼（primary open—angle glaucoma，POAG）发病机制的一个重要细胞因子，TGF—β2对小梁网的作用机制成为近年来研究的一个热点。Myoeilin是第一个被证明与POAG相关的基因，在许多眼内、眼外组织中均有表达，特别是小梁网。在过去的十几年里，学者们对Myocilin蛋白在正常眼或青光眼的功能方面做了很多的研究。此文将以TGF—β2对小梁网作用机制以及Myocilin蛋白在POAG发病机制中的研究为综述。

关键词：转化生长因子-β2 Myocilin 原发性开角型青光眼

CYP1B1基因突变与原发性开角型青光眼发病关系的研究进展

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中华实验眼科杂志 2014年第7期32卷 654-658页

作者：黄一鸿吴瑜瑜福建医科大学附属第二医院眼科泉州362000

原发性青光眼包括原发性开角型青光眼（POAG）、原发性闭角型青光眼（PACG）及原发性婴幼儿青光眼（PCG）.目前认为原发性青光眼的发病是遗传因素、环境因素、生活习惯等多种因素综合作用的结果,其中遗传因素,尤其是基因突变,在青光眼... 详细信息

原发性青光眼包括原发性开角型青光眼（POAG）、原发性闭角型青光眼（PACG）及原发性婴幼儿青光眼（PCG）.目前认为原发性青光眼的发病是遗传因素、环境因素、生活习惯等多种因素综合作用的结果,其中遗传因素,尤其是基因突变,在青光眼的发病过程中起着重要作用.自1997年发现CYP1B1基因为PCG的致病基因以来,关于CYP1B1基因突变与青光眼发病关系的研究成为青光眼遗传和基因研究的热点.随着研究的逐渐深入,许多学者认为CYP1B1基因也是POAG致病基因的候选基因.本研究对近十余年来对CYP1 B1基因的结构和功能以及CYP1B1基因突变与POAG发病及进展关系的研究进展进行总结.

关键词：开角型青光眼遗传 DNA突变疾病易感基因

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sCD44分子与原发性开角型青光眼

中国实用眼科杂志 2010年第5期28卷 429-431页

作者：陈燕萍吴瑜瑜福建医科大学附属第二医院眼科泉州362000

随着对可溶性黏附分子CD44（sCD44）生物学功能和化学本质的深入认识,人们发现sCD44分子参与了原发性开角型青光眼（primary open-angle glaucoma,POAG）的病理过程,它可以引起小梁网细胞结构和功能异常、细胞凋亡,其对视网膜神经节细... 详细信息

随着对可溶性黏附分子CD44（sCD44）生物学功能和化学本质的深入认识,人们发现sCD44分子参与了原发性开角型青光眼（primary open-angle glaucoma,POAG）的病理过程,它可以引起小梁网细胞结构和功能异常、细胞凋亡,其对视网膜神经节细胞具有毒性作用.文中就sCD44分子与POAG关系的研究进展作一综述.

关键词：青光眼,开角型小梁网 scD44分子

TGF-β2对体外培养人眼小梁细胞CD44s表达的影响及意义

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TGF-β2对体外培养人眼小梁细胞CD44s表达的影响及意义

作者：吴瑜瑜福建医科大学

学位级别：硕士

目的探讨体外培养人眼小梁细胞(human trabecular cells，HTCs)的方法，观察其生物学特性，并在此基础上研究人眼小梁细胞是否表达黏附分子CD44以及转化生长因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)对体外培养人眼小梁细胞CD44... 详细信息

目的探讨体外培养人眼小梁细胞(human trabecular cells，HTCs)的方法，观察其生物学特性，并在此基础上研究人眼小梁细胞是否表达黏附分子CD44以及转化生长因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)对体外培养人眼小梁细胞CD44表达的影响及其意义。方法采用组织块培养法进行体外人眼小梁细胞的培养，运用二甲基噻唑二苯基四唑溴盐([3—(4，5—dimethylthiazolz—y1)—2，5—dipheny ltetrazolium bramide]，MTT)比色法，倒置显微镜、透射电镜、免疫细胞化学法等方法观察体外培养的人眼小梁细胞的生物学特性并进行细胞鉴定。(2)采用流式细胞术定量和RT-PCR半定量检测体外培养的人眼小梁细胞是否表达黏附分子CD44及其表达量。(3)采用流式细胞术定量和RT-PCR半定量检测体外培养的人眼小梁细胞经浓度为00ng／ml(对照组)、40ng／ml、80ng／ml、120ng／ml的TGF-β处理24小时后，细胞表达黏附分子CD44的量。结果(1)组织块培养10-15天后可见细胞从其边缘向外生长，倒置显微镜下呈梭形、圆形、椭圆形，并有多个突起，电镜下可见表面有较多的微绒毛，细胞间缝隙连接，胞质内见较多次级溶酶体。(2)免疫细胞化学法检测纤维黏连蛋白(fibronectin，FN)、层黏连蛋白(Laminin，LN)和神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)染色阳性，传三代细胞均表现为胞浆呈红色。(3)流式细胞术定量检测结果显示体外培养的人眼小梁细胞表达黏附分子CD44，其平均荧光强度为79.82±21.94;RT-PCR法CD44／G3PDH像素值比值为0.59±0.76。(4)运用流式细胞术对经浓度为40ng／ml、80ng／ml、120ng／ml的TGF-β处理的实验组检测，其表达黏附分子CD44平均荧光强度为56.53±12.74、74.11±9.94及37.54±8.1低于对照组的79.82±21.94，结果经Levene方差齐性检验，由于方差齐性，故采用单因素四水平方差分析各组间差异，LSD法进行两两组间多重比较，其总F值为12.239，P=0.000＜0.001，差异有统计学意义。(5)运用RT-PCR法对经浓度为40ng／ml、80ng／ml、120ng／ml的TGF-β处理的实验组检测，其CD44／G3PDH像素值比值分别为0.51±0.76、0.30±0.84以及0.06±0.04与对照组0.59±0.76比较，其总F值为135.630，P=0.000＜0.001，差异有统计学意义。结论(1)掌握体外细胞培养技术和入眼小梁细胞的生长特点、超微结构以及免疫细胞化学染色等特点，能够成功地进行人眼小梁细胞的体外培养及鉴定。(2)体外培养的人眼小梁细胞高表达黏附分子CD44。(3)转化生长因子-β能抑制人眼小梁细胞表达黏附分子CD44，可能是引起小梁细胞丢失、功能异常的原因之一。

关键词：细胞培养小梁细胞青光眼 TGF-β2 CD44s

甘肃超细毛羊胎儿发育中后期毛囊形态发生中Wnt10b、β-catenin及FGF18基因表达研究

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甘肃超细毛羊胎儿发育中后期毛囊形态发生中Wnt10b、β-catenin及...

作者：吴瑜瑜甘肃农业大学

学位级别：硕士

毛囊发育形态结构特征及发育规律不仅是其生物学特征的重要内容，而且是皮肤内相关信号分子相互作用的结果。毛囊形态发生依赖于一系列的信号通路分子的调控，这些信号分子介导真皮细胞和上皮细胞之间的相互作用，诱导、激发两个细胞群... 详细信息

毛囊发育形态结构特征及发育规律不仅是其生物学特征的重要内容，而且是皮肤内相关信号分子相互作用的结果。毛囊形态发生依赖于一系列的信号通路分子的调控，这些信号分子介导真皮细胞和上皮细胞之间的相互作用，诱导、激发两个细胞群体的有序增殖和分化，并最终形成发育成熟的毛囊，其中Wnt10b/β-catenin、FGF18基因在毛囊发育过程中发挥重要作用。本研究以甘肃超细毛羊胚胎体侧部皮肤为材料，采用组织学技术、实时荧光定量PCR技术、免疫组化技术，开展甘肃超细毛羊胎儿皮肤组织形态结构变化规律、Wnt10b/β-catenin、FGF18基因在皮肤毛囊中转录、蛋白水平的表达规律的研究，为阐明Wnt10b/β-catenin、FGF18基因在甘肃超细毛羊毛囊形态发生、发育过程中的分子调控机制提供理论基础。研究结果如下： 1.甘肃超细毛羊胎儿体侧皮肤中，胎龄第81d胎儿表皮发育完整，真皮逐渐分化出乳头层和网状层。胎儿体侧部初级毛囊原始体最早发生在胎龄第87d，次级毛囊的原生体最早出现在初级毛囊内侧的膨大部，原生体可进一步发育形成次级毛囊的毛芽。在原始次级毛囊发育后期，可分化出再分化次级毛囊。初级毛囊在胎龄第102～123d发育速度最快，胎龄第123～141d发育变缓;次级毛囊原始体最早发生在胎龄第96d，在胎龄第102d17d次级毛囊发育速度最快。胎龄第111d，毛囊内出现毛囊尖端角质化纤维，在胎龄第117～120d可见绒毛穿出体表。形成的毛囊群主要为三元毛囊群，胎龄第126dS/P达到最高值9.96。 2.甘肃超细毛羊胎儿体侧皮肤中，采用定量RT-PCR技术研究结果显示在胎龄第87d08d胎儿皮肤中Wnt10b基因mRNA表达量逐渐升高，在胎龄第108d达到最大值43.652±0.425;在胎龄第117d41d，Wnt10b基因mRNA表达量为39.747±0.6287.57±0.216。免疫组化研究结果显示在胎龄第108d11d，Wnt10b蛋白在毛芽细胞质中呈阳性表达，而细胞核呈阴性表达;在胎龄第117d23d，毛囊的外根鞘、内根鞘及毛干细胞质细胞核中Wnt10b蛋白呈强阳性表达，少量毛母质细胞质呈阳性表达，而真皮乳头细胞质细胞核呈阴性表达。 3.甘肃超细毛羊胎儿胎龄第87d41d，采用定量RT-PCR技术研究结果显示β-catenin基因mRNA相对表达量为1±0.268.163±0.133。免疫组化技术研究结果显示在胎龄第87d41d，β-catenin蛋白在胎儿皮肤上表皮细胞质细胞核中呈阳性表达;在胎龄第108d11d，毛芽结构细胞质细胞核中β-catenin蛋白表达呈阴性表达;在胎龄第117d35d，毛囊中内根鞘、外根鞘及毛干部细胞质细胞核中β-catenin呈阳性表达，毛母质和真皮乳头细胞质细胞核呈阴性表达。 4.甘肃超细毛羊胎儿皮肤毛囊发育过程中，RT-PCR研究结果显示，在胎龄第87d08d，FGF18mRNA相对表达量逐渐升高，在胎龄第108d达到最大值13.67±0.207;在胎龄第111d，FGF18mRNA相对表达量下降至2.017±0.421，到胎龄第141d，FGF18mRNA相对表达量为11.67±0.523。免疫组化技术研究显示FGF18蛋白在胎儿表皮、真皮细胞质细胞核中呈阳性表达;在102d08d，毛芽细胞细胞质中FGF18蛋白呈强阳性表达，细胞核呈阴性表达。在111d23d，FGF18蛋白在毛囊的外根鞘、内根鞘及毛干细胞质细胞质中呈强阳性表达，FGF18蛋白在毛母质细胞质呈阳性表达，少量真皮乳头细胞质呈阳性表达。研究结果表明：在甘肃超细毛羊中再分化次级毛囊来源于原始次级毛囊或再分化次级毛囊的颈部膨大部分支而不是直接来源于表皮，次级毛囊密度/初级毛囊密度比值大小可直接反应羊毛品质。Wnt10b在毛囊的形态发生和分化中发挥重要作用。β-catenin在胚胎皮肤毛囊发生、发育过程中起维持上皮-间质中其它信号转导的作用。FGF18在胎儿皮肤形成及其皮肤附属物形态发生、发育过程中发挥了重要作用。但FGF18在毛囊形态发生及分化过程中的分子调控机制还有待进一步的研究。

关键词：甘肃超细毛羊胚胎毛囊形态结构 Wnt10b/β-catenin FGF18

白细胞介素18对实验性脉络膜新生血管的抑制作用及其应用前景

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中华眼底病杂志 2016年第4期32卷 457-459页

作者：肖燕玲吴瑜瑜福建医科大学附属第二医院眼科福州362000

白细胞介素（IL）-18是一种缺乏信号肽的非活性前体蛋白，有调节视网膜病理性新生血管的作用。IL-18通过干扰素-7、凝血酶致敏蛋白等途径，抑制实验性脉络膜新生血管（CNV）的形成。但IL-18抑制CNV形成的具体机制尚不清楚。推测可能与... 详细信息

白细胞介素（IL）-18是一种缺乏信号肽的非活性前体蛋白，有调节视网膜病理性新生血管的作用。IL-18通过干扰素-7、凝血酶致敏蛋白等途径，抑制实验性脉络膜新生血管（CNV）的形成。但IL-18抑制CNV形成的具体机制尚不清楚。推测可能与其直接作用于血管内皮细胞和上皮细胞发挥其抗血管生成及降低血管通透性作用以降低血管内皮生长因子（VEGF）水平有关。研究表明，外源性重组成熟IL-18对视网膜色素上皮细胞的活性：）己毒副作用；IL-18的抗VEGF作用在人体使用安全有效。IL-18单独或联合抗VEGF药物使用对于改善实验性CNV预后表现出良好应用前景。但有关IL-18对CNV的治疗价值仍有待进一步严谨的临床试验研究来探讨。

关键词：脉络膜新生血管化/治疗白细胞介素18/拮抗剂和抑制剂综述

纤维连接蛋白对原发性开角型青光眼小梁网细胞整合素α5β_1表达的影响

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江苏医药 2012年第14期38卷 1619-1621,F0002页

作者：胡艳吴瑜瑜福建医科大学附属第二临床医学院 362000 江西省宜春市人民医院眼科

目的探讨纤维连接蛋白(FN)对体外培养的原发性开角型青光眼(POAG)患者小梁网细胞整合素α5β1表达及细胞存活的影响。方法体外培养POAG患者小梁网细胞,分别加入不同浓度的FN(0、5、10、20、40、100μg/ml)培养。采用免疫细胞化学法观察... 详细信息

目的探讨纤维连接蛋白(FN)对体外培养的原发性开角型青光眼(POAG)患者小梁网细胞整合素α5β1表达及细胞存活的影响。方法体外培养POAG患者小梁网细胞,分别加入不同浓度的FN(0、5、10、20、40、100μg/ml)培养。采用免疫细胞化学法观察各组细胞整合素α5β1的表达及细胞存活情况。结果随着FN浓度增加,整合素α5β1表达增强。在FN低浓度(0-40μg/ml)范围内,阳性细胞面积增多;而在FN 100μg/ml时阳性细胞面积减少。结论 FN影响小梁网细胞外基质,参与眼内压的调节。

关键词：小梁网细胞原发性开角型青光眼纤维连接蛋白整合素α5β1

Myocilin蛋白对青光眼小梁网细胞FN表达和黏附能力的抑制作用

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国际眼科杂志 2018年第3期18卷 418-422页

作者：黄一鸿吴瑜瑜福建医科大学附属第二医院眼科中国福建省泉州市362000

目的:分析不同浓度重组myocilin蛋白对体外培养的原发性开角型青光眼(primary open angle glaucoma,POAG)患者小梁网细胞纤维连接蛋白(fibronectin,FN)表达及对黏附功能的影响。方法:体外培养POAG患者小梁网细胞,分别加入含重组myocili... 详细信息

目的:分析不同浓度重组myocilin蛋白对体外培养的原发性开角型青光眼(primary open angle glaucoma,POAG)患者小梁网细胞纤维连接蛋白(fibronectin,FN)表达及对黏附功能的影响。方法:体外培养POAG患者小梁网细胞,分别加入含重组myocilin蛋白终浓度为0(对照组)、0.5、1、1.5、2、2.5μg/mL的无血清培养基,运用Western blot、ELISA法分别检测小梁网细胞内和细胞培养液中FN的表达水平;并运用CCK-8法检测myocilin蛋白对POAG小梁网细胞黏附的影响。结果:Western blot检测结果:FN/β-actin比值分别为34.8±0.6、33.4±1.0、28.9±0.8、21.6±0.9、15.9±1.1、11.9±0.8;0.5μg/mL组与对照组相比,差异无统计学意义(P=0.092);1.0、1.5、2、2.5μg/mL组与对照组比较,差异有统计学意义(F=346.131,P<0.05)。ELISA法检测各组细胞培养液中FN浓度为:0.4654±0.0039、0.4596±0.0032、0.4216±0.0037、0.4214±0.0039、0.4043±0.0039、0.3806±0.0071μg/mL;0.5μg/mL组与对照组相比,差异无统计学意义(P=0.120);1.0、1.5、2、2.5μg/mL组与对照组比较,差异有统计学意义(F=176.054,P<0.05)。运用CCK-8法检测各组细胞吸光度均值分别为1.98140.1624、1.8848±0.0267、1.4895±0.0916、1.4120±0.1087、1.3392±0.1391、1.0310±0.0639;0.5μg/mL组与对照组相比,差异无统计学意义(P=0.300);1、1.5、2、2.5μg/mL组与对照组相比,差异有统计学意义(F=177.818,P<0.05)。结论:Myocilin蛋白能抑制POAG小梁网细胞FN的表达,并呈现一定的剂量依赖性;myocilin蛋白可降低POAG小梁网细胞的黏附能力。

关键词：细胞培养 myocilin蛋白原发性开角型青光眼表达黏附